《水環(huán)境監(jiān)測(cè)》課件-學(xué)習(xí)情景41 細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定

室內(nèi)環(huán)境檢測(cè)與控制技術(shù)專業(yè)資源庫(kù)ProfessionalResourceBaseofIndoorEnvironmentalInspectionandControlTechnology細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定——平皿計(jì)數(shù)法一

預(yù)備知識(shí)菌落總數(shù)測(cè)定是測(cè)定水中需氧菌、兼性厭氧菌和異養(yǎng)菌密度的方法。因?yàn)榧?xì)菌能以單獨(dú)個(gè)體、成雙成對(duì)、鏈狀、成簇等形式存在，而且沒(méi)有任何單獨(dú)一種培養(yǎng)基能滿足一個(gè)水樣中所有細(xì)菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落可能要低于真正存在的活細(xì)菌的總數(shù)。菌落總數(shù)是指水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上有氧條件下37℃培養(yǎng)48h后，所得1ml水樣所含菌落的總數(shù)。此法主要作為判定飲用水、水源水等污染程度的標(biāo)志。二實(shí)訓(xùn)準(zhǔn)備準(zhǔn)備事宜名

稱方

法樣品的采集和保存

水樣采集在經(jīng)滅菌的玻璃瓶?jī)?nèi)，要盡快分析，一般不宜超過(guò)2h，否則應(yīng)4℃保存，可保存12h。實(shí)訓(xùn)試劑水蒸餾水或純水。營(yíng)養(yǎng)瓊脂成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂10~20g，蒸餾水1000ml。制法：將上述成分混合后，加熱溶解，調(diào)整pH為7.4~7.6，分裝于玻璃容器中（如用含雜質(zhì)較多的瓊脂時(shí)，應(yīng)先過(guò)濾），經(jīng)103.43kPa（121℃，151b）滅菌20min，儲(chǔ)存于暗處備用。三分析步驟生活生活飲用水水源水以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取兩份1ml充分混勻的水樣（平行接種）

以無(wú)菌操作方法吸取1ml充分混勻的水樣，注入盛有9ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1︰10稀釋液注入滅菌平皿中吸取1︰10稀釋液1ml注入盛有9ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1︰100稀釋液，按同法依次稀釋成，1︰1000，1︰10000稀釋液等備用傾注約15ml已融化并冷卻到45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用滅菌吸管吸取未稀釋水樣和2~3個(gè)適宜稀釋度的水樣1ml，分別注入滅菌平皿內(nèi)（每個(gè)稀釋度應(yīng)做一平行接種）三分析步驟立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻水樣接種的同時(shí)，另用一個(gè)平皿只傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基空白對(duì)照待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上置于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h菌落計(jì)數(shù)（可用眼睛直接觀察，可用菌落計(jì)數(shù)器或放大鏡檢查）三分析步驟記下各平皿菌落數(shù)，求同稀釋度的平均菌落數(shù)按各種不同情況計(jì)算和報(bào)告計(jì)數(shù)結(jié)果求同稀釋度的平均數(shù)時(shí)，若其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，不宜采用，應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，其余一半中菌落數(shù)分布很均勻，則可將此半皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)①首先選擇平均菌落數(shù)在30~300之間者進(jìn)行計(jì)算，若只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍，將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例1）。②若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30~300之間，則視二者之比值決定。比值小于2報(bào)告兩者的平均數(shù)（如表1實(shí)例2），若比值大于或等于2報(bào)告其中稀釋度較小的菌落數(shù)（見(jiàn)表1實(shí)例3和4）。③若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例5）。④若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例6）。⑤若所有稀釋度的平均菌落數(shù)不在30~300之間，以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例7）。⑥若所有稀釋度的平板上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，以未檢出報(bào)告之。⑦若所有平板上都菌落密布，不要用“多不可計(jì)”報(bào)告，在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中2個(gè)平板1cm2中的菌落數(shù)，除2求每平方厘米內(nèi)平均菌落數(shù)，乘以皿底面積63.61cm2，再乘其稀釋倍數(shù)作報(bào)告。⑧菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算，也可用10的指數(shù)來(lái)表示（見(jiàn)表1“報(bào)告方式”欄）。三分析步驟三分析步驟實(shí)例不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)/（CFU/ml）報(bào)告方式/（CFU/ml）10-110-210-31136516420-1640016000或1.6×10422760295461.63775038000或3.8×10432890271602.22710027000或2.7×1044150308215001500或1.5×1035多不可計(jì)1650513-513000510000或5.1×105627115-270270或2.7×1027多不可計(jì)30512-3050031000或3.1×104表1稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式四菌落總數(shù)分析原始數(shù)據(jù)記錄表樣品編號(hào)不同稀釋度的菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)（CFU/ml）10010-110-210-3

1

2

平均

1

2

平均

分析人

校對(duì)人