藥物的鑒別實(shí)驗(yàn)

關(guān)于藥物的鑒別實(shí)驗(yàn)一、概述

依據(jù)藥典進(jìn)行的藥物分析主要有三大項(xiàng)：鑒別、檢查和含量測(cè)定藥典所收載的藥物項(xiàng)下的鑒別試驗(yàn)方法，僅適用于貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物，用以證實(shí)是否為其所標(biāo)示的藥物。這些試驗(yàn)方法不能賴以鑒別未知物

第2頁,共33頁，星期六，2024年，5月（一）性狀：反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀、嗅、味、溶解度以及物理常數(shù)(mp.bp.等)。（二）一般鑒別試驗(yàn)（generalidentificationtest）：證實(shí)其是某一類藥物，而不能證實(shí)是哪一種藥物。僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物，如為數(shù)種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)不適用。無機(jī)藥物陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)有機(jī)藥物典型的官能團(tuán)反應(yīng)第3頁,共33頁，星期六，2024年，5月（三）專屬鑒別試驗(yàn)（specificidentificationtest）：根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同,選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)，來鑒別藥物真?zhèn)蔚?。證實(shí)其是某一種藥物。例如，經(jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗(yàn)，證實(shí)某一藥物為鈉鹽，但不能辨認(rèn)是氯化鈉、苯甲酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。要想最后證實(shí)被鑒別的物質(zhì)到底是哪一種藥物，必須在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，再進(jìn)行專屬鑒別試驗(yàn)，方可確認(rèn)。第4頁,共33頁，星期六，2024年，5月二、鑒別反應(yīng)的條件（一）溶液的濃度（二）溶液的酸堿度（三）溶液的溫度（四）共存物質(zhì)干擾（五）反應(yīng)介質(zhì)（六）試驗(yàn)時(shí)間第5頁,共33頁，星期六，2024年，5月三、鑒別試驗(yàn)的靈敏度（一）反應(yīng)靈敏度和空白試驗(yàn)1.反應(yīng)靈敏度（sensitivity）

*最低檢出量（minimumdetectablequantity）（又稱檢出限量）：以m表示，就是應(yīng)用某一反應(yīng)，在一定的條件下，能夠觀測(cè)出的供試品的最小量，其單位通常用微克（g）表示。

第6頁,共33頁，星期六，2024年，5月*最低檢出濃度（minimumdetectableconcentration）：以1:G或1:V表示，是應(yīng)用于某一反應(yīng)，在一定條件下，能夠觀測(cè)出供試品的最低濃度。兩者間滿足以下關(guān)系：m=(v×106)/V第7頁,共33頁，星期六，2024年，5月

2.空白試驗(yàn)（blanktest）:就是在與供試品鑒別試驗(yàn)完全相同的條件下，除不加供試品外，其它試劑同樣加入進(jìn)行的試驗(yàn)。

（二）提高靈敏度的方法1.加入與水不相溶的有機(jī)溶劑

2.改進(jìn)觀測(cè)方法

第8頁,共33頁，星期六，2024年，5月四、鑒別方法

（一）物理鑒別法物理常數(shù)如沸點(diǎn)、熔點(diǎn)、相對(duì)密度、比旋度等均可作為鑒別藥物的依據(jù)，常用于純度較高的原料藥的鑒別。如、可可堿、氨茶堿、磷酸可待因等，測(cè)定熔點(diǎn)是一種簡(jiǎn)便、專屬的鑒別方法。對(duì)于某些熔點(diǎn)過高、對(duì)熱不穩(wěn)定、熔點(diǎn)不敏銳的藥物，可通過加入試劑，使藥物與試劑反應(yīng)生成衍生物再測(cè)定熔點(diǎn)的方法預(yù)于測(cè)定—制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)法。第9頁,共33頁，星期六，2024年，5月1.干法焰色試驗(yàn)

加熱分解

取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，使火焰顯出特殊的顏色。在適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體。（二）化學(xué)鑒別法第10頁,共33頁，星期六，2024年，5月2.濕法

呈色或褪色反應(yīng)沉淀生成反應(yīng)

熒光反應(yīng)

氣體生成反應(yīng)

第11頁,共33頁，星期六，2024年，5月三氯化鐵呈色反應(yīng)---酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基異羥肟酸鐵反應(yīng)---多為芳酸及其酯類、酰胺類茚三酮呈色反應(yīng)---脂肪氨基重氮化-偶合顯色反應(yīng)---芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)常見的呈色反應(yīng)第12頁,共33頁，星期六，2024年，5月與重金屬離子的沉淀反應(yīng)---如巴比妥類藥物與銅鹽、鈷鹽、銀鹽生成沉淀的反應(yīng)；與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)-多為生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽；其它沉淀反應(yīng)。常見的呈色反應(yīng)有：第13頁,共33頁，星期六，2024年，5月藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光；藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光；藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射出熒光；藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。常見的熒光發(fā)射形式有以下類型第14頁,共33頁，星期六，2024年，5月大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。常有氣體生成的藥物第15頁,共33頁，星期六，2024年，5月（三）光譜鑒別法1．紫外光譜鑒別法

核對(duì)λmax和λmin；規(guī)定一定濃度的供試液在λmax處的吸收度；規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)法；規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法；經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。第16頁,共33頁，星期六，2024年，5月

2.紅外光譜鑒別法標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法：中國藥典（2005年版)BP(2005年版)對(duì)照品法：USP(29)。（一種專屬性很強(qiáng)、應(yīng)用較廣）第17頁,共33頁，星期六，2024年，5月（四）色譜鑒別法

1.薄層色譜鑒別法采用對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）比較法，要求二者的Rf值一致；2.高效液相色譜鑒別法要求供試品和對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間應(yīng)一致含量測(cè)定方法為內(nèi)標(biāo)法；3.氣相色譜鑒別法4.紙色譜鑒別法逐漸被薄層色譜法所取代5.高效毛細(xì)管電泳第18頁,共33頁，星期六，2024年，5月（五）生物學(xué)方法

對(duì)于某些有特殊生物效應(yīng)的藥物，可根據(jù)藥物的特殊生理活性將藥物通過各種途徑給予微生物、動(dòng)物或動(dòng)物的離體器官，觀察藥理作用以鑒別藥物，多用抗生素及生化藥物的鑒別。1.儀器方法的數(shù)量大大增加，尤其是IR和HPLC；2.制劑廣泛采用IR法鑒別；（六）藥物鑒別方法的新動(dòng)向第19頁,共33頁，星期六，2024年，5月二、鑒別試驗(yàn)與原理（一）、有機(jī)氟化物取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法（附錄VII

C）進(jìn)行有機(jī)破壞,用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，待燃燒完全后，充分振搖；取吸收液2ml，加茜素氟藍(lán)試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍(lán)紫色；同時(shí)做空白對(duì)照試驗(yàn)。反應(yīng)式見p16

第20頁,共33頁，星期六，2024年，5月（二）、有機(jī)酸鹽1、水楊酸鹽

加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色;加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。2、醋酸鹽

加硫酸和乙醇后，加熱，即分解發(fā)生醋酸乙酯的香氣；取供試品的中性溶液，加三氯化鐵試液1滴，溶液呈深紅色,加稀無機(jī)酸，紅色即退去。第21頁,共33頁，星期六，2024年，5月3.苯甲酸鹽

取供試品的中性溶液，加三氯化鐵試液，即生成赭色沉淀；加稀鹽酸，變?yōu)榘咨恋?；取供試品，置干燥試管中，加硫酸后，加熱，不炭化，但析出苯甲酸，在試管?nèi)壁凝結(jié)成白色升華物。

4.枸櫞酸鹽

加稀硫酸數(shù)滴,加熱至沸，加高錳酸鉀試液數(shù)滴振搖，紫色即消失；溶液分成兩份，1份中加硫酸汞試液1滴,另1份中逐滴加入溴試液，均生成白色沉淀；第22頁,共33頁，星期六，2024年，5月取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀即游離并附在管的內(nèi)壁成銀鏡。取供試品溶液，加醋酸成酸性后，加硫酸亞鐵試液1滴和過氧化氫試液1滴，待溶液退色后，用氫氧化鈉試液堿化，溶液即顯紫色。5.酒石酸鹽

第23頁,共33頁，星期六，2024年，5月（四）托烷生物堿類

取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘?jiān)爬?，加乙?～3滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小顆，即顯深紫色。（三）芳香第一胺類

取供試品約50mg，加稀鹽酸1ml,必要時(shí)緩緩煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性β－萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。第24頁,共33頁，星期六，2024年，5月（五）常見無機(jī)離子的鑒別1.鈉鹽焰色反應(yīng)

火焰顯黃色

取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色沉淀。

第25頁,共33頁，星期六，2024年，5月2.鉀鹽焰色反應(yīng)：焰色反應(yīng)顯紫色，但有少量鈉鹽混存時(shí)，須隔藍(lán)色玻璃透視；取供試品，加熱熾灼，除去可能含有的銨鹽，放冷后，加水溶解，再加0.1%四苯硼鈉溶液與醋酸，即生成白色沉淀。第26頁,共33頁，星期六，2024年，5月3.鈣鹽燃燒火焰顯磚紅色

取供試品溶液（1→20），加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至呈酸性，加草酸銨試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于鹽酸。白色焰色反應(yīng)第27頁,共33頁，星期六，2024年，5月焰色反應(yīng)：鋇的火焰光譜在可見光區(qū)有533.56、513、488nm幾條主要譜線，其中以533.56nm波長(zhǎng)的譜線最強(qiáng),故鋇鹽的燃燒火焰顯黃綠色，用綠色玻璃透視火焰顯藍(lán)色。取供試品溶液，加稀硫酸，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。4.鋇鹽

白色

Ba2++SO42-BaSO4

第28頁,共33頁，星期六，2024年，5月5.銨鹽取供試品，加過量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變藍(lán)，并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色。黑色

第29頁,共33頁，星期六，2024年，5月取供試品溶液，加堿性碘化汞鉀試液1滴，即生成紅棕色沉淀。

紅棕色

第30頁,共33頁，星期六，2024年，5月（六）無機(jī)酸根1.氯化物1)取供試液品溶液，加硝酸使成酸性后,加硝酸銀試液,即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加硝酸，沉淀復(fù)生成。如供試品為生物堿或其他有機(jī)堿的鹽酸鹽，須先加氨試液使成堿性，將析出的沉淀濾過除去，取濾液進(jìn)行