布魯氏菌競爭磁微粒CLIA抗體檢測方法

1布魯氏菌競爭磁微粒CLIA抗體檢測方法本文件規(guī)定了布魯氏菌競爭磁微粒CLIA抗體檢測方法的試劑下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適NY/T5414縮略語CLIA：化學發(fā)光免疫分析法（ChemiluminescenceImmunoassELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗（EnzymeLinkedImmunosorbentAss2—離心機：最高轉速：16000rpm；—1.5mL尖底離心管；本方法使用磁微?；瘜W發(fā)光免疫分析法，將布魯氏菌脂多糖作為抗原偶聯(lián)于3μm羧基磁微粒上，采用競爭法原理，同時加入待檢血清和布魯氏菌單抗AP酶標記的酶標抗體工作液進行競爭反加入化學發(fā)光底物，讀取發(fā)光值，待檢樣本抗體含量和發(fā)光值呈負相關。本方法通過檢測國家標準品建立標準曲線，進而定標工作校準品濃度；再通過檢測布魯氏菌抗體工作校準品建立校準曲線，而后將待測樣本結果代入校準曲線計算布魯氏菌抗體含量，判定陰陽性結果。3樣品采集按照NY/T541進行。無菌注射器靜脈采血，不少于2m一周內檢測，可置2℃~8℃條件下保存，若超過一周檢測，應置于-20℃以下冷凍保存。無離子水或滅菌蒸餾水應符合GB/T669操作步驟9.1校準曲線擬合9.2校準曲線校準將布魯氏菌抗體產(chǎn)品校準品1和產(chǎn)品校準品2放入樣本架，按說明書對校準曲線進行校準。4b)同一批次試劑盒使用周期超過28d；9.4樣品檢測d)計算：將發(fā)光值（RLU）代入校準曲線，計算樣本中9.5計算結果290.5IU/mL）為橫坐標、相應檢測發(fā)光值為縱坐標擬合四參數(shù)為校準曲線，四參數(shù)模式為Y=(a-d)/[1+(x/c)*b]+d，當R2高于0.99時，可用于結果計算和判定。將待檢樣品檢測發(fā)光值代入校準曲線，計算結果即為待檢樣本中布魯氏菌抗體含量。56A.125×濃縮洗液配制表A.125×濃縮洗液配方62.16g225.00g13.75g加滅菌蒸餾水至600mL，溶解，定容至10A.2校準品稀釋液配制名稱稱量磷酸氫二鈉8.00g磷酸二氫鈉0.20g牛血清白蛋白1.00g海藻糖5.00g0.50mL7），抗體水平合格標準：對采集的血清樣品，按照GB/T18646中的ELISA方法進行抗體水平檢測，以檢測樣本為陽性的最大稀釋梯度判斷布魯氏菌病抗體水平，若結果大于ELISA檢測臨界值，則為合格B.2布魯氏菌抗體工作校準品制備使用校準品稀釋液梯度稀釋布魯氏菌國家標準血清（購自中國食品藥品檢定研究院，批號相應檢測發(fā)光值為縱坐標擬合四參數(shù)（四參數(shù)模式為Y=(a-d)/[1+(x/c)*b]+d）為標準曲線。89名稱范圍標定11652769.6~2282696.2標定2716251.7~1169460.8標定3348736.6~