化妝品中激素類成分的檢測方法

————附件1化妝品中激素類成分的檢測方法DeterminationofHormoneComponentsinCosmetics1范圍本方法規(guī)定了采用高效液相色譜-質(zhì)譜法測定化妝品中的激素類成分，包括定性與定量。本方法適用于膏霜乳液類、液態(tài)水基類、液態(tài)油基類、凝膠類、面膜類等化妝品中激素類成分的定性與定量。2方法提要樣品以乙腈為溶劑提取，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測，根據(jù)保留時間和特征離子對的相對豐度比定性、定量離子對峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量。本方法對63種激素類成分的檢出限、定量下限和取樣量為0.2g時的檢出濃度、最低定量濃度見表1。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1乙腈：色譜純。3.2正己烷：色譜純。3.350%乙腈溶液：取乙腈、水等體積混合，搖勻。3.470%乙腈溶液：取乙腈、水按體積比7:3混合，搖勻。3.5流動相的配制：流動相A：水流動相B：乙腈（3.1）3.6標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液分別稱取各激素標(biāo)準(zhǔn)品（表1）10mg（精確到0.00001g）置于50mL容量瓶中，加乙腈（3.1）使溶解并定容至刻度。4儀器和設(shè)備4.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2分析天平。4.3離心機(jī)。4.4超聲波清洗儀。4.5渦旋混合儀。5分析步驟5.1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備分別取各激素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.6）適量，用50%乙腈溶液（3.3）配制成濃度在定量下限附近的溶液。注：實驗室完成分析方法的優(yōu)化后，如能夠保持儀器、色譜條件、質(zhì)譜測定參數(shù)等分析條件固定，測定指標(biāo)重現(xiàn)性良好，可隨行質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品溶液代替63種激素混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液對分析條件的穩(wěn)定性、結(jié)果的重復(fù)性進(jìn)行控制。如發(fā)生更改儀器、色譜條件、質(zhì)譜條件等情況，均需重新對各組分進(jìn)行定位。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取曲安奈德、鹵美他松、哈西奈德、地塞米松、地塞米松醋酸酯、氟氫縮松、倍他米松戊酸酯、氯倍他索丙酸酯、環(huán)索奈德、雌二醇、己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品各約10mg（精確到0.00001g）置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并定容至刻度，作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)儲備液。置-20℃保存。對于質(zhì)譜響應(yīng)較弱的成分，實驗室可自行增加該成分作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以提高篩查準(zhǔn)確性。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)混合溶液：分別量取質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液適量，用50%乙腈溶液（3.3）配制成濃度在定量下限附近的溶液。5.2樣品處理5.2.1膏霜乳液類、液態(tài)水基類、凝膠類、面膜類樣品稱取樣品0.2g（精確到0.001g），置于10mL具塞比色管中，加入少量乙腈（3.1），在渦旋混合儀上振蕩30s至試樣與提取溶劑混合均勻，然后加入乙腈至近刻度，超聲提取20min，靜置至室溫，用乙腈（3.1）定容至刻度，搖勻，以4000r/min離心10min，濾過（必要時取上清液適量用50%乙腈溶液（3.3）稀釋，稀釋液經(jīng)0.22μm濾膜過濾），濾液作為待測溶液。5.2.2液態(tài)油基類稱取樣品0.2g（精確至0.001g），置于離心管中，加入2mL正己烷（3.2），在渦旋混合儀上分散，然后加入70%乙腈（3.4）3mL，渦旋振蕩2min，4000r/min離心10min，吸取下層溶液至10mL比色管中，上層正己烷層用70%乙腈（3.4）3mL，自“渦旋振蕩2min，…”起，重復(fù)上述步驟一次，合并兩次溶液，加50%乙腈（3.3）定容至刻度，濾過（必要時用適量50%乙腈溶液（3.3）稀釋，稀釋液經(jīng)0.22μm濾膜過濾），濾液作為待測溶液。5.3儀器參考條件5.3.1參考色譜條件色譜柱：C18柱（150×2.0mm，2.2μm），或等效色譜柱。流動相梯度洗脫程序：時間/minV（流動相A）/%V（流動相B）/%09552415852615852795531955流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；5.3.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測模式：正離子、負(fù)離子多離子反應(yīng)監(jiān)測模式，監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表2。表263種激素類成分監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定表編號物質(zhì)名稱母離子（m/z）子離子（m/z）CE（V）1曲安西龍395.2*357.120225.1272潑尼松龍361.2*343.114147.4383潑尼松359.2*341.114147.0354異氟潑尼松379.1*35912341165氫化可的松363.2*121.033105.1676可的松361.2*163.130121.0407甲基潑尼松龍375.2*357.115161.1298倍他米松393.2*355.018146.8379地塞米松393.2*355.017146.84010氟米松411.2*253.025121.14711倍氯米松409.2*279.128147.13212曲安奈德435.2*338.920396.91513地索奈德417.2*323.317225.13014氟尼縮松435.2*321.220397.11615氟輕松453.2*12140337.22016曲安西龍雙醋酸酯479.2*440.9143212217氟氫縮松437.2*36126285.23018潑尼松龍醋酸酯403.2*14732307.11719氟米龍377.2*278.920320.91620氫化可的松醋酸酯405.2*309.124120.84421氟氫可的松醋酸酯423.2*238.939120.94122地夫可特442.2*141.940123.94023潑尼松醋酸酯401.2*295.023146.83924可的松醋酸酯403.2*162.8373432625鹵美他松445.1*154.8322872026甲基潑尼松龍醋酸酯417.2*399.212253.22527倍他米松醋酸酯435.21*309223371628睪酮289.2*97.1351093029地塞米松醋酸酯435.2*309203371930布地奈德431.2*413.115146.93131氫化可的松丁酸酯433.2*34519120.83132孕三烯酮309.1*241.130199.24433氟米龍醋酸酯419.2*279263212134甲睪酮303.2*108.929973035氫化可的松戊酸酯447.3*345.221120.83136曲安奈德醋酸酯477.2*338.922320.82537二氟拉松雙醋酸酯495.2*316.823278.82738氟輕松醋酸酯495.2*120.8523372539炔諾孕酮313.2*245.3241093340倍他米松戊酸酯477.3*354.914278.82841哈西奈德455.2*104.9631213842潑尼卡酯489.2*380.913114.82543氯替潑諾467.2*359.118265.14444阿氯米松雙丙酸酯521.2*301252792445安西奈德503.2*338.9223212346鹵倍他索丙酸酯485.2*391.217353.12047氯倍他索丙酸酯467.2*372.917354.92048氟替卡松丙酸酯501.2*312.919292.92149莫米他松糠酸酯521.1*503132633850醋酸甲地孕酮385.1*325.120267.32451醋酸氯地孕酮405.1*309.323267.33052倍他米松雙丙酸酯505.2*318.920278.93553黃體酮315.2*1093097.33054醋酸甲羥孕酮387.2*32718122.93555倍氯米松雙丙酸酯521.2*503143192056雙氟可龍戊酸酯479.2*375.318439.41757氯倍他松丁酸酯479.2*342.824278.92458己酸羥孕酮429.1*313.219271.32759環(huán)索奈德541.3*523.218323.22560雌二醇271.2*182.9-50145.2-5061雌三醇287.1*171-50143.2-6062雌酮269.1*145-50183.1-5063己烯雌酚267.1*251.2-35222.2-42注：“*”為定量離子對5.4定性取待測溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同分析條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測成分的特征離子峰保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的保留時間一致，且選擇的定性離子的相對豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液的定性離子的相對豐度比的最大偏差不超過表3的規(guī)定，則可以判定樣品中存在對應(yīng)的激素成分。注：如使用質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，應(yīng)滿足以下質(zhì)控條件：①各成分均檢出相應(yīng)的特征離子對，②特征離子對信噪比SN≥7，③保留時間相對偏差在±3%內(nèi)。當(dāng)樣品中檢出疑似陽性成分時，應(yīng)隨行相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行確證。表3定性判定時離子相對豐度的最大允許偏差離子相對豐度（k）k>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%5.5定量5.5.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的制備稱取待測激素標(biāo)準(zhǔn)品約10mg（精確到0.00001g），置100mL容量瓶中，用乙腈（3.1）使溶解并定容至刻度。5.5.2系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取與待測樣品基質(zhì)類型相同空白樣品6份于10mL比色管中（0.2g/份），分別加入標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液適量，按照“5.2樣品處理”的操作步驟處理，然后用50%乙腈溶液（3.3）配制系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。其中氟氫縮松、鹵美他松、哈西奈德、雌二醇、雌三醇、雌酮濃度為6、10、20、30、40、60ng/mL，其余組分濃度為2、4、10、20、40、60ng/mL（標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍可根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整）。5.5.3樣品處理：同5.25.5.4測定取系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)樣，記錄定量離子對色譜峰面積并繪制峰面積（A）-濃度（C）標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)r≥0.99。取待測溶液進(jìn)樣，測得定量離子色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測溶液中各成分的濃度，按“6”計算樣品中各成分的含量。6分析結(jié)果的表述6.1計算QUOTEρ×V×Dω式中： ω——樣品中激素類組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，μg/g；ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測組分的質(zhì)量濃度，μg/mL；V——樣品定容體積，mL；m——樣品取樣量，g；D——稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。6.2回收率和精密度多家實驗室驗證定量下限濃度回收率為72.7～122.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%（n=6），其他濃度回收率為80.7～119.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于11%（n=6）。

附錄A（資料性附錄）63種激素的中文名稱、英文名稱、CAS號及分子式序號中文名稱英文名稱CAS號分子式1曲安西龍Triamcinolone124-94-7C21H27FO62潑尼松龍Prednisolone50-24-8C21H28O53潑尼松Prednisone53-03-2C21H26O54異氟潑尼松9-fluoroprednisolone338-95-4C21H27FO55氫化可的松Hydrocortisone50-23-7C21H30O56可的松Cortisone53-06-5C21H28O57甲基潑尼松龍Methylprednisolone83-43-2C22H30O58倍他米松Betamethasone378-44-9C22H29FO59地塞米松Dexamethasone50-02-2C22H29FO510氟米松Flumethasone2135-17-3C22H28F2O511倍氯米松Beclomethasone4419-39-0C22H29ClO512曲安奈德Triamcinoloneacetonide76-25-5C24H31FO613地索奈德Desonide638-94-8C24H32O614氟尼縮松Flunisolide77326-96-6C24H31FO615氟輕松Fluocinoloneacetonide67-73-2C24H30F2O616曲安西龍雙醋酸酯Triamcinolonediacetate67-78-7C25H31FO817氟氫縮松Fludroxycortide1524-88-5C24H33FO618潑尼松龍醋酸酯Prednisolone21-acetate52-21-1C23H30O619氟米龍F(tuán)luorometholone426-13-1C22H29FO420氫化可的松醋酸酯Hydrocortisone21-acetate50-03-3C23H32O621氟氫可的松醋酸酯Fludrocortisone21-acetate514-36-3C23H31FO622地夫可特Deflazacort14484-47-0C23H29NO423潑尼松醋酸酯Prednisone21-acetate125-10-0C23H28O624可的松醋酸酯Cortisone21-acetate50-04-4C23H30O625鹵美他松Halometasone50629-82-8C22H27ClF2O526甲基潑尼松龍醋酸酯Methylprednisolone21-acetate53-36-1C24H32O627倍他米松醋酸酯Betamethasone21-acetate987-24-6C24H31FO628睪酮Testosterone58-22-0C19H28O229地塞米松醋酸酯Dexamethasone21-acetate1177-87-3C24H31FO630布地奈德Budesonide51333-22-3C25H34O631氫化可的松丁酸酯Hydrocortisone17-butyrate13609-67-1C25H36O632孕三烯酮Gestrinone16320-04-0C21H24O233氟米龍醋酸酯Fluorometholone17-acetate3801-06-7C24H31FO534甲基睪丸酮Methyltestosterone58-18-4C20H30O235氫化可的松戊酸酯Hydrocortisone17-valerate57524-89-7C26H38O636曲安奈德醋酸酯Triamcinoloneacetonideacetate3870-07-3C26H33FO737二氟拉松雙醋酸酯Diflorasonediacetate33564-31-7C26H32F2O738氟輕松醋酸酯Fluocinonide356-12-7C26H32F2O739炔諾孕酮Norgestrel6533-00-2C21H28O240倍他米松戊酸酯Betamethasone17-valerate2152-44-5C27H37FO641哈西奈德Halcinonide3093-35-4C24H32ClFO542潑尼卡酯Prednicarbate73771-04-7C27H36O843氯替潑諾Loteprednoletabonate82034-46-6C24H31ClO744阿氯米松雙丙酸酯Alclometasonedipropionate66734-13-2C28H37ClO745安西奈德Amcinonide51022-69-6C28H35FO746鹵倍他索丙酸酯HalobetasolPropionate66852-54-8C25H31ClF2O547氯倍他索丙酸酯Clobetasol17-propio