GB∕T 39670-2020 寵物飼料中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法

B46中華人民共和國國家標準寵物飼料中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法L-2020-12-14發(fā)布2021-07-01實施國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會ⅠGB／T39670—2020本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術委員會(SAC/TC76)提出并歸口。本標準起草單位：中華人民共和國南京海關、中華人民共和國淮安海關、江蘇海企長城股份有限公司、淮陰師范學院。1GB／T39670—2020寵物飼料中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法本標準規(guī)定了寵物飼料中硝基呋喃類代謝物(3-氨基-2-唑酮、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙內酰脲、氨基脲）殘留量的液相色譜-串聯(lián)質譜測定方法。本標準適用于以動物源性成分為主要原料制成的寵物飼料中硝基呋喃類代謝物(3-氨基-2-唑酮、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙內酰脲、氨基脲）殘留量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T20195動物飼料試樣的制備3縮略語下列縮略語適用于本文件。AOZ:3-氨基-2-唑酮(3-amino-2-oxalidinone)SEM：氨基脲(semicarbazide)試樣經三氯乙酸沉淀蛋白質，游離出硝基呋喃類代謝物，在避光條件下用鄰硝基苯甲醛衍生化、乙酸乙酯提取后，用液相色譜-串聯(lián)質譜儀檢測，同位素內標法定量。5試劑或材料除非另有規(guī)定外，僅使用分析純試劑。5.1水：GB/T6682,一級。5.6二甲基亞砜。2GB／T39670—20205.9鄰硝基苯甲醛。(5.6)中?，F(xiàn)用現(xiàn)配。(5.4),用水定容至1000mL。靜置分層后，棄去乙腈層。5.16標準品：AOZ(CAS:80-65-9)、AMOZ(CAS:43056-63-9)、AHD·HCl(CAS:2827-56-7)、SEM·5.18標準儲備溶液：分別準確稱取適量硝基呋喃類代謝物標準品(5.16),用甲醇(5.5)溶解定容，配制510mL存，有效期為7天。5.21同位素內標儲備溶液：分別準確稱取適量硝基呋喃類代謝物同位素內標(5.17),用甲醇(5.5)溶解下避光保存，有效期為3個月。5光保存，有效期為7天。6儀器設備6.1液相色譜-串聯(lián)質譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。6.3水浴恒溫振蕩器：37℃±1℃。6.4離心機：轉速不低于8000r/min。6.5渦旋混勻器。6.6氮吹儀。3GB／T39670—2020徑篩，混勻裝于密封容器，備用。于密封容器，備用。-18℃8試驗步驟54mL558mL8.3標準曲線的制備50mL8.4.1液相色譜參考條件流動相：A：乙腈(5.2),B：乙酸銨緩沖溶液(5.13),梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序時間/minA/%B/%5504GB／T39670—20208.4.2質譜參考條件電離方式：電噴霧電離，正離子模式(ESI+);檢測方式：多反應監(jiān)測(MRM);電噴霧電(IS)壓：5500V;離子源溫度(TEM):500℃;碰撞室出口電壓(CXP):6V。多反應監(jiān)測(MRM)離子對、駐留時間、去簇電壓和碰撞能量見表2。表2硝基呋喃代謝物及內標的多反應監(jiān)測（MRM）離子對、駐留時間、去簇電壓及碰撞能量的參考值被測物名稱≈)駐留時間/ms去簇電壓(DP)/V碰撞能量(CE)/VAOZ236.0>104.1AMOZAHDSEM209.0>192.2D4-AOZ240.1>134.1D5-AMOZ252.0>134.1212.0>168.1a為定量離子。8.4.3標準系列溶液和試樣溶液測定在儀器的最佳條件下，分別取標準系列溶液(8.3)和試樣溶液(8.2)上機測定。硝基呋喃類代謝物標準溶液的定量離子色譜圖參見附錄A。之內。根據表2選擇的定性離子對，比較試樣譜圖中硝基呋喃類代謝物定性離子的相對離子豐度與濃度接近的標準系列溶液中對應的定性離子的相對離子豐度，若偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的硝基呋喃類代謝物。5GB／T39670—2020表3定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差%>50>20~50>10~20≤10%±20±25±30±50以硝基呋喃類代謝物的濃度為橫坐標，硝基呋喃類代謝物和內標峰面積比值為縱坐標，繪制標準曲線，標準曲線的相關系數(shù)應不低于0.99。試樣溶液與標準溶液中硝基呋喃類代謝物的響應值均應在儀器檢測的線性范圍內，如超出范圍，應重新試驗或將試樣溶液和標準系列溶液做相應稀釋后重新測定。9試驗數(shù)據處理計算：式中：A—試樣溶液中硝基呋喃類代謝物的峰面積；′sAis—試樣溶液中硝基呋喃類代謝物同位素內標的峰面積；As—標準溶液中硝基呋喃類代謝物的峰面積；′測定結果以平行測定的算術平均值表示，保留3位有效數(shù)字。10精密度6GB／T39670—2020附錄A（資料性附錄）硝基呋喃類代謝物標準溶