GB∕T 29637-2023 疑似毒品中氯胺酮檢驗（正式版）

疑似毒品中氯胺酮檢驗2023-11-27發(fā)布國家標(biāo)準化管理委員會I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T29637—2013《疑似毒品中氯胺酮的氣相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜檢驗方法》,與GB/T29637—2013相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：——更改了“范圍”(見第1章，2013年版的第1章);——刪除了氣相色譜方法原理(見2013年版的第4章);——增加了液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜方法原理(見第4章);——刪除了氣相色譜分析用試劑及標(biāo)準物質(zhì)、儀器及量器具(見2013年版的第5章);——增加了液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜分析用試劑、儀器和材料(見第5章);——更改了氣相色譜-質(zhì)譜定性質(zhì)控標(biāo)準工作溶液的質(zhì)量濃度(見5.1.1.6,2013年版的6.1);——增加了液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜定性分析(見6.1.2和6.2);——刪除了氣相色譜定量分析(見2013年版的第7章);——增加了液相色譜定量分析(見第7章);——更改了結(jié)果評價(見第8章，2013年版的第8章)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國公安部提出。本文件由全國刑事技術(shù)標(biāo)準化技術(shù)委員會(SAC/TC179)歸口。本文件起草單位：公安部禁毒情報技術(shù)中心、黑龍江省公安廳、云南省公安廳、公安部鑒定中心。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2013年首次發(fā)布為GB/T29637—2013;——本次為第一次修訂。1疑似毒品中氯胺酮檢驗1范圍本文件描述了氯胺酮的氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)、液相色譜(LC)、液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)定性檢驗方法和液相色譜(LC)定量檢驗方法的原理、試劑、儀器和材料、檢驗分析步驟及結(jié)果評價。本文件適用于疑似毒品中氯胺酮的定性分析和定量分析。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T27418測量不確定度評定和表示GA/T122毒物分析名詞術(shù)語3術(shù)語和定義GA/T122界定的術(shù)語和定義適用于本文件。對疑似毒品中的氯胺酮(氯胺酮基本信息見附錄A)進行提取。采用氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜法檢測，以氣相色譜-質(zhì)譜保留時間、質(zhì)譜特征離子、離子豐度比以及液相色譜保留時間作為定性判斷依據(jù)；采用液相色譜-質(zhì)譜法檢測，以保留時間、質(zhì)譜特征離子對和離子對豐度比作為定性判斷依據(jù)；采用液相色譜法檢測，以色譜峰面積作為定量依據(jù)，用外標(biāo)單點法或外標(biāo)標(biāo)準曲線法進行定量分析。5.1試劑5.1.1GC-MS分析用試劑除非另有說明，在分析中使用的試劑均為色譜純。5.1.1.520%碳酸鈉水溶液(以配制100mL為例):稱取碳酸鈉20g,用水溶解并定容至100mL,混2a)標(biāo)準物質(zhì)儲備液：氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液；b)標(biāo)準工作溶液按實驗需求分為以下兩類：——氣相色譜-質(zhì)譜定性用標(biāo)準工作溶液：移取氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液適量，用甲醇稀釋，配制成0.1mg/mL的氯胺酮標(biāo)準工作溶液，0℃~4℃冷藏保存，有效期3個月，也可根據(jù)實際情況配制實驗中所用其他質(zhì)量濃度的定性用標(biāo)準工作溶液；——氣相色譜-質(zhì)譜定性質(zhì)控標(biāo)準工作溶液：移取氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液適量，用甲醇稀釋，配制成0.005mg/mL的氯胺酮標(biāo)準工作溶液，0℃~4℃冷藏保存，有效期1個月。除非另有說明，在分析中使用的試劑均為LC-MS級。5.1.2.6濃磷酸(H?PO?):含量大于或等于85%。5.1.2.70.1%甲酸水溶液(以配制1000mL為例):量取1mL甲酸，加入水稀釋并定容至1000mL,混勻后0.22μm水系濾膜過濾，超聲波清洗器超聲，靜置后即可5.1.2.8磷酸-三乙胺緩沖液(以配制1000mL為例):量取4.12mL濃磷酸，加入200mL水稀釋；量取5.56mL三乙胺，滴入上述磷酸溶液中；用水稀釋并定容至1000mL,混勻后0.22μm水系濾膜過濾，超聲波清洗器超聲，靜置后即可使用。a)標(biāo)準物質(zhì)儲備液：氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液；b)標(biāo)準工作溶液按實驗需求分為以下六類：——液相色譜-質(zhì)譜定性用標(biāo)準工作溶液：移取氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液適量，用甲醇稀釋，配制成50ng/mL的氯胺酮標(biāo)準工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用，也可根據(jù)實際情況配制實驗中所用其他質(zhì)量濃度的定性用標(biāo)準工作溶液；——液相色譜-質(zhì)譜定性質(zhì)控標(biāo)準工作溶液：移取氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液適量，用甲醇稀釋，配制成1ng/mL的氯胺酮標(biāo)準工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用；——液相定性用標(biāo)準工作溶液：移取氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液適量，用甲醇稀釋，配制成0.1mg/mL的氯胺酮標(biāo)準工作溶液，0℃~4℃冷藏保存，有效期3個月，也可根據(jù)實際情況配制實驗中所用其他質(zhì)量濃度的定性用標(biāo)準工作溶液；——液相定性質(zhì)控標(biāo)準工作溶液：移取氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液適量，用甲醇稀釋，配制成0.005mg/mL的氯胺酮標(biāo)準工作溶液，0℃~4℃冷藏保存，有效期1個月；——液相外標(biāo)單點法定量用標(biāo)準工作溶液：配制方法及質(zhì)量濃度同液相定性用標(biāo)準工作溶液；——液相外標(biāo)標(biāo)準曲線法定量用標(biāo)準工作溶液：移取氯胺酮標(biāo)準物質(zhì)儲備液適量，用甲醇配制成質(zhì)量濃度為0.01mg/mL～0.5mg/mL的標(biāo)準工作溶液，至少配制5個質(zhì)量濃度。5.2儀器和材料5.2.1GC-MS分析用儀器和材料GC-MS分析用儀器和材料包括：3b)電子天平：實際分度值d小于或等于0.01mg;d)渦旋振蕩器；e)移液器或移液管；f)容量瓶；g)具蓋離心管；a)液相色譜儀(LC):配有二極管陣列(DAD)或紫外檢測器(UV);b)液相色譜-質(zhì)譜儀(LC-MS):配有電噴霧離子源；c)電子天平：實際分度值d小于或等于0.01mg;e)渦旋振蕩器；f)移液器或移液管；h)具蓋離心管；j)超聲波清洗器6定性分析振蕩10min,以不低于4000r/min離心5min,取上清液作為樣品溶液，供GC-MS分析。樣品經(jīng)均質(zhì)化后，根據(jù)實際需求，吸取10μL～200μL于具蓋離心管中，稱量其質(zhì)量(精確至0.01mg),加入1mL的20%碳酸鈉水溶液和2mL正己烷，振蕩5min,以不低于4000r/min離心5min分層。吸取上層有機相1mL,加入適量無水硫酸鈉干燥，過濾膜后，濾液作為樣品溶液，供GC-MS分析。以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器和不同樣品等實際情況進行調(diào)整。石英玻璃毛細柱(5%苯基+95%甲基聚硅氧烷)或DB-35MS石英玻璃毛細柱(35%苯基+65%二甲基乙烯聚硅氧烷)或其他等效柱，30m×0.25mm×0.25μm。4b)色譜柱溫程1:初始溫度60℃,以15℃/min升溫至280℃,保持15min;色譜柱溫程2:初始溫度140℃,以20℃/min升溫至300℃,保持4min。c)進樣口溫度：280℃。d)分流比：20:1(溫程1)或40:1(溫程2)。j)離子源溫度：230℃。振蕩10min,以不低于4000r/min離心5min,取上清液，過濾膜后作為樣品溶液，供LC分析。于具蓋離心管中，稱量其質(zhì)量(精確至以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器和不同樣品等實際情況進行調(diào)整：a)色譜柱：C??色譜柱(150mm×4.6mm,5μm)或其他等效柱：g)洗脫程序：根據(jù)樣品情況選擇等度洗脫或梯度洗脫：1)等度洗脫(適用于純度較高的晶體樣品):16%A+84%B,分析時間8min;2)梯度洗脫(適用于成分較為復(fù)雜的樣品):洗脫程序參考表1。5時間AB振蕩10min,以不低于4000r/min離心5min,取上清液，過濾膜后以甲醇稀釋合適倍數(shù)，供LC-MS分析。于具蓋離心管中，稱量其質(zhì)量(精確至以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器和不同樣品等實際情況進行調(diào)整：a)色譜柱：BEHCg(2.1mm×b)流動相：A為甲醇，B為0.1%甲酸水溶液；d)柱溫：35℃;e)洗脫程序：見表2;表2梯度洗脫程序時間minAB037896GB/T29637—2023h)掃描方式：正離子模式；i)毛細管電壓：4000V;j)干燥氣溫度：350℃;k)質(zhì)譜定性特征離子對和去簇電壓、碰撞能量條件見表3。表3質(zhì)譜定性特征離子對和去簇電壓、碰撞能量目標(biāo)物定性特征離子對去簇電壓V碰撞能量氯胺酮238.1>207.1238.1>125.0羥亞胺238.1>152.0238.1>163.07LC定量分析7.1外標(biāo)單點法7.1.1含量預(yù)分析固體樣品經(jīng)均質(zhì)化后，根據(jù)實際需求，稱取10mg～100mg樣品置于具蓋離心管中，加入10mL甲醇，密封并振蕩10min,以不低于4000r/min離心5min,上清液過濾膜后作為樣品溶液，供LC分析?；蚋鶕?jù)實際需要，將上清液過濾膜后用甲醇稀釋，稀釋液作為樣品溶液，供LC分析。0.01mg),加入2mL甲醇，超聲溶解，渦旋混勻，過濾膜后作為樣品溶液，供LC分析。或根據(jù)實際需要，過濾膜后用甲醇稀釋，稀釋液作為樣品溶液，供LC分析。采用外標(biāo)單點法定量用標(biāo)準工作溶液作為定量參照。按照公式(1)計算樣品中目標(biāo)物的預(yù)分析含量。式中：w——樣品中氯胺酮的含量(質(zhì)量分數(shù));C?！鈽?biāo)單點法定量用標(biāo)準工作溶液中氯胺酮的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);A——樣品溶液中氯胺酮的色譜峰面積值；V?——樣品溶液初次定容體積，單位為毫升(mL);V?——從初次定容樣品溶液V,中移取的體積，單位為毫升(mL);V?——將V?稀釋時加入甲醇的體積，單位為毫升(mL);A?！鈽?biāo)單點法定量用標(biāo)準工作溶液中氯胺酮的色譜峰面積；m——樣品的稱量質(zhì)量，單位為毫克(mg)。77.1.2準確定量7.1.2.1稱量重量的計算根據(jù)預(yù)分析中氯胺酮含量測定結(jié)果，選擇合適的定容體積、稀釋倍數(shù)(樣品提取操作參數(shù)選擇見附錄B),并按照公式(2)計算出樣品稱量質(zhì)量(m),使樣品溶液中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度在所用標(biāo)準工作溶液質(zhì)量濃度的(100±30)%范圍內(nèi)。式中：m——準確定量時樣品的稱量質(zhì)量，單位為毫克(mg);……C。——外標(biāo)單點法定量用標(biāo)準工作溶液中氯胺酮的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);V——初次定容體積，單位為毫升(mL);D——稀釋倍數(shù)；樣品中氯胺酮的預(yù)分析含量(質(zhì)量分數(shù))。7.1.2.2樣品提取根據(jù)7.1.2.1計算結(jié)果，平行稱取樣品2份于具蓋離心管中(當(dāng)需要對定量結(jié)果進行不確定度評定時，至少平行稱取6份)。根據(jù)預(yù)分析含量范圍，加入相應(yīng)的甲醇至初次定容體積，密封并超聲振蕩10min,以不低于4000r/min離心5min,上清液過濾膜后作為樣品溶液，供LC分析；當(dāng)樣品溶液需要稀釋時，將上清液過濾膜后，按照稀釋倍數(shù)用甲醇進行稀釋定容，稀釋液作為樣品溶液，供LC分析。7.1.2.3LC參考條件同6.1.2.2。分別吸取樣品空白(甲醇)、樣品溶液、標(biāo)準溶液空白(甲醇)和外標(biāo)單點法定量用標(biāo)準工作溶液，按7.1.2.3條件進樣分析。當(dāng)稱取2份樣品時，每份樣品進樣2針～3針。7.1.2.5含量計算按照公式(1)計算樣品中氯胺酮含量。7.2外標(biāo)標(biāo)準曲線法7.2.1標(biāo)準工作曲線繪制采用5.1.2.9中配制的外標(biāo)標(biāo)準曲線法定量用標(biāo)準工作溶液及標(biāo)準溶液空白(甲醇)繪制線性范圍為0.01mg/mL～0.5mg/mL的氯胺酮標(biāo)準工作曲線，以氯胺酮系列標(biāo)準工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準曲線回歸方程，其線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)大于0.998。7.2.2樣品制備7.2.2.1固體樣品制備樣品經(jīng)均質(zhì)化后，稱取25mg(精確至0.01mg)于具蓋離心管中，加入10mL甲醇，密封并振蕩8GB/T29637—202310min,以不低于4000r/min離心5min。取適量樣品溶液，按樣品溶液：甲醇=1:4(V/V)的比例進行稀釋，混勻、濾膜過濾，濾液作為樣品溶液，供LC分析。7.2.2.2液體樣品制備樣品經(jīng)均質(zhì)化后，吸取25μL于具蓋離心管中，稱量其質(zhì)量(精確至0.01mg),加入10mL甲醇，超聲溶解，渦旋混勻。取適量樣品溶液，按樣品溶液：甲醇=1:4(V/V)的比例進行稀釋，混勻、濾膜過濾，濾液作為樣品溶液，供LC分析。如果樣品中目標(biāo)物質(zhì)量濃度過低，可適當(dāng)增加取樣量，使樣品峰面積落在標(biāo)準曲線范圍內(nèi)，最多可吸取500μL樣品，稱量其質(zhì)量(精確至0.01mg),并加入相應(yīng)體積的甲醇至10mL,其他超聲、混勻、稀釋等處理過程相同。7.2.3LC參考條件分別吸取樣品空白(甲醇)、樣品溶液，按7.2.3條件進樣分析。當(dāng)稱取2份樣品時，每份樣品進樣2針～3針。7.2.5含量計算根據(jù)樣品溶液中目標(biāo)物的峰面積值和標(biāo)準曲線回歸方程，按公式(3)計算出樣品中目標(biāo)物的含量。式中：w——樣品中氯胺酮的含量(質(zhì)量分數(shù));Y——樣品溶液中氯胺酮色譜峰面積的平均值；b——標(biāo)準曲線回歸方程的截距；50——樣品溶解稀釋體積，單位為毫升(mL);a——標(biāo)準曲線回歸方程的斜率；m——樣品的稱量質(zhì)量，單位為毫克(mg)。8結(jié)果評價8.1定性結(jié)果評價8.1.1GC-MS、LC定性結(jié)果評價8.1.1.1陽性結(jié)果評價：將樣品與氯胺酮定性用標(biāo)準工作溶液的總離子流圖和質(zhì)譜圖進行比對，同時滿足如下兩個條件時，判定為樣品中檢出目標(biāo)物。a)在相同條件下進行GC-MS測定時，樣品溶液中目標(biāo)物與質(zhì)量濃度接近的氣相色譜-質(zhì)譜定性用標(biāo)準工作溶液中的目標(biāo)物相比，色譜峰保留時間一致(相對誤差在±1%之內(nèi))、質(zhì)譜特征離子(不少于三個)一致，且各離子豐度比相對偏差不超過表4規(guī)定的范圍，樣品空白無干擾。氯胺酮氣相色譜-質(zhì)譜總離子流圖、質(zhì)譜圖及特征離子見附錄C和附錄D。b)在相同條件下進行LC測定時，樣品溶液中目標(biāo)物與質(zhì)量濃度接近的液相定性用標(biāo)準工作溶9液中的目標(biāo)物相比，色譜峰保留時間一致(相對誤差在±2.5%之內(nèi)),樣品空白無干擾。氯胺酮液相色譜圖見附錄E。表4離子豐度比的最大允許相對偏差范圍離子豐度比>20%～50%>10%～20%最大允許相對偏差8.1.1.2陰性結(jié)果評價：將樣品與氯胺酮定性質(zhì)控標(biāo)準工作溶液的色譜圖和質(zhì)譜圖進行比對，滿足如下條件之一時，判定為樣品中未檢出目標(biāo)物。a)在相同條件下進行GC-MS測定時，扣除背景后，100mg固體樣品或200μL液體樣品經(jīng)提取后的樣品溶液中未出現(xiàn)與氣相色譜-質(zhì)譜定性質(zhì)控標(biāo)準工作溶液中目標(biāo)物一致的特征離子，標(biāo)準溶液空白無干擾，可判定樣品中未檢出目標(biāo)物。b)在相同條件下進行LC測定時，100mg固體樣品或200μL液體樣品經(jīng)提取后的樣品溶液中未出現(xiàn)與液相定性質(zhì)控標(biāo)準工作溶液中目標(biāo)物保留時間一致的色譜峰，標(biāo)準溶液空白無干擾，可判定樣品中未檢出目標(biāo)物。8.1.2.1陽性結(jié)果評價：在相同條件下進行樣品測定時，樣品溶液中目標(biāo)物與質(zhì)量濃度接近的液相色譜-質(zhì)譜定性用標(biāo)準工作溶液中的目標(biāo)物相比，色譜峰保留時間相對誤差在±2.5%以內(nèi)，定性離子對(至少兩對)與標(biāo)準物質(zhì)工作溶液一致，且離子對豐度比相對偏差不超過表5規(guī)定的范圍，樣品空白無干擾，則可判定檢材樣品中檢出目標(biāo)物。氯胺酮MRM色譜圖見附錄E。表5離子對豐度比的最大允許偏差范圍離子對豐度比>20%～50%>10%～20%最大允許相對偏差8.1.2.2陰性結(jié)果評價：扣除背景后，樣品溶液中未檢出目標(biāo)物特征離子對，液相色譜-質(zhì)譜定性質(zhì)控標(biāo)準工作溶液中檢出目標(biāo)物特征離子對，標(biāo)準溶液空白無干擾，則可判定樣品中未檢出目標(biāo)物。8.2定量結(jié)果評價8.2.1相對相差檢驗平行稱取或移取2份樣品時，測定數(shù)據(jù)按照公式(4)計算相對相差(RD)?！?4)RD——相對相差；w?、w?——兩份樣品平行定量測定的含量數(shù)值；o——兩份樣品平行定量測定的含量平均值；當(dāng)RD小于或等于10%時，數(shù)據(jù)有效；當(dāng)RD大于10%時，需要重新檢驗。GB/T29637—20238.2.2異常值檢驗平行稱取或移取6份樣品時，測定數(shù)據(jù)按照公式(5)進行Grubbs可疑值判別。式中：w;——可疑值；o?——6個(5個)數(shù)據(jù)的平均值；s——6個(5個)數(shù)據(jù)的單次測定標(biāo)準差；G;——Grubbs統(tǒng)計值。G;小于Gn(g?)時，數(shù)據(jù)有效，G;大于或等于Gn9s)時，應(yīng)剔除該數(shù)據(jù)，但只能剔除1個數(shù)據(jù)，否則本次測定無效，需要重新檢驗。8.2.3含量結(jié)果計算平行稱取或移取2份樣品時，以2份樣品含量測定的平均值作為定量結(jié)果；平行稱取或移取6份樣品時，以6份(5份)樣品含量測定的平均值作為定量結(jié)果。8.3結(jié)果表述陽性結(jié)果表述為：從樣品中檢出氯胺酮成分，其中氯胺酮含量為……。含量用百分比表示。陰性結(jié)果表述為：從樣品中未檢出氯胺酮成分。8.4測量不確定度的評定與表述如需提供測量不確定度，測定結(jié)果的不確定度評定與表述按GB/T27418執(zhí)行。