SNT 4419.17-2016 出口食品常見過敏原LAMP系統(tǒng)檢測方法 第17部分：蕎麥

中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出口食品常見過敏原LAMP系列檢測方法第17部分：蕎麥I1出口食品常見過敏原LAMP系列檢測方法第17部分：蕎麥1范圍SN/T4419的本部分規(guī)定了出口食品中過敏原蕎麥成分的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)檢測方法。本部分適用于食品及其原料中過敏原養(yǎng)麥成分的定性檢測。本部分所規(guī)定方法的最低檢測限(LOD)為0.5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T27403—2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測SN/T1961.18—2013出口食品過敏原成分檢測第18部分：實時熒光PCR方法檢測蕎麥成分3.1術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。又稱致敏原或變應(yīng)原，是指能夠引起變態(tài)反應(yīng)的抗原和苦蕎(F.tataricum)是兩種主要的栽培種。3.2縮略語下列縮略語適用于本文件。dNTP:脫氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)LAMP:環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(loop-mediatedisothermalamplification)TritonX-100:聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測過程的防污染措施應(yīng)符合GB/T27403—2008中附錄D的規(guī)定。26.2.2水浴鍋或加熱模板：65℃±1℃和80℃±1℃。6.3.2CTAB提取緩沖液(20g/LCTAB,1.4mol/LNaCl,0.1mol/LTris-HCl,0.02mol/L6.3.5蛋白酶K(20mg/mL)。3表1。名稱編號序列LAMP引物序列外側(cè)上游引物(F3)外側(cè)下游引物(B3)5'-AGTCCTTCTCTTCCTGCCT-3’內(nèi)側(cè)上游引物(FIP)5'-CTCCGACAACCTGGACTCTTCCAACTTGA內(nèi)側(cè)下游引物(BIP)5'-AGTGTGTTCGACGACAACGTGCTCAACACCACTGCGAATCC-3’6.4DNA提取4表2過敏原蕎麥成分LAMP反應(yīng)體系外側(cè)上游引物(F3)外側(cè)下游引物(B3)內(nèi)側(cè)上游引物(FIP)內(nèi)側(cè)下游引物(BIP)4(包括緩沖液中所含硫酸鎂)2水6.5.3LAMP反應(yīng)參數(shù)65℃恒溫擴(kuò)增60min,80℃5min使酶滅活，反應(yīng)結(jié)束6.5.4顯色反應(yīng)反應(yīng)結(jié)束后，將顯色液與反應(yīng)液上下顛倒輕輕混勻，在黑色背景下立即進(jìn)行顏色觀察。6.6質(zhì)量控制基本原則：實驗室中設(shè)置的各種對照IAMP檢測結(jié)果應(yīng)符合以下情況。否則，任一種對照如果出——陰性對照：反應(yīng)管中液體呈橙色；——陽性對照：反應(yīng)管中液體呈綠色。7結(jié)果判斷和確證7.1待檢樣品2個平行樣反應(yīng)管中液體均呈橙色，同時各種實驗對照結(jié)果正常，可判斷該樣品檢測結(jié)7.2待檢樣品2個平行樣反應(yīng)管中液體至少1管呈綠色，同時各種實驗對照結(jié)果正常，可判斷該樣品過敏原蕎麥成分初篩陽性，還應(yīng)通過下列方法之一進(jìn)行確證：—按照SN/T1961.18—2013實時熒光PCR檢測；——可對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列測定，參照附錄A中序列比對；——其他驗證方法。56ATCCTCGGACCGAGATGGAACTTGAACGCGCACAGCGCACTGTACGTGAAAGGAAGAG