(高清版)GBT 40747-2021 飼料瘤胃可發(fā)酵有機物(FOM)測定方法

飼料瘤胃可發(fā)酵有機物(FOM)測定方法2021-10-11發(fā)布2022-05-01實施國家市場監(jiān)督管理總局I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國飼料工業(yè)標準化技術(shù)委員會(SAC/TC76)提出并歸口。本文件起草單位：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)、河北農(nóng)1飼料瘤胃可發(fā)酵有機物(FOM)測定方法1范圍本文件描述了用尼龍袋法測定飼料瘤胃可發(fā)酵有機物(FOM)的方法。本文件適用于植物性飼料原料、全混合日糧(TMR)牛羊瘤胃可發(fā)酵有機物的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6438飼料中粗灰分的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T13088—2006飼料中鉻的測定GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動物飼料試樣的制備NY/T34奶牛飼養(yǎng)標準NY/T815肉牛飼養(yǎng)標準NY/T816肉羊飼養(yǎng)標準3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。瘤胃可發(fā)酵有機物fermentableorganicmatter(FOM)intherumen植物性飼料原料、全混合日糧(TMR)中可被瘤胃微生物發(fā)酵的有機物。瘤胃實時降解率realtimerumendegradationratedp飼料在瘤胃中停留一定時間后某成分被降解的質(zhì)量占該試樣的百分比。k單位時間內(nèi)從瘤胃中流出的食糜質(zhì)量占瘤胃內(nèi)食糜總質(zhì)量的百分比。瘤胃有效降解率effectiverumendegradationrateP根據(jù)不同時間點的實時降解率，結(jié)合實際飼喂條件下瘤胃食糜外流速度計算而得的降解率。2飼料部分細小顆?？赡懿槐唤到舛ㄟ^尼龍袋孔直接逃逸，逃逸部分占總試樣的比值。通過測定飼料中不同時間點的有機物瘤胃實時降解率，采用最小二乘法擬合獲得瘤胃動態(tài)降解參數(shù)，并根據(jù)瘤胃食糜外流速度計算瘤胃有效降解率，乘以飼料有機物含量，即為瘤胃可發(fā)酵有機物。5試驗動物或材料5.1試驗動物及飼養(yǎng)管理5.1.1安裝有永久性瘤胃痿管的4頭成年牛或成年羊，牛用痿管內(nèi)徑應(yīng)大于100mm,羊用痿管內(nèi)徑應(yīng)大于40mm。試驗動物品種相同，年齡、生理狀態(tài)、生產(chǎn)性能相近，健康狀況良好。5.1.2試驗動物完成瘤胃瘺管安裝手術(shù)，恢復(fù)正常生理狀態(tài)。5.1.3采用常規(guī)牛(羊)飼料原料，根據(jù)NY/T34、NY/T815或NY/T816配制日糧，按1.3倍維持水平飼養(yǎng)，日糧精粗比為4:6。5.1.4日糧中不應(yīng)添加任何影響瘤胃功能和內(nèi)環(huán)境及干擾瘤胃正常發(fā)酵機能的物質(zhì)。5.1.5按照常規(guī)飼養(yǎng)管理程序，每天投料2次～3次，自由飲水。5.1.6預(yù)飼期15d,預(yù)飼期間和正式試驗期間不應(yīng)更換日糧，不應(yīng)對試驗動物進行免疫、治療或?qū)嵤┢渌赡芨蓴_瘤胃消化機能的任何措施。5.2尼龍袋及其固定方法5.2.1選用孔徑為50μm的尼龍布制作尼龍袋，牛用規(guī)格為12cm×8cm,羊用規(guī)格為10cm×6cm,袋底部兩角呈鈍圓形。5.2.2用細滌綸線雙線縫合尼龍袋，針孔用在瘤胃內(nèi)不易溶解或脫落的膠黏劑彌合，散邊用電烙鐵燙平或用酒精燈烤焦。5.2.3尼龍袋編號，使用前放入瘤胃內(nèi)72h,取出、洗凈、65℃烘干至兩次稱量之差不大于0.0002g方可使用。5.2.4尼龍袋采用半軟塑料管固定。半軟塑料管的直徑應(yīng)介于0.5cm～0.8cm之間。牛用長度為50cm,羊用長度為25cm。在半軟塑料管的一端距頂端1cm～2cm處向遠端劃透一長3cm的夾縫，用于固定尼龍袋。在半軟塑料管的另一端距頂端1cm～2cm處打孔，直徑約0.5cm,捆綁尼龍線。6儀器設(shè)備6.1分析天平：感量為0.0001g。6.3馬弗爐：溫度能保持在550℃±20℃。6.4恒溫干燥箱：溫度能保持在103℃±2℃和65℃±2℃。7樣品按照GB/T14699.1的規(guī)定采集樣品，風(fēng)干處理后，縮分至約200g。按照GB/T20195規(guī)定制備試38試驗步驟8.1稱樣和裝袋8.1.1將尼龍袋置于恒溫干燥箱內(nèi)65℃烘干至兩次稱量之差不大于0.0002g,冷卻，稱量，精確至8.1.2平行做兩份試驗，稱取適量待測樣品放入尼龍袋底部，不同類別飼料稱樣量見表1,精確至0.0001g,袋口處不應(yīng)沾粘樣品。每種飼料至少裝64個尼龍袋。尼龍袋可以重復(fù)使用，但使用次數(shù)不應(yīng)超過表1不同類別飼料稱樣質(zhì)量單位為克動物品種飼料種類精飼料原料粗飼料原料全混合日糧牛4.5～5.52.5～3.53.5～4.5羊2.5～3.52.0～3.02.0～3.08.2固定尼龍袋分別將兩個裝有待測樣品的尼龍袋口交叉夾于一根半軟塑料管(見5.2.4)的夾縫中，用橡皮筋纏繞8.3投放尼龍袋在早晨飼喂前1h,打開試驗動物的瘤胃瘺管蓋，將固定好尼龍袋的半軟塑料管通過瘤胃瘺管放入瘤胃中，每頭(只)動物瘤胃里放置8根半軟塑料管，尼龍袋應(yīng)始終沉浸于瘤胃內(nèi)容物中。將半軟塑料管或其他材料固定于瘤胃瘺管蓋上。8.4瘤胃內(nèi)培養(yǎng)精飼料原料在瘤胃內(nèi)的培養(yǎng)時間為：2h、4h、8h、16h、24h、30h、36h和48h。粗飼料原料和全8.5取出尼龍袋每個培養(yǎng)時間點從每頭(只)試驗動物瘤胃中各取出2個尼龍袋，直至所有尼龍袋全部取出為止。8.6沖洗尼龍袋取出的尼龍袋應(yīng)立即浸泡在冰水中，盡快用自來水沖洗，在沖洗過程中可用手輕輕擠壓，直至水清為止。8.7樣品校正按8.1另裝2個尼龍袋，作為空白對照，不放入瘤胃內(nèi)，直接對其按8.6進行處理。48.8烘干尼龍袋將所有沖洗過的尼龍袋(連同樣品殘余物)置于恒溫干燥箱內(nèi)65℃下烘干至兩次稱量之差不大于8.9樣品水分的測定按照GB/T6435規(guī)定測定試樣水分含量，計算試樣干物質(zhì)含量。8.10樣品與培養(yǎng)殘余物的粗灰分測定分別將各尼龍袋中的殘余物完全轉(zhuǎn)移出來。按照GB/T6438間點殘余物中的粗灰分含量。規(guī)定測定試樣、空白對照和各培養(yǎng)時9試驗數(shù)據(jù)處理9.1有機物含量試樣、空白對照和各培養(yǎng)時間點樣品殘余物中有機物含量以質(zhì)量分數(shù)won計，數(shù)值以百分比表示，按公式(1)計算：式中：wash——試樣、空白對照和各培養(yǎng)時間點樣品殘余物的粗灰分含量，%。9.2試樣逃逸率試樣逃逸率wrER(以風(fēng)干物質(zhì)基礎(chǔ)計),數(shù)值以百分比表示，按公式(2)計算：mrm——空白對照裝袋樣品質(zhì)量，單位為克(g);mrA——空白對照袋殘余飼料質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果保留至小數(shù)點后兩位。9.3校正樣品量校正裝袋飼料樣品質(zhì)量mcr(以風(fēng)干物質(zhì)基礎(chǔ)計),數(shù)值以克表示，按公式(3)計算：式中：m?p——實際裝袋飼料樣品質(zhì)量，單位為克(g);計算結(jié)果保留至小數(shù)點后兩位。9.4有機物瘤胃降解量某培養(yǎng)時間點有機物的降解量以mpom計，數(shù)值以克表示，按公式(4)計算：mpom=(mcr×WcroM)—(mR×wiRoM) (4)5GB/T40747—2021式中：mcr——校正裝袋試樣質(zhì)量，單位為克(g);wckom——校正試驗殘余物中有機物的含量，%;mrR——某培養(yǎng)時間點殘余物的質(zhì)量，單位為克(g);wioM——某培養(yǎng)時間點殘余物中有機物的含量，%。計算結(jié)果保留至小數(shù)點后兩位。9.5有機物實時瘤胃降解率t時刻試樣中有機物的瘤胃實時降解率以dp計，數(shù)值以百分比表示，按公式(5)計算：式中：mpom——某培養(yǎng)時間點有機物的降解量，單位為克(g);mcr——校正裝袋飼料樣品質(zhì)量，單位為克(g);wckoM——校正試驗殘余物中有機物的含量，%。計算結(jié)果保留至小數(shù)點后兩位。9.6降解參數(shù)試樣中有機物的瘤胃實時降解率符合指數(shù)曲線，按公式(6)計算：dp=a+b(1-e)……(6)式中：dp——t時刻試樣中有機物的瘤胃實時降解率，%;a試樣中有機物的快速降解部分，%;b——試樣中有機物的慢速降解部分，%;cb部分的降解常數(shù)，單位為每小時(h-1);t——試樣在瘤胃內(nèi)停留的時間，單位為小時(h)。利用各培養(yǎng)時間點瘤胃實時降解率的數(shù)據(jù)(dp和t),采用最小二乘法，計算式中a、b和c值。計算結(jié)果保留至小數(shù)點后兩位。9.7有效降解率的計算試樣中有機物的瘤胃有效降解率P,數(shù)值以百分比表示，按公式(7)計算：P=a+b×c/(c+k)……(7)式中：a——試樣中有機物的快速降解部分，%;b——試樣中有機物的慢速降解部分，%;c——b部分的降解常數(shù)，單位為每小時(h-1);k——試樣通過瘤胃外流速度，單位為每小時(h-1),按照附錄A規(guī)定的方法測定。計算結(jié)果保留至小數(shù)點后兩位。9.8飼料瘤胃可發(fā)酵有機物含量試樣瘤胃可發(fā)酵有機物含量wrom,數(shù)值以百分比表示，風(fēng)干樣基礎(chǔ)按公式(8)計算，干物質(zhì)基礎(chǔ)按公式(9)計算：WFOM=WoMXP………………(8)6GB/T40747—2021wfoM=WoM×P/(100%—Wwg)……………(9)式中：wom——試樣中有機物含量，%;P——試樣中有機物的有效降解率，%;計算結(jié)果保留至小數(shù)點后兩位。10精密度在重復(fù)性條件下，兩次獨立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的10%。(規(guī)范性)反芻動物瘤胃食糜外流速度的測定A.1原理用鉻標記的飼料樣品定量飼喂給試驗動物，測定不同時間點糞便中鉻的含量，計算出待測飼料樣品在瘤胃內(nèi)的實際停留時間或瘤胃食糜外流速率。A.2試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。A.2.2重鉻酸鈉。A.2.3抗壞血酸。定方法的要求(見5.1)相同。在條件允許時，建議使用反芻動物飼料瘤胃可發(fā)酵有機物測定方法中的試驗動物測定瘤胃食糜外流速度。A.3儀器設(shè)備A.3.2分光光度計。A.4鉻標記試樣的制備A.4.1稱取適量重鉻酸鈉(鉻用量占待測飼料干物質(zhì)的4%～14%),加適量溫水，至完全溶解。A.4.3將烘干的鉻標記試樣放入底部裝有細篩網(wǎng)(孔徑236μm)的桶中，用水沖洗至水澄清。將沖洗后的鉻標記試樣放入塑料盆中，加入適量水，將飼料懸浮于水中。加入適量抗壞血酸，攪拌均勻，使pH下