藥物分析：第三章 藥物的雜質(zhì)檢查

藥物分析：第三章藥物的雜質(zhì)檢查雜質(zhì)：影響藥物純度的物質(zhì)控制雜質(zhì)原因：由于藥物中的雜質(zhì)無治療作用，或者影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至危害人們的健康，因此，必須對藥物中的雜質(zhì)進(jìn)行檢查，以保證藥品質(zhì)量和臨床用藥安全、有效，同時也為生產(chǎn)和流通過程的藥品質(zhì)量管理提供依據(jù)。如果藥物中所含的雜質(zhì)超過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的純度要求，就有可能使藥物的外觀性狀、物理常數(shù)發(fā)生變化，甚至影響藥物的穩(wěn)定性，使活性降低、毒副作用增加。雜質(zhì)的種類來源分：一般雜質(zhì)-多種藥物中普遍存在；特殊雜質(zhì)-特定藥物在生產(chǎn)、貯存過程中引入的雜質(zhì)。毒性分：有毒雜質(zhì)；信號雜質(zhì)-無毒，含量多少可以反映藥物的純度。理化性質(zhì)分：有機(jī)雜質(zhì)；無機(jī)雜質(zhì)；殘留溶劑雜質(zhì)限度的設(shè)定：MaximumDailyDoseReportingThresholdsIdentificationThresholdsQuantificationThresholds<2g/day0.050.10%or1.0mgperdayintake0.15%or1.0mgperdayintake>2g/day0.03雜質(zhì)的限量雜質(zhì)限量(%)=（雜質(zhì)最大允許量／供試品量）*100%對雜質(zhì)限量的控制方法：限量檢查法(limittest)；對雜質(zhì)進(jìn)行定量測定含量限量L(%)=（標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度C*標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積V/供試品量S）*100%一般雜質(zhì)的檢查注意操作的平行性。氯化物的檢查Cl-+Ag+→AgCl↓(白色)原理：藥物中的微量氯化物在硝酸酸性條件下與硝酸銀反應(yīng)，生成氯化銀膠體微粒而顯白色渾濁，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下產(chǎn)生的氯化銀渾濁程度比較，判定供試品中的氯化物是否符合限量規(guī)定。方法：樣品溶解/標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液(10μgCl/ml)，50mL納氏比色管，+稀HNO310mL+水至40mL+AgNO3試液1.0mL+水至50mL,暗處放置5min，比較。（氯化物濃度以50mL中含50～80μg的Cl為宜。）去除顏色干擾：內(nèi)消色法（倍量法）；外消色法：如KMnO4中氧化物的檢查，可先和乙醇適量還原后再依法檢查。注意事項：（1）比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察（2）平行操作原則（3）若供試品有顏色，需經(jīng)處理后方可檢查。重金屬檢查法以鉛的限量表示重金屬限度。第一法：硫代乙酰胺法適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物。CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2SPb2++H2S(pH3.5)→PbS↓+2H+原理：硫代乙酰胺在弱酸性條件下水解，產(chǎn)生硫化氫，與重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，判定供試品中重金屬是否符合限量規(guī)定。方法：樣品按規(guī)定法制成供試液25mL/標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液(10μgPb/ml)+醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2mL，加水至25mL，25mL納氏比色管，+硫代乙酰胺試液2mL，搖勻，放置，比較。注意事項：供試品若有色，在加硫代乙酰胺試液前在對照溶液管中滴加少量稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液，使之與供試品溶液管的顏色一致，然后再加硫代乙酰胺試液比色。第二法：熾灼后的硫代乙酰胺法適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及難溶于水、稀酸及乙醇的有機(jī)藥物第三法：硫化鈉法適用于溶于堿性水溶液而難溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的藥物。第四法：微孔濾膜法適用于重金屬限量低（含重金屬雜質(zhì)2～5μg）的藥物。砷鹽檢查法——古蔡氏法：原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量的砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，判斷供試品中重金屬是否符合限量規(guī)定。標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備精密標(biāo)準(zhǔn)砷溶液(1μgAs/mL)2mL，置錐形瓶中，+鹽酸5mL與水21mL，+碘化鉀試液5mL、酸性氯化亞錫試液5滴，室溫放置10min，+鋅粒2g，立即安裝導(dǎo)氣管，將錐形瓶置25～40℃水浴中，反應(yīng)45min，取出溴化汞試紙，即得。樣品砷斑的制備如標(biāo)準(zhǔn)的制備，按各品種項下規(guī)定方法制成供試品溶液。五價砷也能被鋅還原，但速度較慢，故加入KI和氯化亞錫將其還原成三價砷；KI和氯化亞錫還能抑制銻化氫的生成，銻化氫也能與溴化汞試紙作用生成銻斑；硫化氫能與溴化汞作用生成硫化汞的色斑，導(dǎo)氣管中用醋酸鉛棉花吸收硫化氫，又使砷化氫以適宜的速度通過。注意事項：供試品為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等在酸性溶液中生成HS2或SO2，應(yīng)先加硝酸使氧化成硫酸鹽；供試品為鐵鹽，消耗還原劑，先加酸性氯化亞錫試液使高鐵離子還原為低鐵離子；環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物要先進(jìn)行有機(jī)破壞（堿和酸）；含銻藥物，銻化氫干擾砷鹽的檢出（SbH3+HgBr2→SbH2(HgBr)+HBr），改用白田道夫(Betterdorff)法干燥失重測定法主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性物質(zhì)。恒重-兩次稱量差不超過0.3mg。常壓恒溫干燥法：除另有規(guī)定外，在105℃干燥至恒重，干燥失重=（稱量瓶與加入樣品重-恒重后稱量瓶與樣品重）/樣品重*100%減壓干燥法與恒溫減壓干燥法：適用于熔點低或受熱分解的供試品。干燥劑干燥法：適用于受熱分解或易升華的供試品。常用干燥劑：硅膠、硫酸、和五氧化二磷等。熱分析法：在程序控制溫度下測量物質(zhì)的理化性質(zhì)與溫度關(guān)系的一類技術(shù)。熱重分析、差熱分析、差示掃描熱分析。差熱分析(DTA)：是在程序控制溫度下，測量試樣與參比物（一種在測量溫度范圍內(nèi)不發(fā)生任何熱效應(yīng)的物質(zhì)）之間的溫度差與溫度△T關(guān)系的一種技術(shù)。有機(jī)溶劑殘留檢查方式：《中國藥典》規(guī)定殘留溶劑的檢查方法為GC，可采用填充柱，也可采用毛細(xì)管柱，檢測器通常使用火焰離子化檢測器（FID），對含鹵素元素的殘留溶劑如三氯甲烷等，采用ECD檢測器，易得到高的靈敏度。采用FID時需加尾吹氣，因為毛細(xì)管柱的柱內(nèi)載氣流量太低，不能滿足檢測器的最佳操作條件，所以使用毛細(xì)管柱時要采用輔助氣，即在毛細(xì)管柱后增加一路載氣直接進(jìn)入檢測器，就可保證檢測器在高靈敏度狀態(tài)下工作，尾吹氣的另一個重要作用是消除檢測器死體積的柱外效應(yīng)。內(nèi)標(biāo)法測定時，對照品連續(xù)進(jìn)樣5次，待測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的RSD應(yīng)不大于5%；外標(biāo)法測定，得待測物峰面積RSD應(yīng)不大于10%。通常對照品溶液的色譜峰面積與供試品溶液對應(yīng)的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過2倍為宜。毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等溫法（第一法）：適用于被檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量不多，并且極性差異較小的情況。頂空平衡時間一般30～45min。毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣程序升溫法（第二法）：適用于被檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量較多，且極性差異較大。薄層色譜法對檢測方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗：使檢測靈敏度、比移值、分離效能符合規(guī)定。常用方法：（1）雜質(zhì)對照品法：適用于已知雜質(zhì)并能制備得到雜質(zhì)對照品的情況；（2）供試品溶液自身稀釋對照法：適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能確定，或無雜質(zhì)對照品的情況，該法僅限于雜質(zhì)斑點的顏色與主成分斑點顏色相同或相近的情況下使用；（3）雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法并用：（4）對照藥物法：當(dāng)無合適的雜質(zhì)對照品，或者是供試品顯示的雜質(zhì)斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量時，可用與供試品相同的藥物作為對照品，此對照品中所含待檢雜質(zhì)需限量要求，且穩(wěn)定性好。高效液相色譜法檢測雜質(zhì)方法