T-SPPHN 001-2024 擴(kuò)散前沿區(qū)柑橘黃龍病可持續(xù)防控技術(shù)規(guī)程

ICS01.040.65CCSB15/19CodeofSustainablePreventionandControlofCitrusHuanglongbinginthe湖南省植物保護(hù)學(xué)會發(fā)布I本文件是根據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由湖南省植物保護(hù)學(xué)會提出。本文件由湖南省植物保護(hù)學(xué)會歸口。本文件起草單位為湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)、贛南師范大學(xué)。本文件主要起草人：王運(yùn)生、戴良英、易龍、戴素明、李大志、宋娜、李娜、周俊、胡威、鮑敏麗。1擴(kuò)散前沿區(qū)柑橘黃龍病可持續(xù)防控技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了擴(kuò)散前沿區(qū)柑橘黃龍病可持續(xù)防控的術(shù)語和定義、檢疫、預(yù)防、診斷、防控等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于擴(kuò)散沿區(qū)柑橘黃龍病可持續(xù)防控。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5040柑桔苗木產(chǎn)地檢疫規(guī)程GB4285農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)GB/T8321農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則GB15569農(nóng)業(yè)植物調(diào)運(yùn)檢疫規(guī)程GB/Z26580柑橘生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范GB/T28062柑桔黃龍病菌實(shí)時熒光PCR檢測方法GB/T29393柑桔黃龍病菌的檢疫檢測與鑒定GB/T35333柑橘黃龍病監(jiān)測規(guī)范NY/T973柑橘無病毒苗木繁育規(guī)程N(yùn)Y/T974柑橘苗木脫毒技術(shù)規(guī)范NY/T975柑橘栽培技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T2920柑橘黃龍病防控技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義GB/T35333和界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1柑橘黃龍?。–itrusHuanglongbing）柑橘黃龍病是一類由韌皮部寄生的革蘭氏陰性菌韌皮部桿菌引起的柑橘類系統(tǒng)性植物病害，是一種2病原體觸發(fā)的免疫疾病。柑橘黃龍病的傳播方式主要有柑橘木虱傳播和嫁接傳播，造成柑橘葉片黃化、果實(shí)品質(zhì)下降、產(chǎn)量降低、樹勢衰退甚至死亡。3.2柑橘黃龍病擴(kuò)散前沿區(qū)CitrusHuanglongbingDiffusionFrontZones擴(kuò)散前沿區(qū)是指柑橘黃龍病新發(fā)生區(qū)，位于流行區(qū)與無病區(qū)之間，包括湖南中西部、江西中部、浙江中西部、四川東南部、云南東北部。前沿區(qū)黃龍病零星發(fā)生，發(fā)病率低于1‰，病樹多表現(xiàn)為無癥狀。區(qū)域內(nèi)柑橘木虱也為零星發(fā)生，百梢柑橘木虱頭數(shù)低于1頭。4擴(kuò)散前沿區(qū)柑橘黃龍病防控策略按照NY/T2920，柑橘黃龍病防控策略為“種植無病大苗，嚴(yán)防柑橘木虱，徹底鏟除病株”，俗稱黃龍病防控“三板斧”。擴(kuò)散前沿區(qū)黃龍病防控技術(shù)在傳統(tǒng)的“三板斧”基礎(chǔ)上，需加強(qiáng)早期預(yù)警和失管果園防控，將病原檢測和監(jiān)測貫穿全過程。5防控措施5.1病害監(jiān)測定期對果園進(jìn)行巡查監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)疑似病株，及時抽取送檢，確診為病株后，以病株為中心，周圍2圈每株樹均要送檢。送檢時，每株樹東南西北四個方向各取一個枝條，每個枝條從下到上取5-8片葉子，混合后作為一個樣品。檢測方法見附件B。5.2園區(qū)生態(tài)隔離充分利用自然地形，在果園周圍種植防風(fēng)林，對果園形成適當(dāng)生態(tài)隔離，在地勢平緩地區(qū)，在果園四周可做防蟲墻進(jìn)行隔離，防蟲墻高4米，用60目及以上的防蟲網(wǎng)圍住。新果園要全面清除園內(nèi)及周邊的九里香、黃皮等柑橘木虱寄主。園區(qū)規(guī)劃應(yīng)符合NY/T975規(guī)定。5.3種植無病蟲種苗選擇種苗時應(yīng)根據(jù)植物檢疫要求，種植經(jīng)過檢疫的無病種苗，具體要求按照GB5040-2003，GB15569-2009和NY/T973-2006的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行，也不要種植有柑橘木虱取食的種苗。3年以下小苗在苗圃進(jìn)行集中管理，果園定殖3年以上大苗。5.4栽培管理加強(qiáng)果園基礎(chǔ)建設(shè)，如果果園地勢平坦，要挖溝排水，不積水?？茖W(xué)肥水管理，增強(qiáng)樹勢，提高抗病能力。其他要求按照NY/T975的規(guī)定執(zhí)行。5.5清除病株3挖除病樹之前1-3天，對病樹及附近植株施用防治木虱觸殺性藥劑，將病樹連根挖除，對于不能徹底挖除的，可先砍除地上部分，樹樁不超過10cm，樹樁切十字型切口，切面和切口處涂草甘磷或煤油，并用黑膜包裹，防止病樹樁萌發(fā)出新的枝條?？吵牟?、病樁、根等應(yīng)集中銷毀處理。5.6失管果園防控加強(qiáng)失管、半失管果園柑橘黃龍病和柑橘木虱發(fā)生動態(tài)監(jiān)控，發(fā)現(xiàn)失管、半失管果園內(nèi)有黃龍病或有柑橘木虱發(fā)生，應(yīng)立即通知當(dāng)?shù)刂参锓酪卟块T和村部主管部門，向果園主人出具整改通知，應(yīng)加強(qiáng)柑橘木虱防治和病樹清除，對于失管無主果園，應(yīng)由當(dāng)?shù)刂鞴懿块T農(nóng)業(yè)執(zhí)法人員統(tǒng)一挖除并進(jìn)行無害化處理。5.7木虱防治5.7.1農(nóng)業(yè)防治5.7.1.1增施有機(jī)肥，冬季每株施有機(jī)肥5kg~10kg，施肥時期以摘果后1個星期之內(nèi)為好，保水性較差的果園可加使農(nóng)用保水劑，每株40g~50g。5.7.1.2科學(xué)控草。提倡生草栽培，改善橘園生態(tài)環(huán)境，保護(hù)利用天敵。以機(jī)械割草控制雜草生長，盡量不施用除草劑，果園禁止使用草甘膦。5.7.1.3梢期管理，采取分批抹梢、統(tǒng)一打頂?shù)姆椒?，以達(dá)到統(tǒng)一放梢的目的。通過合理的肥水管理和栽培管理，統(tǒng)一放春梢，通過抹梢、以梢控梢、殺梢等手段控制夏秋梢。5.7.2物理防治在樹冠外圍中上部懸掛粘蟲黃板，每畝20片~30片。5.7.3化學(xué)防治5.7.3.1防治原則遵循“科學(xué)、安全、高效、綠色”原則，以預(yù)防為主，采取不同作用機(jī)制的藥劑輪換使用，減緩抗藥性的產(chǎn)生。5.7.3.2施藥方法及時期采用飛防或噴霧器噴霧法，重點(diǎn)施藥新梢部位。新梢2cm~3cm噴第一次藥，10d~15d后噴第二次藥，藥劑選擇見附件C。農(nóng)藥使用按照GB4285和GB/T8321的規(guī)定執(zhí)行。6檔案管理與保存建立黃龍病防控工作檔案，包括繁育和購買種苗記錄、種苗檢疫報告、木虱防治時間、藥品品種與濃度、防治效果、黃龍病發(fā)生時間、病樹發(fā)生位置、病樹處理措施及時間、防控記錄見附件D。41.葉片黃化葉片從葉脈附近開始褪綠，逐漸擴(kuò)散形成黃綠相間的斑駁，嚴(yán)重時整張葉片呈現(xiàn)均勻的黃化。具體癥狀分為幾種類型：均勻黃化葉片：葉片呈現(xiàn)均勻的淺黃綠色。斑駁型黃化葉片：葉片呈現(xiàn)黃、綠相間的不均勻斑塊狀。2.果實(shí)癥狀包括幼果畸形、易落果，以及“紅鼻子”果，即成熟期果實(shí)只有果蒂周圍是紅色，其他部分仍是綠色，剖開后里面不對稱，一邊大，一邊小，味道酸澀且汁少。3.與缺素癥狀的區(qū)別黃龍病與缺素癥狀有時可能表現(xiàn)出相似的黃化現(xiàn)象，但黃龍病的黃化特征更為斑駁和不對稱。此外，黃龍病的癥狀隨季節(jié)變化而有所不同，而缺素癥狀則相對穩(wěn)定。在田間，僅憑黃化癥狀并不能確定是黃龍病，可能需要進(jìn)一步的分子檢測（附件B）和分析。枝條均勻黃化斑駁黃化紅鼻子果柑橘黃龍病后期癥狀51.植物總DNA抽提用CTAB法提取總DNA，主要步驟如下：（1）取100mg新鮮葉片或者柑橘葉脈組織放于滅菌研缽中，加入液氮研磨成粉末，移至1.5mL離心管中，加入500μL2%CTAB(65°C預(yù)熱）；（2）65°C水浴30min，期間每7分鐘顛倒混勻；（3）冷卻2min，加入500μL氯仿異戊醇（24：1）震蕩5min；-20°C冷卻10min，10000rpm4°C離心20min;（4）提取上清，加入340μL冷凝的異丙醇，輕輕混勻，-20°C放置30min;（6）棄上清，用500μL75%乙醇洗兩次，倒掉乙醇晾干;（7）加入50μL無菌水，65°C加熱3min溶解得DNA樣本，用于后續(xù)PCR檢測。2.PCR檢測PCR檢測引物序列，上游引物：GGAGAGGTGAGTGGAATTCCGA，下游引物：ACCCAACATCTAGGTAAAAACC。擴(kuò)增片斷大?。杭s500bp。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系試劑體積(μL）上游引物（10μmol/L）0.5下游引物（10μmol/L）0.5Mix模板DNA2加ddH2O至20PCR擴(kuò)增反應(yīng)參數(shù)3.電泳及成像6將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10μL與3μL上樣緩沖液(5×)和2μLSYBRGreenI(1×)染色液混合，加入到1.5%瓊脂糖凝膠的點(diǎn)樣孔內(nèi)，同時設(shè)置DL2000標(biāo)準(zhǔn)分子量DNA作為片段大小標(biāo)準(zhǔn)，120V電壓電泳約30min。3.2成像及分析將電泳后的瓊脂糖凝膠放置于凝膠成像系統(tǒng)內(nèi)，打開紫外燈，在凝膠成像系統(tǒng)控制軟件上觀察PCR擴(kuò)增條帶。4.結(jié)果判定在凝膠成像系統(tǒng)觀察，電泳后的瓊脂糖凝膠上，陽性對照的特異性條帶如圖1所示，陰性對照沒有該特異性條帶。供試樣品出現(xiàn)與陽性對照大小一致的特異性條帶，判定為陽性，即該樣品為柑橘黃龍病陽性；供試樣品沒有出現(xiàn)與陽性對照大小一致的特異性條帶，判定為柑橘黃龍病陰性。圖1柑橘黃龍病PCR檢測電泳圖，圖中顯示樣本2、3為陽性，樣本1為陰性5.檢測后樣品的