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主講老師：邢煜騫噬菌體展示技術(shù)流程噬菌體展示技術(shù)的流程抗體庫(kù)的構(gòu)建抗體的篩選和富集吸附結(jié)合洗脫擴(kuò)增富集篩選效率的檢查克隆的鑒定抗體的表達(dá)和純化抗體庫(kù)的構(gòu)建人B淋巴細(xì)胞mRNA加入PCR擴(kuò)增引物擴(kuò)增抗體重、輕鏈可變區(qū)基因逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈將VH、VL基因與衣殼蛋白基因連接后克隆到噬菌體質(zhì)粒載體中轉(zhuǎn)化大腸桿菌，輔助噬菌體超感染抗體片段-衣殼蛋白融合蛋白被包裝于噬菌體尾部吸附結(jié)合經(jīng)典篩選法：主要為固相篩選法和液相篩選法，用于抗原性質(zhì)明確的抗體篩選。固相篩選法通過包被在酶標(biāo)板或其他固相介質(zhì)上的抗原富集高親和性的噬菌體；液相篩選法是將生物素化的抗原包被在與親和素偶聯(lián)的磁珠或瓊脂糖上，進(jìn)行抗原特異性結(jié)合的方法。通過多次篩選，抗原得到高親和力的噬菌體。封閉：BSA、脫脂奶粉洗脫將對(duì)抗原特異性的PhAb從抗原柱上洗下來酸洗脫法：鹽酸甘氨酸緩沖液、檸檬酸、鹽酸堿洗脫法：三乙胺其他洗脫法：尿素、胍鹽、硫氰酸鹽擴(kuò)增富集洗脫下來的PhAb感染宿主細(xì)菌進(jìn)行擴(kuò)增?？寺〉蔫b定對(duì)經(jīng)多輪篩選獲得的陽(yáng)性克隆子進(jìn)行鑒定，獲得與目標(biāo)抗原特異性結(jié)合抗體。ELISA、免疫印跡、競(jìng)爭(zhēng)抑制、交叉反應(yīng)小結(jié)為什么噬菌體展示技術(shù)要經(jīng)過多輪的篩選？文

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