GB/T 41907-2022 腸激酶活性檢測(cè)方法（正式版）

ICS07.080GB/T41907—2022腸激酶活性檢測(cè)方法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB/T41907—2022 I Ⅱ 4試劑或材料 26試驗(yàn)步驟 28質(zhì)量控制 2IGB/T41907—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)工具酶標(biāo)準(zhǔn)化工作組(SAC/SWG11)提出并歸口。本文件起草單位：雷谷(廈門)生物醫(yī)藥有限公司、通用生物系統(tǒng)(安徽)有限公司、蘇州坤琪生物科坊諾道中科醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司、福建南生科技有限公司、上海鷹姿生命科技有限公司、蘇州海貍技有限公司、中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院計(jì)量與分析科學(xué)研究所、深圳華大生命科學(xué)研究院。ⅡGB/T41907—2022腸激酶(EC3.4.21.9)是十二指腸細(xì)胞分泌的一種可以在較寬pH范圍(4.5～9.5)和較寬溫度范圍內(nèi)切割含有4個(gè)天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵(天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-賴氨酸)的蛋白質(zhì)水解酶。制定腸激酶活性檢測(cè)方法的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，用以推動(dòng)該類工具酶的產(chǎn)業(yè)化，對(duì)于腸激酶的生產(chǎn)和使用具有重要意義。1GB/T41907—2022腸激酶活性檢測(cè)方法2規(guī)范性引用文件3術(shù)語和定義十二指腸細(xì)胞分泌的一種可以切割含有4個(gè)天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵(天冬氨酸-天冬氨酸-37℃,16h內(nèi)將0.5mg的硫氧還蛋白-NP-27(Thioredoxin-NP-27),95%降解為NP-27所需要的酶量為1個(gè)腸激酶活性單位(U)。4.1硫氧還蛋白-NP-27(Thioredox4.3氯化鈉(NaCl):固體。4.4氯化鈣(CaCl?):固體。4.6硫氧還蛋白-NP-27(Thioredoxin-NP-27)溶液：稱取硫氧還蛋白-NP-27(Thioredoxin-NP-27)約25mg,用反應(yīng)緩沖液溶解并定容至25mL,配制成每毫升含1mg硫氧還蛋白-NP-27(Thioredoxin-2GB/T41907—20224.82×SDS凝膠加樣緩沖液：量取或稱取10mL5儀器設(shè)備6試驗(yàn)步驟6.1酶切反應(yīng)取離心管8支，各加入硫氧還蛋白-NP-27(Thioredoxin-NP-27)溶液40μL,再依次分別加入腸激酶樣緩沖液終止酶切反應(yīng)，分別取各反應(yīng)液20μL,進(jìn)行SDS凝膠電泳。6.2電泳12%SDS凝膠電泳，電壓90V～120V,當(dāng)溴酚藍(lán)線到達(dá)凝膠板底部時(shí)停止電泳，取出凝膠進(jìn)行染色30min,并過夜脫色至無底色。當(dāng)融合蛋白電泳條帶看不見時(shí)，表明此時(shí)的腸激酶量恰好能將該融合蛋白樣品完全酶切，并以此反應(yīng)體系作為依據(jù)計(jì)算酶活性。7結(jié)果計(jì)算供試品中腸激酶活性按公式(1)計(jì)算： (1)式中：S——腸激酶活性，單位為腸激酶活性單位每毫克蛋白或固含物(U/m