植物組織培養(yǎng)快繁（植物組織培養(yǎng)技術課件）

組培苗增殖培養(yǎng)目錄01增值培養(yǎng)的定義02增殖的類型03影響增殖的因素04組培苗增殖培養(yǎng)過程一、繼代培養(yǎng)（增殖培養(yǎng)）

將初代培養(yǎng)獲得的愈傷組織、不定芽、原球莖等無菌材料進行切割、分離后轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基中增殖的過程。二、增殖的類型以芽繁芽原球莖增殖愈傷組織增殖三、影響增殖的因素1、植物種類2、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件3、增殖培養(yǎng)時間長短1、植物種類

不同植物種類或同一種類不同品種，同一植物不同器官和不同部位繼代繁殖能力不同。一般是草本優(yōu)于木本植物，年幼材料優(yōu)于年老材料，剛分離組織優(yōu)于已繼代組織。2、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件細胞分裂素和生長素的比例是影響繁殖系數(shù)和不定芽質(zhì)量的主要因素。光照對增殖有一定影響，一般弱光利用增殖。3、增殖培養(yǎng)時間長短有的植物材料增殖可保持原來的再生能力和增殖率；如葡萄、月季等。有的植物材料經(jīng)過一定時間增殖培養(yǎng)后才有分化再生能力；如沙棗等。有的隨增殖時間加長分化再生能力降低；如杜鵑等。四、組培苗增殖過程1、培養(yǎng)基的配制1/2MS+2.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+20g/L白糖+4g/L瓊脂

計算母液吸取量吸取母液混合調(diào)節(jié)PH值定容分裝計算糖、瓊脂等稱取量稱量糖、瓊脂等加水加熱溶解貼標簽滅菌人員準備機臺準備工具準備母瓶準備取苗切苗接苗整理2、接種3、育苗室管理溫度：28℃左右。濕度：50-60%。光照：暗培養(yǎng)一周左右，給予1000-1500lux光照。4、注意事項（1）培養(yǎng)基滅菌徹底。（2）嚴守無菌操作規(guī)程。（3）嚴守生根苗切分及接種要求。組培苗生根培養(yǎng)目錄01組培苗生根培養(yǎng)的類型02影響組培苗生根的因素03組培苗生根培養(yǎng)過程一、組培苗生根培養(yǎng)的類型1、瓶內(nèi)生根瓶內(nèi)生根是指將完成壯苗階段的單苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)瓶內(nèi)生根的方法。2、瓶外生根瓶外生根也叫活體生根。瓶外生根是將已完成壯苗培養(yǎng)的小苗，用生根粉或海藻素處理后栽入疏松透氣的基質(zhì)中，經(jīng)過合理養(yǎng)護形成根系的方法。二、影響組培苗生根的因素1、植物材料2、培養(yǎng)基3、植物生長調(diào)節(jié)劑4、培養(yǎng)條件1、植物材料

不同植物、不同基因類型、同一植株不同部位和不同年齡對分化生根都有影響，一般木本比草本難，成樹比幼樹難，喬木比灌木難。2、培養(yǎng)基

一般情況下礦質(zhì)元素濃度較高時有利于莖、葉生長，濃度較低時有利于生根，且根多而粗壯，發(fā)根也快，加鐵鹽則更好，因此生根培養(yǎng)可使用1/2MS或1/3MS培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)時通常使用的糖是蔗糖，其濃度一般為1%-3%；組培苗的生根要求一定的pH值，一般為5.0-6.0。3、植物生長調(diào)節(jié)劑

對于大多數(shù)植物來說，誘導生根需要有適當?shù)纳L素，其中最常用的是NAA和IBA，質(zhì)量濃度一般為0.1-10mg/L。通常的使用方法是將植物生長調(diào)節(jié)劑預先加入到培養(yǎng)基中，然后再接種組培苗誘導生根。4、培養(yǎng)條件

不同植物對光照和溫度的要求不同。光照強度和光照時間對生根影響十分復雜。三、組培苗生根的過程1、培養(yǎng)基的配制蝴蝶蘭生根培養(yǎng)基：1/2MS+1g/L活性炭+0.1mg/LNAA+18g/L白糖+4g/L瓊脂

計算母液吸取量吸取母液混合調(diào)節(jié)PH值定容分裝計算糖、瓊脂等稱取量稱量糖、瓊脂等加水加熱溶解貼標簽滅菌人員準備機臺準備工具準備母瓶準備取苗切苗接苗整理2、接種3、育苗室管理溫度：28℃左右。濕度：50-60%。光照：暗培養(yǎng)一周左右，給予1500lux-2000lux光照。4、注意事項（1）培養(yǎng)基滅菌徹底。（2）嚴守無菌操作規(guī)程。（3）嚴守生根苗切分及接種要求。組培苗的煉苗與移栽

—以粗肋草為例目錄01組培苗的煉苗02組培苗移栽03小苗的養(yǎng)護管理04提高組培苗移栽成活率的途徑一、組培苗的煉苗

已生根的組培苗在移栽前要先進行鍛煉，使組培苗適應移栽后的環(huán)境并進行自養(yǎng)，這是一個逐步鍛煉和適應的過程，這個過程叫作馴化或煉苗。煉苗的目的在于通過人工控水、肥、增光、降溫等措施，使組培苗逐漸適應外界環(huán)境，提高組培苗對外界環(huán)境的適應性，提高其光合作用的能力，促使組培苗健壯，最終達到提高組培苗移栽成活率的目的。1、保護栽培設施（1）現(xiàn)代溫室（2）日光溫室（3）遮蔭防雨棚（4）防蟲紗網(wǎng)棚2、煉苗過程一般是將生根狀態(tài)理想的組培苗（一般具有2-3條根，根長1-2cm）移入溫室內(nèi)，開始保持與培養(yǎng)室比較接近的環(huán)境條件，適當遮光，以后逐漸撤除保護，使光照條件接近生長環(huán)境。3、煉苗時間不同植物的組培苗煉苗時間不同。如甜葉菊的煉苗時間為5天，粗肋草的煉苗時間20-30天，白掌的煉苗時間30天，蝴蝶蘭、金線蓮的煉苗時間為2個月。二、組培苗移栽（1）苗的準備將馴化（煉苗）過粗肋草瓶苗瓶塞打開，向瓶內(nèi)裝少許水輕輕搖動培養(yǎng)瓶，用鑷子輕輕攪動瓶苗內(nèi)的培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基松動后用鑷子小心將苗子取出，取苗時注意盡量避免傷苗。組培苗移栽前要將苗上的培養(yǎng)基清洗干凈后控水備用。若瓶苗有少量污染則用清水洗凈后，在1000倍甲基硫菌靈溶液中浸泡15s后取出，再用清水清洗后控水備用。（2）基質(zhì)準備配制基質(zhì)。將泥炭土（0-10）、珍珠巖按照7：3的比例混合。配制土壤消毒劑。配制甲基硫菌靈1000倍液10L。土壤消毒。將配制好的甲基硫菌靈噴灑于基質(zhì)中消毒。（3）容器準備組培苗一般采用72孔、105孔黑色穴盤種植即可。（4）種植種植時手勢要輕，要求根系舒展，不能外露，適當種深些，1cm。以防后期莖伸長過長，影響美觀且易倒伏?；|(zhì)埋住莖基部即可，切勿將心埋住。不同級別小苗分別種植不同穴盤中，種植過程中要注意保濕工作，適時給葉面噴水，以免植株失水萎蔫。種植好后，澆定根水，并及時用薄膜（溫度低的季節(jié)）或遮蔭網(wǎng)（高溫強光季節(jié)）保濕。（1）水分控制小苗定植后，進入成活期，時間長度一般為8-15d。應保持濕度。到成活期后，小苗有了根系，但這時的根系少而弱，吸水能力較差，需經(jīng)常給小苗噴灑葉面水保濕，并長期保持基質(zhì)呈濕潤狀態(tài)，防止小苗失水萎蔫。三、小苗的養(yǎng)護管理（2）溫度管理移栽前要保持溫度在25-30℃。（3）肥料管理當小苗有新根和新葉長出時可開始澆肥。澆肥用2000-3000倍的20-20-20速效肥液澆灌。澆肥的次數(shù)和頻率要根據(jù)苗的長勢來具體判斷。一般每澆1次肥后，澆1次水后再澆第2次肥。（4）光照強度剛剛移栽的小苗要給予適度遮陰，苗成活穩(wěn)定后要逐漸增強光照，才可使粗肋草葉色美觀。穴盤苗的光照強度控制在10000lux以內(nèi)，陰天可全光照。四、提高組培苗移栽成活率的途徑（1）組培苗的生理狀況。組培苗的生理狀況是影響移栽成活率的內(nèi)在因素。