動物生物化學實驗

動物生物化學實驗動物生物化學實驗實驗一實驗室基本知識實驗二氨基酸紙層析實驗三血清蛋白含量測定實驗四影響酶活性的因素實驗五脂質(zhì)的薄層層析實驗六凝膠層析法基本練習實驗七血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗八動物組織中DNA提取實驗一實驗室基本知識一、實驗室規(guī)則二、實驗室常用量器及儀器設(shè)備介紹三、試劑配制四、實驗誤差與克服五、實驗室安全知識簡介六、實驗記錄及實驗報告一、實驗室規(guī)則1.實驗前認真預(yù)習實驗內(nèi)容。2.實驗時遵守課堂紀律，不大聲喧嘩。3.嚴格按操作規(guī)程操作。4.愛護實驗室各種器具及儀器設(shè)備，如有損壞，及時報告，并按規(guī)定賠償。5.公用試劑用后放回原處，瓶蓋隨開隨蓋防止污染。6.注意安全，不得將易燃試劑接近火焰，嚴禁用口吸取有毒藥品和試劑，凡發(fā)生煙霧，有毒氣體和不良氣味的實驗應(yīng)在通風櫥內(nèi)進行。7.保持實驗室整潔，每次實驗畢，由三個組同學打掃及整理實驗室。二、實驗室常用量器及儀器設(shè)備介紹1.常用量器（1）容量瓶

凡要求準確（0.01)配制一定濃度的溶液時，必須使用容量瓶。以容量瓶配制試劑時的操作（2）刻度吸管（3）移液器2.常用儀器設(shè)備（1）離心機承載離心管，并以離心力使管內(nèi)物質(zhì)沉降進而造成固體和液體分離的機具。高速冷凍離心機離心技術(shù)簡介

離心技術(shù)在生物科學，特別是在生物化學和分子生物學研究領(lǐng)域，已得到十分廣泛的應(yīng)用，每個生物化學和分子生物學實驗室都要裝備多種型式的離心機。

離心技術(shù)主要用于各種生物樣品的分離和制備。

生物樣品懸浮液在高速旋轉(zhuǎn)下，由于巨大的離心力作用，使懸浮的微小顆粒（細胞器、生物大分子的沉淀等）以一定的速度沉降，從而與溶液得以分離，而沉降速度取決于顆粒的質(zhì)量、大小和密度。

離心力：當一個粒子（生物大分子或細胞器）在高速旋轉(zhuǎn)下受到離心力作用時，此離心力“F”由下式定義，即：

F=m·a=m.V2/r=m·ω2r

a—粒子旋轉(zhuǎn)的加速度，m—沉降粒子的有效質(zhì)量，ω—粒子旋轉(zhuǎn)的角速度，r—粒子的旋轉(zhuǎn)半徑(cm)。離心的基本原理

相對離心力：

離心力常用地球引力的倍數(shù)來表示，因而稱為相對離心力“RCF”?；蛘哂脭?shù)字乘“g”來表示。相對離心力是指在離心場中，作用于顆粒的離心力相當于地球重力的倍數(shù)，單位是重力加速度“g”（980cm/sec2），

相對離心力RCF可用下式計算：

RCF=1.119×10－5×(rpm)2r

(rpm—revolutionsperminute每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)，r/min)

由上式可見，只要給出旋轉(zhuǎn)半徑r，則RCF和rpm之間可以相互換算。但是由于轉(zhuǎn)頭的形狀及結(jié)構(gòu)的差異，使每臺離心機的離心管，從管口至管底的各點與旋轉(zhuǎn)軸之間的距離是不一樣的，所以在計算時規(guī)定旋轉(zhuǎn)半徑均用平均半徑“rav”代替：

rav=(rmin＋rmax)/2

Rmin旋轉(zhuǎn)軸RaveRmaxr的測量

離心機可分為工業(yè)用離心機和實驗用離心機實驗用離心機又分為：

制備型離心機：主要用于分離各種生物材料，每次分離的樣品容量比較大.

分析型離心機：一般都帶有光學系統(tǒng)，主要用于研究純的生物大分子和顆粒的理化性質(zhì)，依據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（用離心機中的光學系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測），能推斷物質(zhì)的純度、形狀和分子量等。分析性離心機都是超速離心機。工業(yè)離心機：主要用于工業(yè)上的分離。離心機的主要類型

制備性離心機可分為三類：普通離心機：最大轉(zhuǎn)速6000rpm左右，最大相對離心力近6000×g，容量為幾十毫升至幾升，

高速冷凍離心機：最大轉(zhuǎn)速為20000～25000rpm（r/min），最大相對離心力為89000×g，最大容量可達3升，

超速離心機：轉(zhuǎn)速可達50000～80000rpm，相對離心力最大可達510000×g，最著名的生產(chǎn)廠商有美國的貝克曼公司和日本的日立公司等，離心容量由幾十毫升至2升超速離心機（2）分光光度計分光光度計是現(xiàn)代生化及分子生物學實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量?；驹砣芤褐械奈镔|(zhì)在光的照射下，產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng)，物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜，因此當某單色光通過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合比色原理——蘭伯特-比耳定律（3）電熱恒溫水浴鍋三、試劑配制1.確定所配試劑濃度重量濃度：單位體積中所含溶質(zhì)的重量。表示為克/升（g/L），或毫克/升（mg/L），微克/升（ug/L）百分濃度：%，需注明W/W,W/V,V/V摩爾濃度：每升溶液中所含溶質(zhì)的摩爾數(shù)。mol/L,mmol/L,umol/L2.準確稱量、量取3.溶解4.定容四、實驗誤差與克服由于外界條件的影響、儀器的優(yōu)劣以及感覺器官的限制，實驗測得的數(shù)據(jù)只能達到一定的準確度。實驗測得的數(shù)據(jù)與真實值之間的差就是實驗誤差實驗誤差一般可分為系統(tǒng)誤差、偶然誤差和過失誤差。

在相同條件下多次測量同一物理量時，測量誤差的大小和符號都不變；在改變測量條件時，它又按照某一確定規(guī)律而變化的測量誤差稱為系統(tǒng)誤差。

系統(tǒng)誤差的特點：和偶然誤差不同，它不具有抵償性，即在相同條件下重復(fù)多次測量，系統(tǒng)誤差無法相互抵消。產(chǎn)生系統(tǒng)誤差的諸因素是可以被發(fā)現(xiàn)和加以克服的。

系統(tǒng)誤差消除產(chǎn)生系統(tǒng)誤差的根源

從產(chǎn)生誤差的根源上消除系統(tǒng)誤差是最根本的方法。通過對測量過程中可能產(chǎn)生系統(tǒng)誤差的各種環(huán)節(jié)作仔細分析，找出原因并在測量前加以消除。如果系統(tǒng)誤差是由外界條件變化引起的，應(yīng)在外界條件比較穩(wěn)定時進行測量。

系統(tǒng)誤差的減小和消除采用修正法消除系統(tǒng)誤差

預(yù)先將儀器的系統(tǒng)誤差檢定出來或計算出來，做出誤差表或誤差曲線，然后取與誤差數(shù)值大小相同、符號相反的值作為修正值，進行誤差修正。

即：x真=x測+x修

如天平砝碼不準，應(yīng)采用標準砝碼進行校核，確定每個砝碼的修正值。在稱量時就應(yīng)加上相應(yīng)砝碼的修正值，容量瓶、滴定管、移液管等容量儀器均可用水重量法求出各自的修正值。對消法消除系統(tǒng)誤差

進行兩次測量，使兩次讀數(shù)時出現(xiàn)的系統(tǒng)誤差大小相等、符號相反。兩次測量值的平均值作為測量結(jié)果，以消除系統(tǒng)誤差。例如，由于儀器靈敏度的限制，測量儀器的旋鈕由右邊調(diào)近測量值與由左邊調(diào)近測量值的結(jié)果往往不同。這時，可取兩個讀數(shù)的平均值作為測量值。

系統(tǒng)誤差的消除很難找到一個普遍有效的方法。這是因為造成系統(tǒng)誤差的各個因素，沒有內(nèi)在的聯(lián)系。要克服它們，只能具體問題具體分析。在實驗時即使采用了最完善的儀器、選擇了最恰當?shù)姆椒?、?jīng)過了十分精細的觀測，所測得的數(shù)據(jù)也不可能每次重復(fù)，這樣的誤差即為偶然誤差偶然誤差偶然誤差的克服

偶然誤差是由于相互制約、相互作用的一些偶然因素所造成的，它有時大、有時小、有時正、有時負，方向不一定，大小和符號一般服從正態(tài)分布規(guī)律。偶然誤差可采取多次測量，取平均值的辦法來消除，而且測量次數(shù)越多（在沒有系統(tǒng)誤差存在的情況下），平均值就接近于"真值"。五、實驗室安全知識簡介（一）實驗室安全1.安全用電2.水火無情3.嚴防中毒4.避免傷害5.生物危害6.射線傷害（二）實驗室滅火1.切斷室內(nèi)所有電源，火源2.報警3.導(dǎo)線著火時，切斷電源或使用四氯化碳滅火器，不能用水及二氧化碳滅火器，以免觸電4.可燃性液體著火時，可用濕布或沙土覆蓋，隔絕空氣滅火。不能用水滅火，這樣會擴大燃燒面積。5.金屬鈉著火時可用砂子覆蓋6.衣服著火切忌奔走，應(yīng)臥地滾動滅火。（三）實驗室急救1.觸電2.玻璃割傷及其他機械損傷3.燙傷4.化學試劑灼傷5.汞中毒六、實驗記錄及實驗報告每次實驗要做到課前認真預(yù)習，實驗操作中仔細觀察并如實記錄實驗現(xiàn)象與數(shù)據(jù)，課后及時完成實驗報告。課前預(yù)習實驗課前要將實驗名稱、目的和要求、實驗內(nèi)容與原理、操作方法和步驟等簡單扼要地寫在記錄本中，做到心中有數(shù)。實驗記錄準備一本正規(guī)的筆記本作為實驗記錄本。將實驗條件下觀察到的現(xiàn)象仔細地記錄下來。將實驗中觀測的每個結(jié)果和數(shù)據(jù)及時如實地記錄。實驗中使用儀器的類型、編號以及試劑的規(guī)格、化學式、分子量、準確的濃度等，也應(yīng)記錄清楚。實驗報告

實驗結(jié)束后，應(yīng)及時整理和總結(jié)實驗結(jié)果，寫出實驗報告。按照實驗內(nèi)容可分為定性和定量兩大類，實驗報告的格式：實驗序號、實驗名稱實驗?zāi)康膶嶒炘碇饕獌x器及試劑配制操作方法與實驗步驟結(jié)果與討論1、每一個成功者都有一個開始。勇于開始，才能找到成功的路。5月-245月-24Saturday,May18,20242、成功源于不懈的努力，人生最大的敵人是自己怯懦。21:19:1021:19:1021:195/18/20249:19:10PM3、每天只看目標，別老想障礙。5月-2421:19:1021:19May-2418-May-244、寧愿辛苦一陣子，不要辛苦一輩子。21:19:1021:19:1021:19Saturday,May18,20245、積極向上的心態(tài)，是成功者的最基本要素。5月-245月-2421:19:1021:19:10May18,20246、生活總會給你另一個機會，這個機會叫明天。18五月20249:19:10下午21:19:105月-247、人生就像騎單車，想保持平衡就得往前走。五月249:19下午5月-2421:19May18,20248、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2024/5/1821:19:1021:19:1