（高清版）WST 478-2024 血清25-羥基維生素D2和D3檢測(cè) 同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS11.020CCSC50WS代替WS/T478—2015Measurementofserum25-hydroxyvitaminD2andD3——IsotopediluliquidchromatographytandemmassspecIWS/T478—2024本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)代替WS/T478—2015《血清25-羥基維生素D3檢測(cè)操作指南同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》，與WS/T478—2015相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：——更改了“范圍”（見(jiàn)第1章，2015年版的第1章）；——更改了“術(shù)語(yǔ)和定義”（見(jiàn)第3章，2015年版的第3章）；——更改了“符號(hào)與縮略語(yǔ)”（見(jiàn)第4章，2015年版的第4章）；——更改了“檢測(cè)原理和方法”（見(jiàn)第5章，2015年版的第5章——更改了“試劑和配制”（見(jiàn)第6章，2015年版的第6章）；——更改了“儀器”（見(jiàn)第7章，2015年版的第7章——更改了“樣品”（見(jiàn)第8章，2015年版的第8章——更改了“檢測(cè)系統(tǒng)和分析部分的準(zhǔn)備”（見(jiàn)第第9章，2015年版的第9章——更改了“方法的評(píng)價(jià)”（見(jiàn)第10章，2015年版的第10章）。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)負(fù)責(zé)技術(shù)審查和技術(shù)咨詢(xún),由國(guó)家衛(wèi)生健康委醫(yī)療管理服務(wù)指導(dǎo)中心負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)性和格式審查,由國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)醫(yī)政司負(fù)責(zé)業(yè)務(wù)管理、法規(guī)司負(fù)責(zé)統(tǒng)籌管理。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院、北京醫(yī)院/國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心、中南大學(xué)湘雅醫(yī)院、北京大學(xué)人民醫(yī)院、天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院、鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張曼、劉娜、邱玲、李水軍、張江濤、易斌、岳志紅、門(mén)劍龍、袁恩武、周慧。本標(biāo)準(zhǔn)于2015年首次發(fā)布，本次為第一次修訂。1WS/T478—2024血清25-羥基維生素D2和D3的檢測(cè)同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了血清25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3檢測(cè)的常規(guī)方法-同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的技術(shù)要求，包括試劑配制、樣品制備、儀器檢測(cè)、數(shù)據(jù)分析等內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室利用同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)血清25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1內(nèi)標(biāo)internalstandard在定量分析時(shí)，加入到樣品中作為參比物的已知量的化合物純品。3.2檢出限limitofdetection檢測(cè)方法在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下所能檢出分析物的最低濃度。3.3定量檢測(cè)下限lowerlimitofmeasuringinterval在滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室對(duì)準(zhǔn)確性和精密度要求的前提下，檢測(cè)方法在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下所能準(zhǔn)確定量檢測(cè)分析物的最低可測(cè)量濃度或量。3.4線性linearity在給定的測(cè)量范圍內(nèi)，使測(cè)定結(jié)果與樣品中分析物的量直接成比例的能力。此處的測(cè)定結(jié)果指最終的分析結(jié)果，而非儀器輸岀的原始信號(hào)。[來(lái)源：WS/T408—2012,定義2.2]3.5線性范圍linearrange使實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的最終分析結(jié)果為可接受的線性的濃度范圍，此時(shí)非線性誤差應(yīng)低于允許誤差。2WS/T478—2024[來(lái)源：WS/T408—2012,定義2.3]3.6基質(zhì)效應(yīng)matrixeffect標(biāo)本中除分析物之外的樣品性質(zhì)對(duì)分析物測(cè)定結(jié)果的影響。4符號(hào)與縮略語(yǔ)下列符號(hào)與縮略語(yǔ)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。25(OH)VD2：25-羥基維生素D2(25-HydroxyvitaminD2)25(OH)VD3：25-羥基維生素D3(25-HydroxyvitaminD3)BSA：牛血清白蛋白(bovineserumalbumin)CV：變異系數(shù)(coefficientofvariation)LOD：檢出限(limitofdetection)LLMI：定量檢測(cè)下限(lowerlimitofmeasuringinterval)MRM：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiplereactionmonitor)S/N：信噪比(signaltonoiseratio)5檢測(cè)原理和方法本標(biāo)準(zhǔn)建立的25(OH)VD2和25(OH)VD3檢測(cè)方法以同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法為檢測(cè)原理。方法是以穩(wěn)定同位素標(biāo)記的25(OH)VD2和25(OH)VD3為內(nèi)標(biāo)添加至血清中，內(nèi)標(biāo)與血清均勻混合后，通過(guò)加入碳酸鹽緩沖溶液釋放出與蛋白結(jié)合的25(OH)VD2和25(OH)VD3，加入正己烷-乙酸乙酯混合溶液將其從血清當(dāng)中萃取出來(lái)，將萃取液用氮?dú)獯蹈?，用流?dòng)相初始比例溶液進(jìn)行復(fù)溶。利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分離并檢測(cè)血清25(OH)VD2、25(OH)VD3和內(nèi)標(biāo)特異的離子對(duì)。通過(guò)建立的標(biāo)準(zhǔn)品工作曲線以25(OH)VD2、25(OH)VD3與各自?xún)?nèi)標(biāo)峰面積比計(jì)算血清25(OH)VD2和25(OH)VD3濃度。6試劑和配制6.1試劑可選用的試劑如下：a)水：除非有特別說(shuō)明，應(yīng)使用GB/T6682定義的一級(jí)水；b)甲醇：色譜純；c)正己烷：色譜純；d)甲酸：色譜純；e)乙酸乙酯：色譜純；f)磷酸氫二鈉七水合物(Na2HPO4?7H2O)：分析純，CAS號(hào)：7782-85-6；g)磷酸二氫鈉一水合物(NaH2PO4?H2O)：分析純，CAS號(hào)：10049-21-5；h)氯化鈉：分析純，CAS號(hào)：7647-14-5；i)碳酸鈉：分析純，CAS號(hào)：497-19-8；j)碳酸氫鈉：分析純，CAS號(hào)：144-55-8；k)牛血清白蛋白(BSA):純度≥98Mr=66kDa，CAS號(hào)：9048-46-8；l)氫氧化鈉：分析純，CAS號(hào)：1310-73-2；m)25(OH)VD2標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98CAS號(hào)：21343-40-8；n)25(OH)VD3標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98CAS號(hào)：19356-17-3；o)25(OH)VD2-[2H3]：同位素標(biāo)記純度≥97CAS號(hào)：1217467-39-4p)25(OH)VD3-[2H3]：同位素標(biāo)記純度≥97CAS號(hào)：140710-94-73WS/T478—20246.2配制溶液6.2.1空白基質(zhì)溶液模擬人血清基質(zhì)的條件，選擇適當(dāng)離子強(qiáng)度、適當(dāng)pH及蛋白成分的物質(zhì)進(jìn)行配制，盡量模擬人血清基質(zhì)的環(huán)境。如獲得人血清純化后無(wú)25(OH)VD2和25(OH)VD3的空白基質(zhì)為更佳。適用時(shí)，可釆用下述方法進(jìn)行：a)稱(chēng)量2.14gNa2HPO4?7H2O，0.268gNaH2PO4?H2O，0.9g氯化鈉，5g牛血清白蛋白；b)溶解于約75mL水中；c)用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH到7.4；d)轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中；e)加水定容至100mL。該溶液2℃~8℃穩(wěn)定期為1個(gè)月，長(zhǎng)期保存應(yīng)加入防腐劑。6.2.2碳酸鹽緩沖溶液配制適用時(shí)，可采用下述方法進(jìn)行配制：分別配制濃度為0.1g/mL的NaHCO3溶液10mL，0.1g/mLNa2CO3溶液40mL，在不斷攪拌的情況下向NaHCO3溶液中逐滴加入Na2CO3溶液，同時(shí)測(cè)量混合溶液的pH值，直到混合溶液的pH值為10.0，室溫密封避光保存，穩(wěn)定3個(gè)月。6.2.3正己烷-乙酸乙酯混合溶液適用時(shí)，可采用下述方法進(jìn)行配制：將200mL正己烷和200mL乙酸乙酯混合得到體積比為50:50的正己烷-乙酸乙酯混合溶液，室溫密封避光保存可穩(wěn)定3個(gè)月。6.2.4內(nèi)標(biāo)溶液及標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備可根據(jù)生產(chǎn)廠商說(shuō)明進(jìn)行符合要求的相應(yīng)調(diào)整，適用時(shí)，可采用下述方法進(jìn)行配制。6.2.4.1內(nèi)標(biāo)工作液配置方法如下：分別取同位素標(biāo)記的25(OH)VD2和25(OH)VD3，加入甲醇，配置濃度為50ng/mL內(nèi)標(biāo)工作液。6.2.4.2標(biāo)準(zhǔn)品工作液配制方法如下：分別取25(OH)VD2和25(OH)VD3標(biāo)準(zhǔn)品，加入甲醇及空白基質(zhì)溶液，配置濃度為5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL,200ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品工作液。6.2.5流動(dòng)相A適用時(shí)，可釆用含0.1％甲酸的水溶液，配制方法為移取300mL水，加入0.3mL甲酸，混勻后超聲排除液體中氣泡。流動(dòng)相宜根據(jù)每日使用量新鮮配制。6.2.6流動(dòng)相B適用時(shí)，可釆用含0.1％甲酸的甲醇溶液，配制方法為移取300mL甲醇，加入0.3mL甲酸，混勻后超聲排除液體中氣泡。由于甲醇為易揮發(fā)溶劑，宜根據(jù)每日使用量進(jìn)行配制。6.2.7質(zhì)控品質(zhì)控品與待測(cè)樣品應(yīng)具有相似或相同的基質(zhì)，具有較好的均勻性和穩(wěn)定性。7儀器4WS/T478—20247.1液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)（以三重四極桿質(zhì)譜儀為例）應(yīng)滿(mǎn)足以下使用要求：a)高效液相色譜儀；b)三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，裝配穩(wěn)定的離子源，如大氣壓化學(xué)電離源(APCI)、電噴霧電離源(ESI)等，各項(xiàng)參數(shù)指標(biāo)符合正常工作的要求。7.2液相色譜柱液相色譜柱應(yīng)滿(mǎn)足使用以下要求:a）反相五氟苯基色譜柱或C18色譜柱等分離能力相當(dāng)者，具有良好穩(wěn)定性和重現(xiàn)性；b）規(guī)格內(nèi)徑和理論塔板數(shù)滿(mǎn)足使用要求。7.3天平萬(wàn)分之一天平（最小分度0.1mg），應(yīng)校準(zhǔn)合格并在檢定周期內(nèi)。十萬(wàn)分之一天平（最小分度0.01mg），應(yīng)校準(zhǔn)合格并在檢定周期內(nèi)。7.4離心機(jī)水平轉(zhuǎn)頭離心機(jī)，離心力應(yīng)滿(mǎn)足14000g。7.5旋渦式混合器適用于尖底離心管、圓底小玻璃瓶等的旋渦式混合裝置。7.6吹干裝置可連接氮?dú)庠吹拇蹈裳b置。7.7微量移液器一支。7.8通風(fēng)設(shè)備應(yīng)配有必要的通風(fēng)設(shè)備，如排風(fēng)罩、通風(fēng)櫥等。8樣品8.1通則本方法適用于新鮮、冰凍或凍干血清樣品的25(OH)VD2和25(OH)VD3濃度檢測(cè)。在處理樣品時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵從對(duì)潛在生物傳染性樣品處理的相關(guān)規(guī)定，操作時(shí)遵循生物安全規(guī)則，并根據(jù)規(guī)定對(duì)廢物進(jìn)行處理。8.2樣品用量最小取樣量不宜低于0.1mL。8.3樣品的保存新鮮血清樣品若不立即檢測(cè)，應(yīng)于2℃~8℃避光保存，保存時(shí)間不超過(guò)1周。-20℃及以下避光可穩(wěn)定保存28天，可根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行符合要求的相應(yīng)調(diào)整。使用前應(yīng)在室溫下避光將血清融化、充分混勻。凍干樣品應(yīng)按照說(shuō)明書(shū)描述的使用期限和條件保存，臨用前按照說(shuō)明復(fù)融重組，充分混勻。8.4樣品前處理（包括標(biāo)準(zhǔn)品工作液和待測(cè)血清樣品）5WS/T478—2024可根據(jù)生產(chǎn)廠商說(shuō)明進(jìn)行符合要求的相應(yīng)調(diào)整，適用時(shí)，可采用下述方法進(jìn)行樣品前處理：a)移取血清樣品或標(biāo)準(zhǔn)品工作液0.1mL，分別加入0.1mL內(nèi)標(biāo)工作液、0.1mL碳酸鹽緩沖溶液，充分混勻后靜置10min；b)加入正己烷-乙酸乙酯混合溶液0.8mL，在渦旋混合儀上混勻2min；c)3130g條件下離心5min；d)充分吸取上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中；e)將離心管置于氮吹儀中，適合的氣流下氮?dú)獯蹈?；f)加入流動(dòng)相初始比例溶液0.1mL，在渦旋混合儀上混勻1min；g)14000g條件下離心5min；h)取0.08mL上清液至進(jìn)樣瓶中待測(cè)。9檢測(cè)系統(tǒng)和分析部分的準(zhǔn)備9.1液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)的準(zhǔn)備9.1.1液相系統(tǒng)部分準(zhǔn)備檢測(cè)前應(yīng)對(duì)液相系統(tǒng)進(jìn)行準(zhǔn)備，包括：a）流動(dòng)相準(zhǔn)備：按照本標(biāo)準(zhǔn)第6.2.5條，第6.2.6條準(zhǔn)備流動(dòng)相A，流動(dòng)相B，超聲除氣10min~15min；b）色譜柱的平衡：用合適的流動(dòng)相比例（例如初始流動(dòng)相比例）平衡色譜柱一定時(shí)間，直至色譜柱壓力達(dá)到平衡。9.1.2質(zhì)譜系統(tǒng)部分的準(zhǔn)備檢測(cè)前應(yīng)對(duì)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行性能檢查，包括：a）最近6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行過(guò)質(zhì)量校準(zhǔn)；b）裝配穩(wěn)定的離子源，如大氣壓化學(xué)電離源(APCI)、電噴霧電離源(ESI)等，運(yùn)行正常；c）真空度達(dá)到正常工作要求的范圍，所需輔助氣體純度和壓力（流量）符合要求、供應(yīng)充足、氣路通暢。9.2檢測(cè)方法9.2.1液相色譜條件9.2.1.1液相色譜儀器條件使用者可以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物與其他分析物有效分離并獲得良好峰型為原則進(jìn)行條件優(yōu)化，包括：a)色譜柱：見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第7.2條；b)流動(dòng)相：見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第9.1.1條；c)流速：0.5mL/min；e)柱溫：40℃;f)進(jìn)樣器溫度：6℃。9.2.1.2液相色譜洗脫條件使用者可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行條件優(yōu)化，見(jiàn)表1。6WS/T478—2024表1液相色譜洗脫條件%%010409.2.2質(zhì)譜條件使用者可以有效提高離子化效率為原則，優(yōu)化離子源的類(lèi)型、溫度，以及霧化氣、干燥氣溫度和流量等參數(shù)；以有效提高離子傳輸效率為原則，優(yōu)化錐孔電壓，碰撞能量等參數(shù)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)提高檢測(cè)靈敏度的目的，合理選擇反應(yīng)模式，使用者可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行條件優(yōu)化，包括：a)離子源：APCI；b)離子化電壓：5500V；c)氣簾氣：25psi；d)碰撞氣：Medium；e)霧化電流：5μA；f)霧化溫度：350℃;g)霧化氣：60psi；h)駐留時(shí)間：0.1s；i)離子對(duì)(MRM模式)：見(jiàn)表2表2質(zhì)譜條件25(OH)VD-[H]25(OH)VD-[H]9.2.3液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)按照以下步驟進(jìn)行液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)：a)按照本標(biāo)準(zhǔn)第8.4條的方法對(duì)25(OH)VD2和25(OH)VD3標(biāo)準(zhǔn)品工作液和待測(cè)血清樣品進(jìn)行前處理，按照本標(biāo)準(zhǔn)第9.2.1條和第9.2.2條的條件進(jìn)行液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置和優(yōu)化；b)標(biāo)準(zhǔn)品工作液經(jīng)前處理后，按照濃度由低到高順序進(jìn)行液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析；7WS/T478—2024c)待測(cè)血清樣品進(jìn)行前處理后，進(jìn)行液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析。9.2.4結(jié)果計(jì)算9.2.4.1保留時(shí)間25(OH)VD2和25(OH)VD3在液相色譜中保留時(shí)間可依使用的色譜柱性能不同而有差異，建議分析物與標(biāo)準(zhǔn)品溶液保留時(shí)間差值小于0.1min(6s)。9.2.4.2工作曲線的建立9.2.4.2.1直線擬合對(duì)25(OH)VD2和25(OH)VD3及同位素標(biāo)記的25(OH)VD2和25(OH)VD3按表2分別提取MRM離子色譜圖，積分得各自的峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)品定量離子峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度與內(nèi)標(biāo)物濃度的比值為橫坐標(biāo)進(jìn)行直線擬合，按式(1)得到工作曲線參數(shù)a,b值。式中：Astd——標(biāo)準(zhǔn)品工作液中25(OH)VD2或25(OH)VD3定量離子MRM積分峰面積；AIS——標(biāo)準(zhǔn)品工作液中25(OH)VD2或25(OH)VD3內(nèi)標(biāo)物MRM積分峰面積；Cstd——標(biāo)準(zhǔn)品工作液中25(OH)VD2或25(OH)VD3的濃度；CIS——標(biāo)準(zhǔn)品工作液中25(OH)VD2或25(OH)VD3內(nèi)標(biāo)物的濃度,本方案中此濃度為50ng/mL；a——擬合直線的斜率；b——擬合直線的截距。直線擬合的相關(guān)系數(shù)r＞0.99。9.2.4.2.2建立工作曲線將本標(biāo)準(zhǔn)第9.2.4.2.1條中擬合得到的參數(shù)a,b帶入式(2),得到工作曲線。式中：Atarget——血清樣品中25(OH)VD2或25(OH)VD3定量離子MRM積分峰面積；AIS——血清樣品中25(OH)VD2或25(OH)VD3內(nèi)標(biāo)物MRM積分峰面積；Ctarget——血清樣品中25(OH)VD2或25(OH)VD3的濃度；CIS——血清樣品中25(OH)VD2或25(OH)VD3內(nèi)標(biāo)物的濃度，本方案中此濃度為50ng/mL；a——按照本標(biāo)準(zhǔn)第9.2.4.2.1條中擬合得到的直線斜率；b——按照本標(biāo)準(zhǔn)第9.2.4.2.1條擬合得到的直線截距。9.2.4.3血清樣品中25(OH)VD2和25(OH)VD3濃度的計(jì)算對(duì)血清樣品中25(OH)VD2和25(OH)VD3及同位素標(biāo)記的25(OH)VD2和25(OH)VD3按照表2分別提取MRM離子色譜圖，積分得各自的峰面積。根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)第9.2.4.2.2條得到的工作曲線，可計(jì)算得到式(2)中Ctarget值，即血清樣品中25(OH)VD2和25(OH)VD3的濃度。10方法驗(yàn)證10.1說(shuō)明實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化后，需對(duì)方法進(jìn)行多方面驗(yàn)證，例如精密度、正確度、回收實(shí)驗(yàn)、線性、LLMI和基質(zhì)效應(yīng)等。10.2精密度8WS/T478—2024依據(jù)已發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)范性文件，對(duì)方法的精密度進(jìn)行驗(yàn)證，定量檢測(cè)下限濃度附近低值CV＜20％,其余濃度CV＜15％。10.3正確度適用時(shí)，可利用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或者其他規(guī)范性文件方案進(jìn)行驗(yàn)證，正確度驗(yàn)證結(jié)果在靶值±15％范10.4回收實(shí)驗(yàn)依據(jù)已發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)范性文件進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)，理論值為樣本中內(nèi)源性分析物與所加入的標(biāo)準(zhǔn)品濃度之和，檢測(cè)值應(yīng)在靶值±15％范圍內(nèi)。10.5線性依據(jù)已發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)范性文件，對(duì)方法的線性進(jìn)行驗(yàn)證：例如檢測(cè)血清樣品的線性范圍5ng/mL～200ng/mL。如收集到足量的更低濃度血清樣品，經(jīng)驗(yàn)證后，可擴(kuò)大線性范圍的低限；如獲得加入純物質(zhì)的更高值人血清，經(jīng)驗(yàn)證后，可擴(kuò)大線性范圍的高限。注：受標(biāo)本本身濃度限制，高值血清為人血清加入純物質(zhì)獲得，低10.6LLMI在S/N≥3條件下按照已發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范文件計(jì)算LOD,推薦使用3～5個(gè)接近LOD濃度的樣品，每個(gè)濃度至少檢測(cè)10次。LLMI和理論值偏差應(yīng)在±15％以?xún)?nèi)，CV應(yīng)＜20％。10.7基質(zhì)效應(yīng)應(yīng)依據(jù)行業(yè)內(nèi)或?qū)I(yè)領(lǐng)域認(rèn)可的規(guī)范性文件，評(píng)價(jià)不同濃度時(shí)的基質(zhì)效應(yīng)。10.8穩(wěn)定性依據(jù)行業(yè)內(nèi)或?qū)I(yè)領(lǐng)域認(rèn)可的規(guī)范性文件，評(píng)價(jià)樣品、質(zhì)控品及內(nèi)標(biāo)等穩(wěn)定性，保證檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定可靠。9WS/T478—2024參考文獻(xiàn)[1]MinevaEM,SchleicherRL,Chaudhary-WebbM,etal.Acandidatereferencemeasurementpr