如何選擇有關(guān)物質(zhì)測定的對照

有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)的定量方法有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)的定量方法根據(jù)雜質(zhì)與主成分的最大吸收波長及校正因子來確定。若雜質(zhì)與主峰的吸收波長基本一致，則一般采用自身對照法或峰面積歸一化法；若雜質(zhì)與主峰的吸收波長差異范圍較小，校正因子在0.9～1.1之間，則可采用不加校正因子的主成分自身對照法；超出該范圍，校正因子在0.2～5.0范圍以內(nèi)時，采用主成分自身對照法的定量方式，須用校正因子進行校正；若雜質(zhì)與主峰的吸收波長相差較大，校正因子在0.2～5.0范圍以外時，不能通過校正因子校正，則要采用外標(biāo)法進行測定。①外標(biāo)法（雜質(zhì)對照品法）外標(biāo)法定量比較準確，采用外標(biāo)法進行測定時，應(yīng)進行相應(yīng)的方法學(xué)研究。A檢測波長的選擇檢測波長的選擇測定方法參照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010版二部附錄ⅣA）進行測定，或采用HPLC法，DAD檢測器進行測定。同時考察輔料干擾等。B標(biāo)準曲線線性關(guān)系應(yīng)在設(shè)計的測定范圍內(nèi)測定?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質(zhì)濃度系列進行測定，至少制備5個濃度。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進行線性回歸。C精密度試驗儀器精密度試驗主要是考察測定方法在所用的試驗儀器測定結(jié)果的偏差，精密度一般用偏差、標(biāo)準偏差或相對標(biāo)準偏差表示。測定方法：取一定濃度的雜質(zhì)對照品溶液，連續(xù)測定次數(shù)至少6次，以峰面積的測定結(jié)果計算相對標(biāo)準偏差，考察儀器測定的。D重復(fù)性試驗重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內(nèi)，由同一分析人員測定所得結(jié)果的精密度。重復(fù)性測定可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果進行評價，如制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，或100％的濃度水平，用至少測定6次的結(jié)果進行評價。常用的測定方法時采用100%的濃度，測定6次，計算測定結(jié)果的相對標(biāo)準偏差。測定方法:按含量測定的方法，分別平行稱取6份樣品，按外標(biāo)法測定雜質(zhì)的含量，以雜質(zhì)含量測定結(jié)果計算相對標(biāo)準偏差。E中間精密度中間精密度系指在同一實驗室，由于實驗室內(nèi)部條件改變，如時間、分析人員、儀器設(shè)備、測定結(jié)果的精密度。驗證設(shè)計方案中的變動因素一般為日期、分析人員、設(shè)備。考察在不同因素變動的條件下，測定結(jié)果的標(biāo)準偏差。測定方法：按含量測定的方法，分別由不同的人員、時間、不同儀器按外標(biāo)法測定樣品雜質(zhì)的含量，以雜質(zhì)含量測定結(jié)果計算相對標(biāo)準偏差。F回收率試驗回收率試驗來驗證測定方法的準確度。試驗設(shè)計需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，即測定9次，報告已知加入量的回收率（％）或測定結(jié)果平均值與真實值之差及其可信限。并考察不同濃度下測定結(jié)果的相對標(biāo)準偏差。測定方法：按含量測定的方法，按加樣回收率測定方法，在已知雜質(zhì)含量的樣品中加入不同濃度的雜質(zhì)對照品，按外標(biāo)法分別測定不同濃度樣品中的測的量，計算測的量比加入量的百分含量（即回收率），以不同濃度下的回收率計算相對標(biāo)準偏差。G雜質(zhì)的檢測限檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，是反映分析方法靈敏度的一個重要指標(biāo)；最低檢測限不得大于該雜質(zhì)的報告限度，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。測定方法：取待測物質(zhì)對照品適量，加流動相配制成一點濃度的對照品溶液，按倍倍稀釋法，以信噪比為3：1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測限。同時將信噪比為3：1的樣品溶液進樣6針，以峰面積計算相對標(biāo)準偏差。判斷結(jié)果：最小檢測限濃度下樣品峰面積的相對標(biāo)準偏差應(yīng)≤20%，以最小檢測限來確定供試品溶液配制的濃度作為依據(jù)。H雜質(zhì)的定量限定量限是指被測雜質(zhì)能夠被定量測定的最低量。定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力。雜質(zhì)定量試驗，需考察方法的定量限，以保證含量很少的雜質(zhì)能夠被準確測出。測定方法：取待測物質(zhì)對照品適量，加流動相配制成一點濃度的對照品溶液，按倍倍稀釋法，以信噪比為10：1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測限。同時將信噪比為10：1的樣品溶液進樣6針，以峰面積計算相對標(biāo)準偏差。判斷結(jié)果：定量限濃度下樣品峰面積的相對標(biāo)準偏差應(yīng)≤10%。②加校正因子的主成分自身對照法采用加校正因子自身對照法應(yīng)進行相應(yīng)雜質(zhì)的校正因子的測定，僅適用于已知雜質(zhì)的控制，如果校正因子在0.2～5.0的范圍內(nèi)也可用加校正因子的主成分自身對照法。校正因子的定義及特點一般來講，HPLC定量測定中，物質(zhì)的檢測量W與色譜響應(yīng)值（峰面積等）A之間的比值稱為絕對校正因子，即單位響應(yīng)值（峰面積等）所對應(yīng)3：重復(fù)性：6個相似重量的樣品計算出來的F值比較，然后2個人12個相似重量的樣品計算出來的F值比較；4：專屬性：不同物質(zhì)的F一般會不同，通過對比確認各個雜質(zhì)的F；5：定量限：這個應(yīng)該是說在多少重量時，S/N剛好在10，所以我個人認為計算這個數(shù)據(jù)是為了給范圍用的；6：范圍：藥品的重量在什么范圍內(nèi)，做出來的標(biāo)準曲線的斜率達標(biāo)，一般會在LOQ~雜質(zhì)限度150%；7：耐用性：由于溫度，流速，色譜柱都會不同程度的影響峰面積，進而影響F，所以必然要通過耐用性確認是否可以進行一定范圍內(nèi)的溫度，流速，色譜柱的變化。第三種：采用三根不同色譜柱，利用標(biāo)準曲線法，測定各雜質(zhì)的校正因子。

①在進行準確度時，會有一個外標(biāo)法的回收率，此時的對照，應(yīng)包含主成分，利用主成分進行加校正因子的回收率計算，即我們通常所做的幾個方法（外標(biāo)法、加校正因子、不加校正因子）回收率的比較，這就完成了準確度，實際上我們做驗證時候就做了，只是沒有單獨羅列出來而已；

②重復(fù)性，不用想了，回收率重復(fù)性一起做，利用同一個對照，完成重復(fù)性試驗，不過這里要提出的是，要用100%準確度溶液去進行校正因子的重復(fù)性試驗，因為單純樣品不可能檢出所有已知雜質(zhì)。

③定量限、線性、范圍、耐用性。同理，用100%準確度溶液＋對照去試驗。我一般整套試驗連續(xù)做完，不間斷。校正因子的定量限就是利用主成分和校正因子的方法去換算。實際什么濃度你就乘上校正因子就是它的定量限了，其實沒必要單獨做，都包含在方法學(xué)里面了。第四種：校正因子是用于檢測產(chǎn)品的雜質(zhì)定量檢測的，因此它的驗證不是單一的校正因子的問題。它的驗證項目基本和雜質(zhì)定量的驗證項目一致，其意義在于，如果現(xiàn)有一個有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，該方法是已經(jīng)經(jīng)過驗證的方法，你要做一個原來未做的雜質(zhì)的校正因子，實際上雜質(zhì)定量項目的驗證你全部都要做。再給你舉個例子，一個藥典上已有的有關(guān)物質(zhì)分析方法，藥典上已經(jīng)有校正因子，但是如果我們用于檢測，由于儀器等的差異，校正因子需要驗證，這個時候