GB+16883-2022鼠疫自然疫源地及動物鼠疫流行判定

CCSC59中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB16883—2022代替GB16883—1997鼠疫自然疫源地及動物鼠疫流行判定2022-03-15發(fā)布2023-04-01實(shí)施國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會ⅠGB16883—2022前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4鼠疫自然疫源地判定 5動物鼠疫流行判定及流行強(qiáng)度評估 附錄A（規(guī)范性）檢驗(yàn)標(biāo)本的采集方法 附錄B（規(guī)范性）鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法 附錄C（資料性）中國鼠疫自然疫源地類型 ⅢGB16883—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB16883—1997《鼠疫自然疫源地及動物鼠疫流行判定標(biāo)準(zhǔn)》，與GB16883—1997相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：—增加了在同一標(biāo)本中鼠疫耶爾森菌特異基因與特異性抗原檢測雙項(xiàng)陽性，即可判定動物鼠疫—增加了動物鼠疫流行強(qiáng)度評估（見5.2);—更改了附錄A檢驗(yàn)標(biāo)本的采集方法和附錄B鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法的部分技術(shù)內(nèi)容（見附錄A和附錄B,1997年版的附錄A和附錄B);—增加了中國鼠疫自然疫源地類型（見附錄C)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會提出并歸口。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：—1997年首次發(fā)布為GB16883—1997;—本次為第一次修訂。1GB16883—2022鼠疫自然疫源地及動物鼠疫流行判定本文件規(guī)定了中國新發(fā)現(xiàn)鼠疫自然疫源地、動物鼠疫流行判定。本文件適用于中國判定鼠疫自然疫源地、動物鼠疫流行和動物鼠疫流行強(qiáng)度評估。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。WS279—2008鼠疫診斷標(biāo)準(zhǔn)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1鼠疫自然疫源地維持鼠疫在自然界存在的特定生態(tài)系統(tǒng)。注：包括鼠疫耶爾森菌、感染鼠疫的嚙齒動物、可傳播鼠疫的節(jié)肢動物，以及適合它們生存的地理環(huán)境。3.2主要宿主能夠維持鼠疫自然疫源地長期存在的嚙齒動物。注：鼠疫能夠以疾病的形式在該動物種群中流行，并可傳播至其他動物或人類。3.3主要媒介對鼠疫耶爾森菌具有較強(qiáng)傳播能力、能夠引起和維持主要宿主的鼠疫流行、對鼠疫自然疫源性起主要作用的節(jié)肢動物。注：在中國的鼠疫自然疫源地內(nèi)為寄生于主要宿主的能傳播鼠疫的蚤類。3.4鼠疫自然疫源地類型t以鼠疫耶爾森菌的生物學(xué)特征、遺傳特征、主要宿主、主要媒介和鼠疫自然疫源地的地理環(huán)境特征為主要標(biāo)志劃分的類型。3.5動物鼠疫流行鼠疫耶爾森菌引起宿主動物感染、發(fā)病或者死亡，且在宿主動物間傳播。注：動物鼠疫流行可導(dǎo)致人類鼠疫發(fā)生。4鼠疫自然疫源地判定4.1當(dāng)?shù)貤⒌囊吧鷩X動物或其寄生的媒介標(biāo)本中，檢出鼠疫耶爾森菌，可確定標(biāo)本來源地區(qū)為鼠2GB16883—2022疫自然疫源地。標(biāo)本采集方法應(yīng)按照附錄A執(zhí)行，檢出鼠疫耶爾森菌的方法應(yīng)按照附錄B執(zhí)行。4.2在非鼠疫疫源地區(qū)的鼠疫病人或動物標(biāo)本中檢出鼠疫耶爾森菌時，應(yīng)調(diào)查其感染來源，并按4.1規(guī)定，確定鼠疫自然疫源地。4.3鼠疫自然疫源地判定之后，按照下列要求對新發(fā)現(xiàn)鼠疫地區(qū)的疫源地類型進(jìn)行確定。a)應(yīng)調(diào)查確定新發(fā)現(xiàn)鼠疫自然疫源地內(nèi)的主要宿主、主要媒介和地理環(huán)境特征。b)根據(jù)鼠疫耶爾森菌的生物學(xué)特征、主要宿主、主要媒介、地理環(huán)境特征等內(nèi)容與中國已經(jīng)確定的鼠疫自然疫源地類型（見附錄C)進(jìn)行比較，確定疫源地類型。c)與已確定的鼠疫自然疫源地類型無對應(yīng)的，可確定為新型疫源地，并按地理環(huán)境特征和主要宿主的命名原則進(jìn)行命名。5動物鼠疫流行判定及流行強(qiáng)度評估5.1動物鼠疫流行判定5.1.1從疫源地的動物標(biāo)本檢出鼠疫耶爾森菌，或同一動物標(biāo)本的鼠疫耶爾森菌特異基因與特異性抗原檢測呈雙項(xiàng)陽性，即可判定動物鼠疫正在發(fā)生流行。鼠疫耶爾森菌特異基因檢測應(yīng)按照WS279—2008的附錄C執(zhí)行，鼠疫耶爾森菌特異性抗原檢測應(yīng)按照WS279—2008的附錄D、附錄E、附錄F執(zhí)行。5.1.2未從疫源地的動物標(biāo)本檢出鼠疫耶爾森菌，但在連續(xù)監(jiān)測的情況下，從主要宿主或犬血清中用鼠疫間接血凝方法檢測到鼠疫Fl抗體，其陽性率或其中有一份以上的血凝滴度達(dá)到下列標(biāo)準(zhǔn)之一者，可確定在監(jiān)測地區(qū)內(nèi)，當(dāng)年曾發(fā)生或正在發(fā)生動物鼠疫流行。鼠疫Fl抗體檢測按照WS279—2008的附錄D、附錄E、附錄F執(zhí)行。a)青藏高原喜馬拉雅旱獺鼠疫自然疫源地和呼倫貝爾高原蒙古旱獺鼠疫自然疫源地：旱獺的鼠疫Fl抗體陽性率在5%以上，最高滴度達(dá)1∶160以上；或犬的陽性率在5%以上，最高滴度達(dá)以上。b)帕米爾高原長尾旱獺鼠疫自然疫源地和天山山地灰旱獺-長尾黃鼠鼠疫自然疫源地：灰旱獺或長尾旱獺的鼠疫Fl抗體陽性率在1%以上、最高滴度達(dá)1∶40以上；或長尾黃鼠的陽性率在c)松遼平原達(dá)烏爾黃鼠鼠疫自然疫源地：達(dá)烏爾黃鼠的鼠疫Fl抗體陽性率在3%以上、最高滴d)甘寧黃土高原阿拉善黃鼠鼠疫自然疫源地：阿拉善黃鼠的鼠疫Fl抗體陽性率在3%以上、最e)內(nèi)蒙古高原長爪沙鼠鼠疫自然疫源地和準(zhǔn)噶爾盆地大沙鼠鼠疫自然疫源地：長爪沙鼠或大沙鼠的鼠疫Fl抗體陽性率在2%以上、最高滴度達(dá)1∶160以上。f)錫林郭勒高原布氏田鼠鼠疫自然疫源地和青藏高原青海田鼠鼠疫自然疫源地：布氏田鼠或青海田鼠的鼠疫Fl抗體陽性率在2%以上、最高滴度達(dá)1∶160以上。g)滇西山地齊氏姬鼠-大絨鼠鼠疫自然疫源地：大絨鼠和齊氏姬鼠的鼠疫Fl抗體陽性率在3%以上、最高滴度達(dá)1∶320以上；或犬的間接血凝陽性率在10%以上、最高滴度達(dá)1h)滇西山地閩廣沿海居民區(qū)黃胸鼠鼠疫自然疫源地：黃胸鼠的鼠疫Fl抗體陽性率在1%以上，最高滴度達(dá)1∶160以上。5.2動物鼠疫流行強(qiáng)度評估5.2.1動物鼠疫流行在1個縣級行政區(qū)劃內(nèi)，波及1個~2個自然村屯，即動物鼠疫流行強(qiáng)度低。GB16883—20225.2.2動物鼠疫流行在1個縣級行政區(qū)劃內(nèi)，波及3個~4個自然村屯；或波及2個縣級行政區(qū)劃，即動物鼠疫流行強(qiáng)度中。5.2.3動物鼠疫流行在1個縣級行政區(qū)劃內(nèi)，波及5個及以上自然村屯；或波及3個及以上縣級行政區(qū)劃，即動物鼠疫流行強(qiáng)度高。34GB16883—2022附錄A（規(guī)范性）檢驗(yàn)標(biāo)本的采集方法A.1動物組織標(biāo)本采集將獲得的全部應(yīng)檢動物分類登記，梳檢體外寄生蟲，采集血液為標(biāo)本；然后鑒定動物種類及性別。A.1.2嚙齒動物解剖取標(biāo)本A.1.2.1將動物腹部向上固定在解剖板上，先消毒腹面，以鑷子提起腹部皮膚，用剪刀剪一小口，然后將腹面皮膚自下腹一直剪到下頜，再沿四肢腹面剪開一定距離，翻開皮膚分離皮下組織，充分暴露胸、腹組織但不要剪破胸、腹腔。A.1.2.2每一步驟應(yīng)將所使用的鑷子和剪刀浸入無水乙醇，在火焰上燃燒消毒，冷卻后再用于下一操作。A.1.2.3觀察淋巴結(jié)是否腫大，皮下組織是否充血或出血。如發(fā)現(xiàn)有腫大的淋巴結(jié)，則應(yīng)用無菌剪刀剪取腫大之淋巴結(jié)，進(jìn)行細(xì)菌壓印培養(yǎng)及涂片，然后分別置于無菌的容器中。A.1.2.5自劍突下剪開胸腔，剪斷肋骨，將胸骨翻起暴露胸腔，觀察心、肺有無病變。A.1.2.6分別剪取心、肺部分組織，采集的臟器標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌壓印培養(yǎng)及涂片后，分別置無菌容器中。A.1.2.8剪開腹壁，暴露腹腔內(nèi)容，不應(yīng)剪破腸腔。觀察肝、脾及其他臟器和組織有無病變。A.1.2.9剪取小塊肝、脾組織，以及其他出現(xiàn)病變的臟器組織標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌壓印培養(yǎng)及涂片后，分別置于無菌容器內(nèi)。A.1.3不明原因的病、死動物取標(biāo)本應(yīng)采取淋巴腺、心臟、肺臟、肝臟、脾臟等組織標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和涂片染色鏡檢；對于捕獲的、外觀健康的動物，一般只采取肝、脾組織標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌壓印培養(yǎng)。如果鼠尸已有腐敗，則應(yīng)剝離四肢肌肉，分離出一條長骨，在接近骺端處剪斷，取骨髓標(biāo)本，或打開顱腔，取腦組織細(xì)菌壓印培養(yǎng)及涂片。A.2動物血清標(biāo)本的采集旱獺、野兔等體型較大動物一般采用心臟采血；犬、貓等可以采用股動脈采血；羊采用頸動脈采血；小型嚙齒動物一般采取股動脈采血。動物采血時，應(yīng)采取常規(guī)無菌操作，采血處用碘酒和酒精消注入無菌試管中，靜置或離心分離血清。A.3媒介昆蟲標(biāo)本采集鹽水的容器內(nèi)，注明寄主、采集地點(diǎn)、采集日期。5GB16883—2022A.3.2洞干蚤的采集：用探蚤棒收集，探得的蚤及其他昆蟲按A.3.1.1方法分裝并登記。A.3.3巢穴蚤及寄生蟲的采集：挖掘嚙齒動物巢穴內(nèi)的窩巢及表層泥土，應(yīng)一巢裝一袋，然后放入容器內(nèi)檢蚤及寄生蟲，收集按A.3.1.1方法分裝并登記。A.3.4地面游離蚤的采集：常用粘蚤紙收集，將粘蚤紙按要求放在房屋地面的一定位置，昏置晨查，收集粘蚤紙上的蚤類，按A.3.1.1方法以分裝并登記。A.3.5對收集的蚤類及寄生蟲分別進(jìn)行種類鑒定，然后進(jìn)行鼠疫細(xì)菌學(xué)鑒定，按附錄B的規(guī)定。A.4其他檢驗(yàn)標(biāo)本的采集對動物皮毛、衣服等，將可疑污染處浸于滅菌生理鹽水中，然后取此浸液備檢；土壤應(yīng)收集鼠洞疏松土壤和碎屑（骨、腦殼、皮毛等）作為被檢標(biāo)本，將被檢標(biāo)本置于乳缽內(nèi)，充分研碎，加入滅菌生理鹽水制備懸液供鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)用，按附錄B的規(guī)定。6GB16883—2022附錄B（規(guī)范性）鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法B.1顯微鏡檢查按附錄A檢驗(yàn)標(biāo)本的采集方法，無菌操作剪取淋巴腺、肝臟、脾臟、肺臟、心臟，用切面在潔凈玻片上壓印或涂成薄片；液體標(biāo)本用接種環(huán)直接涂片。每份標(biāo)本至少制備2張涂片，自然干燥后，用95%酒精固定15min,取出自然干燥后染色。1張進(jìn)行革蘭氏染色；1張進(jìn)行美蘭染色。用顯微鏡100高倍油鏡，觀察細(xì)菌染色及形態(tài)，并記錄鏡檢結(jié)果。B.2分離培養(yǎng)應(yīng)使用新鮮的、鼠疫耶爾森菌赫氏培養(yǎng)基，pH應(yīng)在6.9~7.1之間，制成培養(yǎng)基平皿，培養(yǎng)溫度28℃。B.2.2.1動物臟器用接種環(huán)在臟器切面中心鉤取被檢標(biāo)本接種于培養(yǎng)基平皿上，若標(biāo)本新鮮也可用臟器切面直接壓印后再劃線接種于培養(yǎng)基平皿。B.2.2.2骨髓標(biāo)本在斷端用注射器抽取骨髓或注入生理鹽水，吸取沖洗液一滴到培養(yǎng)基平皿上再劃線培養(yǎng)。B.2.2.3液狀標(biāo)本可用接種環(huán)直接鉤取劃線接種于培養(yǎng)基平皿。B.2.2.4蚤（蟲）類標(biāo)本可單只或集組培養(yǎng)，單只或集組蚤（蟲）用研磨器研碎后，用接種環(huán)直接鉤取劃線接種于培養(yǎng)基平皿。病死動物體外寄生蚤（蟲）應(yīng)單只檢驗(yàn)，蚤（蟲）標(biāo)本較少時應(yīng)單只取胃培養(yǎng)；集組檢驗(yàn)時應(yīng)一只動物的同一種蚤（蟲）種集為一組，混合集組時，應(yīng)做到同地點(diǎn)、同鼠種、同蚤（蟲）種集為一組。B.2.2.5自斃鼠（動物）或重點(diǎn)標(biāo)本必要時可用液體培養(yǎng)基先增菌再分離培養(yǎng)。B.2.2.6已接種的培養(yǎng)基應(yīng)置28℃溫箱中培養(yǎng)。動物標(biāo)本一般培養(yǎng)3天，昆蟲標(biāo)本培養(yǎng)7天。B.2.2.7培養(yǎng)物每天觀察一次。動物標(biāo)本連續(xù)觀察3天，昆蟲標(biāo)本連續(xù)觀察7天。觀察中發(fā)現(xiàn)可疑鼠疫耶爾森菌菌落，及時進(jìn)行分離培養(yǎng)，并同時進(jìn)行噬菌體裂解試驗(yàn)。B.3鼠疫噬菌體裂解試驗(yàn)取疑似鼠疫耶爾森菌菌落，劃線接種于培養(yǎng)基上，滴加一滴鼠疫噬菌體于平皿劃線上部，使其垂直流下，然后置28℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果，如出現(xiàn)噬菌斑或噬菌帶即可判為鼠疫噬菌體裂解試驗(yàn)陽性。7GB16883—2022B.4鼠疫耶爾森菌毒力試驗(yàn)B.4.1接種標(biāo)本的制備臟器加入1mL生理鹽水制成懸液。制成懸液。B.4.1.3骨髓可用生理鹽水稀釋2倍~3倍。B.4.1.4滲出液、血液等可以直接使用，血液不能及時接種的應(yīng)加入抗凝劑。注：接種樣本的操作在生物安全三級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。B.4.2接種方法及接種劑量B.4.2.1腹腔接種適用于新鮮被檢標(biāo)本，先剪去實(shí)驗(yàn)動物注射部位的腹毛，用碘酒、75%酒精消毒，針小白鼠注入B.4.2.2皮下接種適用于新鮮標(biāo)本或輕微污染的標(biāo)本。接種常在動物大腿內(nèi)側(cè)或大腿上部，進(jìn)針只到動物大小選取用銳器劃傷皮膚使之不出血為止，用棉簽浸上被檢標(biāo)本在裸露皮膚上涂布并揉擦，使其經(jīng)皮感染。注：B.4.2.1~B.4.2.3的操作在生物安全三級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。B.4.3.1試驗(yàn)所需動物應(yīng)標(biāo)明動物品系和體重。B.4.3.2接種后的動物應(yīng)放回飼養(yǎng)籠具中，飼養(yǎng)觀察。B.4.3.3發(fā)現(xiàn)動物死后應(yīng)即時解剖觀察病變，分離培養(yǎng)鼠疫耶爾森菌。B.4.3.4如動物到第7天仍無發(fā)病，第8天取血、解剖，分離培養(yǎng)鼠疫耶爾森菌、檢測鼠疫特異性抗體。注：B.4.1操作在生物安全三級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作；B.4.2和B.4.3操作在動物生物安全三級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作。B.5鼠疫耶爾森菌判定依據(jù)B.5.1顯微鏡檢查陽性具有鼠疫耶爾森菌形態(tài)學(xué)特征和染色特征。鼠疫耶爾森菌為革蘭氏陰性，兩極濃染，兩端鈍圓的短小桿菌。注意腐敗標(biāo)本或陳舊標(biāo)本鼠疫耶爾森菌的形態(tài)多樣化。B.5.2分離培養(yǎng)陽性可見半透明、淡灰色的小菌落，顯微鏡下可見菌落中心呈黃褐色，有粗糙顆粒；肉湯中表面形成白色環(huán)狀薄膜及絮狀沉淀，肉湯仍透明。