病毒的研究方法

病毒學(xué)的研究方法1可編輯ppt分離技術(shù)電子顯微鏡技術(shù)組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)血清學(xué)方法分子生物學(xué)方法2可編輯ppt圖1.1混合物分離原料（混合物）殘余物分離設(shè)備分離劑產(chǎn)品進(jìn)一步綜合利用一、分離技術(shù)3可編輯ppt機(jī)械分離傳質(zhì)分離分類反應(yīng)分離4可編輯ppt1、機(jī)械分離過濾分離：過濾介質(zhì)固體顆粒大小沉降分離：重力作用密度差離心分離：離心力密度差旋風(fēng)分離：慣性力密度差靜電除塵：靜電場(chǎng)使細(xì)顆粒帶電特點(diǎn)：相間無物質(zhì)傳遞5可編輯ppt離心常用于病毒的純化6可編輯pptA:等速度沉降，B:等密度沉降7可編輯ppt2、傳質(zhì)分離平衡分離過程：蒸發(fā)、蒸餾、吸收、萃取、結(jié)晶、離子交換、吸附、干燥、浸取、泡沫吸附等傳質(zhì)分離速率控制分離過程：氣體擴(kuò)散熱擴(kuò)散電滲析電泳反滲透微濾、超濾和納濾8可編輯ppt3、反應(yīng)分離可逆反應(yīng)（如離子交換、反應(yīng)萃?。徊豢赡娣磻?yīng)（反應(yīng)吸收、反應(yīng)結(jié)晶）；分解反應(yīng)（生物分解、電化學(xué)反應(yīng)、光化學(xué)反應(yīng)）等。9可編輯ppt二、電子顯微鏡技術(shù)1932年Ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡（TEM），電子束的波長(zhǎng)要比可見光和紫外光短得多，并且電子束的波長(zhǎng)與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比，也就是說電壓越高波長(zhǎng)越短。目前TEM的分辨力可達(dá)0.2nm。10可編輯ppt技術(shù)方法負(fù)染色法超薄切片技術(shù)免疫電鏡技術(shù)冷凍電鏡技術(shù)11可編輯ppt肌動(dòng)蛋白纖維的負(fù)染電鏡照片用重金屬鹽（如磷鎢酸、醋酸雙氧鈾）對(duì)鋪展在載網(wǎng)上的樣品進(jìn)行染色。1、負(fù)染色法12可編輯ppt通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，以環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式推進(jìn)樣品切片，切片厚度20~50nm，切片采用重金屬鹽染色，以增大反差.萊卡超薄切片機(jī)2、超薄切片技術(shù)13可編輯ppt冰凍蝕刻,亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于-100?C的干冰或-196?C的液氮中，進(jìn)行冰凍。然后用冷刀驟然將標(biāo)本斷開，升溫后，冰在真空條件下迅即升華，暴露出斷面結(jié)構(gòu)，稱為蝕刻。在電鏡下得到的影像即代表標(biāo)本中細(xì)胞斷裂面處的結(jié)構(gòu).3、冰凍蝕刻14可編輯ppt人冠狀病毒（左）與SARS冠狀病毒病毒粒子三維重構(gòu)模型電鏡觀察發(fā)現(xiàn)痘病毒是整個(gè)病毒粒子通過吞噬作用進(jìn)入細(xì)胞的15可編輯ppt三、組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)的生理?xiàng)l件在體外進(jìn)行培養(yǎng)，使之生存和生長(zhǎng)。16可編輯ppt1、組織培養(yǎng)的原理組織培養(yǎng)主要是為病毒易感的組織細(xì)胞提供一個(gè)良好的生存環(huán)境，使細(xì)胞對(duì)環(huán)境產(chǎn)生適應(yīng)性，獲得生長(zhǎng)繁殖的能力。17可編輯ppt群體培養(yǎng)（左）和克隆培養(yǎng)（右）群體培養(yǎng):將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，匯合后形成均勻的單細(xì)胞層?？寺∨囵B(yǎng):將高度稀釋的游離細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，各個(gè)細(xì)胞貼壁后，彼此距離較遠(yuǎn)，經(jīng)過生長(zhǎng)增殖每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落，稱為克隆。18可編輯ppt2、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)：分離病毒最為敏感

二倍體細(xì)胞：用于病毒分離和疫苗制備

傳代細(xì)胞系：用于病毒的分離鑒定和抗病毒藥物篩選研究。病毒基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞系：用于病毒基因調(diào)控和抗病毒藥物的研究。19可編輯ppt20可編輯ppt常用的細(xì)胞培養(yǎng)21可編輯ppt細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）由病毒增殖引起的細(xì)胞改變，稱細(xì)胞病變效應(yīng)。22可編輯ppt23可編輯ppt3、細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件細(xì)胞接種數(shù)：接種傳代細(xì)胞一般為10—30萬/ml合成培養(yǎng)液：如Eagle氏液，RPMI1640，Eagle’sMEM。酸堿度：細(xì)胞生長(zhǎng)最適宜的PH范圍是7.0–7.4。溫度：細(xì)胞培養(yǎng)的最適溫度與細(xì)胞來源的動(dòng)物體溫一致。無菌條件培養(yǎng)器皿的處理24可編輯ppt4、組織培養(yǎng)的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：可提供大量生物性狀相同的細(xì)胞作為研究對(duì)象，對(duì)疫苗生產(chǎn)來說，其抗原性更接近于自然流行株，可減少宿主蛋白成分，減少變態(tài)反應(yīng)。缺點(diǎn)：病毒復(fù)制后滴度低，不易保存，保存時(shí)易使病毒滴度丟失，傳代細(xì)胞含致癌因子，不宜用于疫苗生產(chǎn)。且隨著細(xì)胞代數(shù)增加，對(duì)病毒敏感性也隨之下降。25可編輯ppt四、血清學(xué)方法中和試驗(yàn)：適用于病毒鑒定，機(jī)體中抗體的檢測(cè)，分析病毒抗原的性質(zhì)，疫苗接種效果評(píng)估等補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)：常用于正粘病毒和副粘病毒感染的診斷和病毒亞型鑒定及抗原變異的監(jiān)測(cè)，如流感病毒的分型酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)放射免疫試驗(yàn)免疫熒光檢測(cè)26可編輯ppt五、病毒學(xué)研究常用方法聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）轉(zhuǎn)印雜交：So