牛傳染性鼻氣管炎及病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查及防控建議

近年來，隨著人們生活水平的顯著提高和消費(fèi)需求的不斷變化，牛肉已成為僅次于豬肉的第二大肉類消費(fèi)品，人均消費(fèi)量由2016年的1.8kg增加到2021年的4.2kg，肉牛產(chǎn)業(yè)進(jìn)入了前所未有的超長景氣期。云南省以肉?！耙豢h一業(yè)”示范創(chuàng)建為切入點(diǎn)和有力抓手，大力推動(dòng)肉牛產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展，致力打造中國南方重要的肉牛生產(chǎn)基地和高端肉牛供應(yīng)基地。而動(dòng)物疫病防控作為防范畜牧業(yè)發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)的第一道防線和確保綠色畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對(duì)綠色食品產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展發(fā)揮著重要作用。在肉牛生產(chǎn)過程中，不僅要認(rèn)真抓好牛口蹄疫、牛結(jié)節(jié)性皮膚病等重大疫病防控，牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉等肉牛主要病毒性傳染病對(duì)肉牛生產(chǎn)的危害也不容忽視，更需做好日常防控。通過查閱文獻(xiàn)資料，很多學(xué)者在國內(nèi)開展牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同地區(qū)、不同養(yǎng)殖模式和不同養(yǎng)殖規(guī)模下，牛群牛傳染性鼻氣管炎病毒V和牛病毒性腹瀉病毒感染情況存在一定差異，且隨著養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，呈現(xiàn)出逐年波動(dòng)上升的趨勢。2010—2019年期間，牛傳染性鼻氣管炎病毒平均感染率從31.12%升高至41.80%，其中2016年高達(dá)58.29%，且感染陽性牛只主要集中在屠宰場、牧場和規(guī)模場，交易市場和散養(yǎng)戶陽性率較低，僅為22.88%和19.70%。奶牛感染陽性率明顯高于肉牛，寧夏作為奶牛主要養(yǎng)殖區(qū)，牛傳染性鼻氣管炎病毒平均抗體陽性率已達(dá)85.1%。相對(duì)于牛傳染性鼻氣管炎病毒，牛群的牛病毒性腹瀉病毒感染率水平相對(duì)較高，內(nèi)蒙古、山東、甘肅牛病毒性腹瀉病毒抗體陽性率分別為88.9%、65%、56.36%。李天增等調(diào)查了全國98家牧場（養(yǎng)殖場）的血清抗體，結(jié)果牛病毒性腹瀉病毒抗體陽性牛場占比99.47%。牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉儼然已成為影響我國肉牛產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要傳染病。牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉是嚴(yán)重影響?zhàn)B牛業(yè)生產(chǎn)安全的重要傳染病。牛傳染性鼻氣管炎又稱“壞死性鼻炎”或“紅鼻病”，是由牛皰疹病毒Ⅰ型引起的以高熱、咳嗽、呼吸困難等為常見癥狀的一種接觸性傳染病，60日齡以內(nèi)的犢牛最易感，臨床癥狀復(fù)雜多樣，具體可細(xì)分為呼吸道型、生殖系統(tǒng)型、流產(chǎn)型、腦膜炎型、眼結(jié)膜炎型四種類型。牛病毒性腹瀉是由牛病毒性腹瀉病毒引起的以發(fā)熱、黏膜糜爛、壞死、腹瀉等為主要特征的一種急性、熱性傳染病，多種動(dòng)物均易感。牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉具有很多相似之處，牛只一旦感染，將終身攜帶病毒并長期排毒，還常引起免疫抑制而形成多種細(xì)菌和病毒的繼發(fā)感染，有些感染牛只常常不表現(xiàn)臨床癥狀，呈隱形帶毒，在實(shí)際生產(chǎn)中很難被發(fā)現(xiàn)，這也造成了這兩種病防控難度較大的局面。這兩種病毒已廣泛分布于世界各地，我國學(xué)者最早于1980年在新西蘭進(jìn)口的奶牛中分離牛傳染性鼻氣管炎病毒以及吉林省一家奶牛場發(fā)現(xiàn)并分離出牛病毒性腹瀉病毒。隨著我國養(yǎng)牛業(yè)的不斷壯大和發(fā)展，流行趨勢不斷上升，大部分省份均有牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒感染的資料報(bào)道，2012年10月份云南省就有12例牛傳染性鼻氣管炎，有些省份規(guī)模場牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測陽性感染率分別高達(dá)77.8%和88.9%，牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉防控形勢日趨嚴(yán)峻。我國將牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉分別列為二類和三類動(dòng)物疫病，均是我國進(jìn)境動(dòng)物必檢疾病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織設(shè)為B類動(dòng)物疫病。為準(zhǔn)確掌握昆明地區(qū)規(guī)模養(yǎng)牛場牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉的感染情況和流行趨勢，本研究于2021—2022年對(duì)全市16個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)61家規(guī)模養(yǎng)牛場流行情況進(jìn)行了調(diào)查分析，并提出了科學(xué)防控建議。1材料與方法1.1被檢樣品2021—2022年連續(xù)2年選取昆明市轄區(qū)內(nèi)16個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模在300頭左右的中型肉牛規(guī)模場共61家，隨機(jī)采集棉拭子樣品1394份，其中2021年采集36家肉牛規(guī)模殖場的854份棉拭子樣品，2022年采集25家肉牛規(guī)模場的540份棉拭子樣品。所采棉拭子樣品均立即置于1.0mLDMEM培養(yǎng)液中，隨后放于-20℃冰箱中保存待檢。1.2檢測試劑牛傳染性鼻氣管炎病毒核酸檢測試劑盒購自廣州維伯鑫生物科技股份有限公司，牛病毒性腹瀉病毒核酸檢測試劑盒購自青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心。1.3主要儀器熒光定量PCR檢測儀（ABIQ5）。1.4操作方法試劑使用前應(yīng)在常溫下充分融化并混勻后備用，按試劑盒說明書步驟配制反應(yīng)體系，充分混勻，按照20μL反應(yīng)體積分裝到PCR反應(yīng)管中，瞬時(shí)離心后備用；取出樣本后混勻，將陰性對(duì)照、待檢樣本、陽性對(duì)照各5μL加入到PCR反應(yīng)管中混勻，蓋上管蓋后2000r/min離心30s。將PCR反應(yīng)管放入PCR儀內(nèi)，其中：牛傳染性鼻氣管炎病毒核酸檢測時(shí)PCR反應(yīng)條件設(shè)置為50℃污染消化2min，95℃預(yù)變性2min，PCR進(jìn)行40個(gè)循環(huán)（95℃變性15s，60℃退火30s）；牛病毒性腹瀉病毒核酸檢測時(shí)PCR反應(yīng)條件設(shè)置為50℃污染消化15min，95℃預(yù)變性2min，PCR進(jìn)行40個(gè)循環(huán)（95℃變性15s，60℃退火30s）。1.5結(jié)果判定按照相應(yīng)試劑盒說明書判定樣品牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒核酸檢測結(jié)果。2結(jié)果通過連續(xù)2年分別對(duì)昆明市36家、25家肉牛規(guī)模養(yǎng)殖場進(jìn)行牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉病原學(xué)調(diào)查，結(jié)果如表1所示：①2021年，牛傳染性鼻氣管炎病毒核酸陽性牛2頭，均為2歲左右的母牛，個(gè)體陽性率0.23%；陽性個(gè)體均來自同一規(guī)模養(yǎng)殖場，該場規(guī)模在300頭左右，場群陽性率2.78%。牛病毒性腹瀉病毒核酸陽性牛3頭，個(gè)體陽性率0.35%；陽性個(gè)體均來自同一規(guī)模養(yǎng)殖場，該場規(guī)模在200頭左右，場群陽性率2.78%。②在對(duì)2021年兩個(gè)陽性場點(diǎn)持續(xù)進(jìn)行監(jiān)測的基礎(chǔ)上，2022年又篩選確定了23家規(guī)模養(yǎng)殖場，統(tǒng)一組織開展牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒核酸檢測，結(jié)果全部為陰性?？偟膩砜矗?年間昆明市牛傳染性鼻氣管炎病毒核酸平均個(gè)體陽性率0.14%，平均場群陽性率1.64%；牛病毒性腹瀉病毒核酸平均個(gè)體陽性率0.21%，平均場群陽性率1.64%。表1昆明市肉牛規(guī)模牛場牛染性鼻氣管炎病原學(xué)和牛病毒性腹瀉病原學(xué)檢測結(jié)果3討論與結(jié)論牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉均無特效治療方法，且存在隱性感染和終身排毒，都是造成這兩種病難以控制和消滅的根本原因。國外牛傳染性鼻氣管炎防控策略主要有2種，奧地利、丹麥等一些發(fā)達(dá)國家主要是通過檢疫淘汰逐步消滅該病，但這種方式資金投入較大，很多國家未能采用；還有一些歐洲國家通過使用gE基因標(biāo)記疫苗和實(shí)施免疫監(jiān)測相結(jié)合策略，區(qū)分自然感染和疫苗接種動(dòng)物，及時(shí)發(fā)現(xiàn)牛傳染性鼻氣管炎陽性牛只，從而進(jìn)行清除計(jì)劃。同樣對(duì)于牛病毒性腹瀉，發(fā)達(dá)國家的防控策略也基本和牛傳染性鼻氣管炎一致，北歐的瑞典和挪威等低密度養(yǎng)牛國家不適合采用疫苗免疫，嚴(yán)格生物安全管理，通過“篩查-淘汰”的策略逐步消滅該?。灰灿邢衩绹偷聡雀呙芏瑞B(yǎng)牛國家一樣，通過“疫苗免疫-監(jiān)測淘汰”的策略控制該病。在我國，關(guān)于牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉防控策略還沒有正式明確，各地區(qū)采用的方式也不一樣，如內(nèi)蒙古2021年全國首家制定了DB15/T2195-2021《規(guī)?；霾《拘愿篂a-黏膜病凈化技術(shù)規(guī)范》，并在全區(qū)規(guī)模化奶牛場和肉牛場推廣應(yīng)用。特別是隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展和國際貿(mào)易自由化進(jìn)程的不斷推進(jìn)，動(dòng)物疫病防控也逐漸摒棄傳統(tǒng)工作觀念，將動(dòng)物疫病凈化作為畜牧業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的重要標(biāo)志。近年來，國家高度重視動(dòng)物疫病凈化工作，陸續(xù)出臺(tái)了一系列政策文件并作出了相關(guān)安排部署，如2021年新修訂的《動(dòng)物防疫法》，明確將“凈化消滅”納入動(dòng)物防疫的方針和要求；2022年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部出臺(tái)的《關(guān)于推進(jìn)動(dòng)物疫病凈化工作的意見》中也提出了要在5年內(nèi)建成一批高水平的動(dòng)物疫病凈化場，這為各地開展動(dòng)物疫病防控，推進(jìn)動(dòng)物疫病凈化指明了方向。我國也有商品化的牛傳染性鼻氣管炎、牛病毒性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗，通過借鑒國外成功的防控經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合我國關(guān)于動(dòng)物疫病凈化的相關(guān)文件精神，針對(duì)昆明市牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉感染性較低的情況，特提出“監(jiān)測-淘汰-凈化”的防治策略，具體內(nèi)容為：①堅(jiān)持自繁自養(yǎng)。規(guī)模養(yǎng)牛場盡量避免從外面購買牛只，做到自繁自養(yǎng)。確需購買的，應(yīng)詳細(xì)了解牛只來源和過往發(fā)病史，并做好入場前隔離觀察，堅(jiān)決不能購入來源不明的牛只。②持續(xù)監(jiān)測淘汰。一旦發(fā)現(xiàn)陽性感染牛只，立即淘汰，并對(duì)牛群持續(xù)開展健康監(jiān)測，篩選隱形持續(xù)感染牛只，排除牛只隱性排毒風(fēng)險(xiǎn)，控制傳染源，這是有效控制和凈化牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉確保牛群長期健康最有效的方法。③加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。嚴(yán)格落實(shí)生物安全管理措施，做好日常環(huán)境衛(wèi)生消毒管理，避免因環(huán)境問題造成潛伏期內(nèi)牛體內(nèi)的病毒被激活而向外界持續(xù)排毒，導(dǎo)致疫病擴(kuò)散，切實(shí)提高防疫管理水平。④嚴(yán)格牛只檢疫。昆明市轄區(qū)內(nèi)擁有云南省乃至西南地區(qū)最大的活牛交易市場，作為全國活牛貿(mào)易的主要集散地之一，活牛來源廣泛、日均入場牛數(shù)達(dá)7000頭以上、年交易牛只35萬頭。因此對(duì)于入昆牛只，除了做好檢疫票證檢查和瘦肉精等抗生素殘留檢測外，牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉等主要牛病檢疫尤為重要。本研究結(jié)果顯示，2021年昆明地區(qū)肉牛規(guī)模養(yǎng)殖場牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒群體感染率較低，均為2.78%，其中牛傳染性鼻氣管炎病毒群體陽性率低于2010年云南省部分規(guī)模牛場30%的群體陽性率水平，遠(yuǎn)低于西南地區(qū)的