《中藥的含量測(cè)定》PPT課件.ppt

1、第六章 中藥的含量測(cè)定,反映其制劑中有效成分、指標(biāo)成分或毒性成分的含量 衡量其制劑工藝的穩(wěn)定性和中藥制劑的質(zhì)量?jī)?yōu)劣,2,常用定量分析方法 方法學(xué)評(píng)價(jià),3,結(jié)果表示,二丁顆粒 本品每袋含紫花地丁以秦皮乙素（C9H6O4）計(jì)，不得少于1.8mg。 二至丸 本品每1g含女貞子以齊墩果酸（C30H48O3）計(jì)，不得少于8.0mg。 十滴水 本品每1ml含桉油以桉油精（C10H18O）計(jì)，不得少于6.3mg。 七葉安神片 本品每片含三七葉總皂苷以人參皂苷Rg3（C53H90O22）計(jì)不得少于5.0mg。 左金膠囊 本品每1粒含黃連以鹽酸小檗堿（C20H18ClNO4）計(jì)，不得少于5.5mg。 紅景天 本

2、品按干燥品計(jì)算，含紅景天苷（C14H20O3）不得少于0.50,4,化學(xué)分析法 紫外-可見分光光度法 原子吸收光譜法 薄層掃描法 氣相色譜法 高效液相色譜,5,第一節(jié) 化學(xué)分析法 適用于含量較高的成分及無機(jī)成分的測(cè)定 包括：重量分析和滴定分析 無機(jī)藥物、總生物堿、總皂苷等,6,一、重量分析 揮發(fā)法：水分測(cè)定 萃取法：地奧心血康膠囊中甾體總皂苷測(cè)定 沉淀法：西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜測(cè)定,例 西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜（以Na2SO4計(jì)）測(cè)定,精密取約18g，加水150ml，振搖，離心，濾過，水50ml分次洗滌，合并濾液，加鹽酸1ml，煮沸，緩緩加熱氯化鋇試液水浴加熱，靜置，用無灰濾紙濾過，沉淀用水洗滌，至

3、洗液不再顯氯化物的反應(yīng)，干燥，并熾灼至恒重，精密稱定，與0.6086相乘，計(jì)算，即得,7,二、滴定分析：含量1%以上 酸堿滴定法：生物堿、有機(jī)酸、內(nèi)酯類 沉淀滴定法：含朱砂、紅粉中藥制劑 配位滴定法：含Ca2+、Mg2+等礦物藥制劑 氧化還原滴定法： 酚類、糖類及含F(xiàn)e、雄黃等礦物藥制劑,8,1滴定度（TT/A）計(jì)算,滴定度（TT/A）：每1ml某摩爾濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物成分的質(zhì)量（mg,如：每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3,mg/ml,9,2. 樣品中被測(cè)成分的含量計(jì)算,直接滴定法測(cè)定,返滴定法測(cè)定,如：每1ml硫酸滴定液（0.

4、01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3,實(shí)際硫酸液濃度為0.01023mol/L,10,例 顛茄酊中生物堿的含量測(cè)定（酸堿滴定法） 精密取100ml，蒸發(fā)至約10ml，加乙醇適量使溶解，加0.1mol/L硫酸溶液10ml，用三氯甲烷分次提取，合并三氯甲烷液，用0.1mol/L硫酸溶液10ml洗滌，洗液并入酸液中。 加濃氨試液使呈堿性，用三氯甲烷分次提取。三氯甲烷液用同一水10ml洗滌，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，80干燥2小時(shí)，殘?jiān)尤燃淄?ml微熱使溶解。 精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml，水浴加熱，除去三氯甲烷，放冷，加甲基紅指示液1

5、2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定。 每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3,11,試樣100ml,提取和純化,游離生物堿RN,精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml,RN+-SO4和剩余H2SO4,用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定,RN+-SO4和Na2SO4,甲基紅指示液,12,例：馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏中爐甘石粉測(cè)定（配位滴定法,試樣約2g加三氯甲烷溶散稀鹽酸提取加緩沖溶液加鉻黑T指示劑用EDTA溶液滴定,例：小兒金丹片中朱砂測(cè)定（沉淀滴定法,試樣約0.5g加硫酸、硝酸鉀加熱至乳白色 加水加高錳酸鉀溶液至紅色加硫

6、酸亞鐵至紅色消失加硫酸鐵銨指示劑用硫氰酸銨滴定液,13,二、可見紫外分光光度法,較高靈敏度、準(zhǔn)確、價(jià)廉、簡(jiǎn)單。 成分復(fù)雜，干擾多。 提取、凈化、顯色。 總成分測(cè)定：總黃酮、總多糖、總蒽醌等,14,1比耳定律,摩爾吸光系數(shù) ：一定，溶液為1mol/L，厚度為1cm時(shí)的吸光度,百分吸光系數(shù) ：一定，溶液為1%，厚度為1cm時(shí)的吸光度,2儀器校正和檢定,波長(zhǎng)校正 吸收度的準(zhǔn)確度校正 雜散光檢查,15,3對(duì)溶劑的要求,溶劑截止波長(zhǎng)：溶劑在1cm光徑中透光率25%的波長(zhǎng)。 溶劑試樣的溶解性、安全性 溶劑的最大使用波長(zhǎng)即截止波長(zhǎng),16,17,4測(cè)定法,參比溶液的選擇 max，2nm 吸光度在0.30.7間

7、,對(duì)照品比較法,cx為供試品溶液濃度 cR對(duì)照品溶液濃度 cR=(100%10%)cx cx=(Ax/AR)cR,18,例 黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D測(cè)定,對(duì)照品溶液：每1ml含環(huán)維黃楊星D 10g,供試品溶液制備：取樣，置50ml量瓶，加0.05mol/LNaH2PO4至近刻度，80水浴溫浸，放冷，加緩沖液至刻度，離心，取上清液,測(cè)定法：精密量取二種溶液各5ml，置分液漏斗，各精密加溴麝香草酚藍(lán)溶液5ml，搖勻，各精密加三氯甲烷10ml提取，取三氯甲烷液，加0.5g無水硫酸鈉，振搖，靜置，取上清液，以試劑空白為參比，在410nm處分別測(cè)定吸光度,19,吸收系數(shù)法,百分吸收系數(shù) 100 無需對(duì)照品

8、 方法簡(jiǎn)便 儀器的校正和檢定,例 巖白菜素含量測(cè)定,取約20mg，置50ml量瓶，加甲醇溶解至刻度，搖勻，精密量取1ml，加甲醇稀釋至25ml，以試劑為空白，在275nm測(cè)吸光度，按巖白菜素吸收系數(shù)248計(jì)算,20,標(biāo)準(zhǔn)曲線法,標(biāo)準(zhǔn)系列一般要求57個(gè)點(diǎn) 相關(guān)系數(shù)（r）不得小于0.999 供試品溶液的吸光度在線性范圍中部,例 排石顆粒中總黃酮測(cè)定,對(duì)照品溶液：每1ml含無水蘆丁0.2mg,標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密取對(duì)照品液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分別置10ml量瓶，加50%甲醇至5ml，加5%亞硝酸鈉0.3ml，放置6min，加10%硝酸鋁0.3ml，加氫氧化鈉試液4ml，加50%甲醇至刻

9、度搖勻，以試劑為空白，在510nm測(cè)定吸光度 樣品測(cè)定,21,三、原子吸收分光光度法,準(zhǔn)確度高 靈敏度高 選擇性好 抗干擾能力強(qiáng) 分析速度快,含量測(cè)定：龍牡壯骨顆粒中鈣,四、熒光分析法,有害元素的檢查：Pb、Cd、As、Hg、Cu 共17個(gè)品種項(xiàng),薄層洗脫定量 薄層上直接定量 薄層掃描 掃描方式 測(cè)定方式,五、薄層掃描法,23,六、氣相色譜法,以氣體為流動(dòng)相。 分離效能高、樣品用量少、分析速度快。 適合于含揮發(fā)性成分的中藥鑒別和含量測(cè)定。 可與MS、IR聯(lián)用,24,農(nóng)藥殘留量的檢查：六六六、DDT、PCNB 甘草、黃芪、人參莖葉總皂苷、人參總皂苷,樹脂殘留溶劑檢查 ：正己烷 、甲苯 、對(duì)二甲苯

10、 、鄰二甲苯 、苯乙烯 、二乙基苯 、二乙烯苯 、苯。三七三醇皂苷、三七皂苷、燈盞花素,25,一）基本原理,1塔板理論,H越小，n越大，柱效越高，分離性能越好,2速率理論,H=A+B/U+CU,指導(dǎo)分離條件選擇：載體粒度和分布、填充均勻度、載氣種類和流速、柱溫、固定液液膜厚度,26,二）系統(tǒng)適用性試驗(yàn),1色譜柱的理論板數(shù)（n）：規(guī)定最低板數(shù),2.分離度(R,R1.5,3重復(fù)性：連續(xù)5次，RSD2.0,4拖尾因子（T,T應(yīng)在0.951.05之間,27,三）儀器一般要求與條件選擇,1載氣源與載氣的選擇 ：一般用N2作載氣,2進(jìn)樣系統(tǒng) ：直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣 ；分流比； 進(jìn)樣口溫度高于柱溫3050,3

11、色譜柱：填充柱或毛細(xì)管柱 ；常用固定液：甲基聚硅氧烷、苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等,28,4柱溫的選擇 ：恒溫和程序升溫 ；柱溫低于固定液最高使用溫度；合符要求的前提下，盡可能采用較低柱溫,5檢測(cè)器 ：FID ；溫度應(yīng)高于柱溫，150,29,四）定量分析方法,內(nèi)標(biāo)法 外標(biāo)法 歸一化法 內(nèi)加法,30,1、內(nèi)標(biāo)法,內(nèi)標(biāo)物溶液：如水楊酸甲酯，加乙酸乙酯溶解,對(duì)照品溶液：如龍腦，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解,供試品溶液：如冰片，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解,取樣量 m,定容體積如：50ml,31,進(jìn)樣體積V，如1l,As,Ai,As,Ax,內(nèi)標(biāo)液,對(duì)照品,供試品,則求出cx,32,內(nèi)標(biāo)物須為原樣品中不含有的組分,對(duì)內(nèi)標(biāo)物要求,內(nèi)

12、標(biāo)物與待測(cè)物保留時(shí)間應(yīng)接近，且R1.5,內(nèi)標(biāo)物為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或含量已知物質(zhì),內(nèi)標(biāo)物與待測(cè)組分的理化性質(zhì)相似,33,消除進(jìn)樣體積的誤差。 只需待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物出峰 適合測(cè)定微量組分,優(yōu)點(diǎn),制樣要求高 找合適內(nèi)標(biāo)物困難 已知校正因子,缺點(diǎn),34,例：丁香羅勒油（丁香酚測(cè)定） 固定相：二甲基聚硅氧烷（SE-30），濃度為10% 柱溫：110 內(nèi)標(biāo)溶液：每1ml含20mg水楊酸甲酯的無水乙醇溶液 校正因子測(cè)定：精密取約50mg對(duì)照品，置10ml量瓶，精密加內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加無水乙醇稀釋至刻度。吸取2l進(jìn)樣測(cè)定 供試品溶液制備和測(cè)定：精密取約50mg，置10ml量瓶，精密加入內(nèi)標(biāo)液2ml，加無水乙醇

13、至刻度，吸取2l進(jìn)樣測(cè)定,35,a工作曲線法,c外標(biāo)兩點(diǎn)法,前提：各次進(jìn)樣量要很準(zhǔn)確 操作條件要十分穩(wěn)定,b外標(biāo)一點(diǎn)法,2、 外標(biāo)法,36,例：冠心蘇合丸（含土木香） 固定相：聚乙二醇20000（PEG-20M；柱長(zhǎng)30m） 柱溫：190（30分鐘），120/分鐘升至240 對(duì)照品溶液：每1ml各含0.2mg土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的乙酸乙酯溶液 供試品溶液制備：精密取約8g，精密加硅藻土812g，研勻，精密取約68g，精密加水飽和的乙酸乙酯25ml，稱重，超聲處理，補(bǔ)重，濾過,37,3、歸一化法,38,應(yīng)用：藥物中雜質(zhì)和雜質(zhì)總量限量檢查,前提： 試樣中所有組分都產(chǎn)生信號(hào) 并能檢出色譜峰,39

14、,七、高效液相色譜法,儀器性能穩(wěn)定 靈敏準(zhǔn)確 分離模式多 檢測(cè)手段多 應(yīng)用最多,40,1、色譜柱,C18柱：（octadecylsilane ODS柱,C8柱：(CH2)7CH3，罌粟殼、辛夷 、地奧心血康,苯基柱：(CH2)3 C6H5 ，萊菔子、忍冬藤,氰基柱：(CH2)3CN,氨基柱：(CH2)3N H2 ，苦參、濕毒清膠囊,一）儀器一般要求與實(shí)驗(yàn)條件選擇,2流動(dòng)相,溶劑種類 ：甲醇、水、乙腈 配比 pH值：乙酸、磷酸 、氨水、三乙胺 添加劑 ：辛烷、庚烷和十二烷基磺酸鈉,平消片 中士的寧測(cè)定： 流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鉀與0.01mol/L庚烷磺酸鈉等量混合液（用10%

15、磷酸調(diào)節(jié)pH2.8）（2179,42,天麻首烏片（二苯乙烯苷） 固定相：ODS 流動(dòng)相：乙腈-水（2278） 檢測(cè)器：UVD320nm 對(duì)照品溶液：每1ml含40g的甲醇溶液 供試品溶液制備：精密取約2片，精密加甲 醇25ml，稱重，加熱回流，補(bǔ)重，濾過 測(cè)定法：精密吸取二種溶液各10l進(jìn)樣測(cè)定 規(guī)格：不得少于0.20mg/片,43,蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD,線性不過零點(diǎn) 線性范圍較窄 低濃度非線性 二點(diǎn)對(duì)數(shù)方程法,44,Ikmb,定量關(guān)系,logIblogmlogk,I 為散射光強(qiáng)度， m 為組分質(zhì)量,45,例 金貝痰咳清顆粒（貝母素甲和貝母素乙） 固定相：ODS 流動(dòng)相：乙腈-二乙胺-水（63:0.03:37） 檢測(cè)器：ELSD 對(duì)照品溶液：每1ml各含0.25mg和0.15mg的甲醇液 供試品溶液制備：精密取約2.5g，加氨試液4ml，浸潤(rùn)1小時(shí)，精密加三氯甲烷-甲醇（4:1）混合液50ml，稱重，80水浴加熱回流，補(bǔ)重，靜置，取下層溶液，無水硫酸鈉脫水，濾過，精取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘?jiān)状既芙庵?ml，濾過 測(cè)定法：精密吸取對(duì)照品液8l、20l，供試品液20l，進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算,46,質(zhì)譜檢測(cè)器（MS,川楝子中川楝素測(cè)定,含量：0.060%0.20,47,一測(cè)多