《水環(huán)境監(jiān)測》課件-學(xué)習(xí)情景43 糞大腸菌群的測定

室內(nèi)環(huán)境檢測與控制技術(shù)專業(yè)資源庫ProfessionalResourceBaseofIndoorEnvironmentalInspectionandControlTechnology糞大腸菌群的測定——多管發(fā)酵法一

預(yù)備知識(shí)糞大腸菌群是總大腸菌群中的一部分，主要來自糞便，與大腸菌群相比，糞大腸菌群在人和動(dòng)物糞便中所占的比例較大，而且在自然界容易死亡。在44.5℃溫度下能生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群成為糞大腸菌群。衛(wèi)生學(xué)概念，又稱為耐熱大腸菌群，主要是大腸桿菌，但也包括克雷伯氏菌屬等。用提高培養(yǎng)溫度的方法，造成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群生長的條件，使培養(yǎng)出來的菌主要為來自糞便中的大腸菌群，從而更準(zhǔn)確地反映出水質(zhì)受糞便污染的情況。糞大腸菌群的測定可以用多管發(fā)酵法或?yàn)V膜法。一

預(yù)備知識(shí)多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)簡稱MPN來表示試驗(yàn)結(jié)果的。實(shí)際上它是根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)理論，估計(jì)水體中的大腸桿菌密度和衛(wèi)生質(zhì)量的一種方法。如果從理論上考慮，并且進(jìn)行大量的重復(fù)檢定，可以發(fā)現(xiàn)這種估計(jì)有大于實(shí)際數(shù)字的傾向。不過只要每一稀釋度試管重復(fù)數(shù)目增加，這種差異便會(huì)減少，對(duì)于細(xì)菌含量的估計(jì)值，大部分取決于那些既顯陽性又顯陰性的稀釋度。因此在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，水樣檢驗(yàn)所要求重復(fù)的數(shù)目，要根據(jù)所要求數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度而定。二實(shí)訓(xùn)準(zhǔn)備準(zhǔn)備事宜名稱方法樣品的采集和保存

水樣采集在經(jīng)滅菌的玻璃瓶內(nèi)，要盡快分析，一般不宜超過2h，否則應(yīng)4℃保存，可保存12h。準(zhǔn)備事宜名稱方法實(shí)訓(xùn)試劑水新制備的去離子水。單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液成分：蛋白胨10g，牛肉浸膏3g，乳糖5g，氯化鈉5g，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，蒸餾水1000ml。制法：將蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化鈉加熱溶解于1000ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH為7.2~7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，充分混勻，分裝于含有倒置的小玻璃管的試管中，于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃滅菌20min，貯存于暗處備用。二實(shí)訓(xùn)準(zhǔn)備準(zhǔn)備事宜名稱方法實(shí)訓(xùn)試劑三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液按上述配方比例三倍（除蒸餾水外），配成三倍濃縮的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，制法同上。EC培養(yǎng)液成分：胰胨20g，乳糖5g，膽鹽三號(hào)1.5g，磷酸氫二鉀（K2HPO4）4g，磷酸二氫鉀（KH2PO4）1.5g，氯化鈉5g，蒸餾水1000ml。制法：將上述成分加熱溶解，然后分裝于含有玻璃導(dǎo)管的試管中。置高壓蒸汽滅菌器中，115℃滅菌20min，滅菌后pH應(yīng)為6~9。培養(yǎng)基的存放在密封瓶中的脫水培養(yǎng)基成品要存放在大氣濕度低、溫度低于30℃的暗處，存放時(shí)應(yīng)避免陽光直接照射，并且要避免雜菌侵入和液體蒸發(fā)。當(dāng)培養(yǎng)液顏色變化或體積變化明顯時(shí)廢棄不用。二實(shí)訓(xùn)準(zhǔn)備于各裝有5ml三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），各加10ml水樣于各裝有10ml單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），各加1ml水樣于各裝有10ml單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），各加1ml1∶10稀釋的水樣各管充分混勻，在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)初發(fā)酵試驗(yàn)產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明為試驗(yàn)陽性三分析步驟輕微振蕩初發(fā)酵試驗(yàn)陽性結(jié)果的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)或滅菌棒將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中。在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h（水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培養(yǎng)基的液面，接種后所有發(fā)酵管必須在30min內(nèi)放進(jìn)水浴中）。培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽性。根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所出現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目，從教材中表2或表3中查得每升水樣中的糞大腸菌群。接種水樣為100ml2份、10ml10份、總量300ml時(shí)，查表2可得每升水樣中的糞大腸菌群；接種5份10ml水樣、5份1ml水樣、5份0.1ml水樣時(shí)，查表3求得MPN指數(shù)，MPN值再乘10，即為1L水樣中的糞大腸菌群。如果接種的水樣不是10ml、1ml、0.1ml，而是較低的或較高的三個(gè)濃度的水樣量，也可查表3求得MPN值，再經(jīng)式

計(jì)算成每100ml的MPN值，MPN值再乘以10，即為1L水樣中的糞大腸菌群。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)三分析步驟分析人

校對(duì)人

審核人

樣品編號(hào)接種水量（ml）初發(fā)酵時(shí)水樣呈陽性數(shù)復(fù)發(fā)酵時(shí)水樣呈陽性數(shù)MPN值（個(gè)/100ml）糞大腸菌群（個(gè)/L）備注