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DB21DB21/T2627—2016魚淋巴囊腫病毒實時定量PCR檢測方法Thereal-timePCRdetectionmethodforLymphocystisdiseasevirusoffish遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB21/T2627—2016本標準起草單位：遼寧出入境檢驗檢疫局；山東出入境檢驗檢疫局；大本標準主要起草人：李葉，岳志琴，杜雄偉，1DB21/T2627—2016件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和SN/T2123出入境動物檢疫實驗室樣品采集、運輸、Ct值每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷DNA脫氧核糖核酸。4儀器、耗材和試劑4.1.3高壓滅菌器4.1.6生物安全柜2DB21/T2627—20164.2.8檢測引物和探針，預(yù)計擴增產(chǎn)物82bp。正義引物P1：5’-CAAGCTATACAATCCAATT反義引物P2：5’-CAGCAGCAATACCCGG探針：5’FAM-TTCTCCTGTAATCTTTGACGGTGGAATTGCT-TAMRA-3’注：除特別說明以外，本標準所用試劑均為分析純，實驗用水為GB/T6682后直接送實驗室檢測。按GB/T18088和30min或常溫下1h，使其充分液化；若液化不完全，可適當再加入少量4％的NaOH；將液化后的在反應(yīng)混合物配制區(qū)進行。從試劑盒中取出相應(yīng)的熒光PCR反應(yīng)液、Taq酶，在室溫下融化后，2000r/min離心5sec。設(shè)被檢樣品總數(shù)為n，PCR反應(yīng)體系中各成分3DB21/T2627—20162.5MgSO4(25mM)2.0將總樣品反應(yīng)組分充分混勻，向每個熒光PCR管中各分裝15μL，在樣本處理區(qū)進行。在各設(shè)定的熒光PCR管中分別加入5.3中制備的DNA溶液各10μL直接讀取檢測結(jié)果。閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好
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