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文檔簡介
實(shí)驗(yàn)室生物安全Laboratory
Biosafety公共衛(wèi)生學(xué)院肖虹11/17/2024目
錄一、實(shí)驗(yàn)室生物安全概念二、實(shí)驗(yàn)室生物安全級(jí)別三、實(shí)驗(yàn)室生物安全設(shè)備四、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理21/17/2024實(shí)驗(yàn)室生物安全事件2003年以來,新加坡、臺(tái)灣和北京相繼發(fā)生實(shí)驗(yàn)室人員SARS病毒感染傳播事件。31/17/2024實(shí)驗(yàn)室生物安全事件歷史上,立克次體的命名。41/17/2024職業(yè)HIV感染Occupationally
acquired
AIDS
cases
or
HIV
infectionsreported
in
CDC
through
1992OccupationNo.
(%)
of
occupationaltransmissionsLaboratory
technician25(24.8)Nurse26(25.7)Physician13(12.8)Medical
technician/paramedic7(6.9)Dentist/dental
technician6(5.9)Health
aide/attendant6(5.9)Housekeeper/maintenance
worker6(5.9)Morgue
technician3(3.0)Technician/therapist3(3.0)Respiratory
therapist2(2.0)Surgical
technician2(2.0)Other
HCW2(2.0)Total100Adapted
fromD.L.Sewell,
Clinical
microbiologyreviews,1995,389-40551/17/2024實(shí)驗(yàn)室生物安全事件布氏桿菌引起的實(shí)驗(yàn)室感染(北京,杭州)腎病綜合癥出血熱的實(shí)驗(yàn)室感染世界范圍內(nèi)共有126例感染。(自1985年)中國數(shù)次感染,導(dǎo)致曾經(jīng)一段時(shí)間的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物荒。61/17/2024實(shí)驗(yàn)室感染概況71/17/202480%
是不明原因的感染。20%
感染的原因是明確的。80%
是由工作人員操作失誤引起的;20%
是由設(shè)備故障引起的。導(dǎo)致感染最多的4種實(shí)驗(yàn)室事故溢出和潑灑針頭和注射器銳器、碎玻璃動(dòng)物或動(dòng)物體外寄生蟲的咬傷或抓傷什么是生物危害?biohazard81/17/2024生物危害Biological
hazard:指有害或有潛在危害的生物因子對(duì)人、環(huán)境、生態(tài)和社會(huì)造成的危害或潛在危害。A
biological
hazard
or
biohazard
isanorganism,
or
substance
derived
fromanorganism,
that
poses
a
threat
to
human
health.實(shí)驗(yàn)室生物危害101/17/2024實(shí)驗(yàn)室生物危害:指在微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室研究過程中對(duì)人、環(huán)境、生態(tài)和社會(huì)造成的危害和對(duì)環(huán)境造成的污染。生物安全的概念實(shí)驗(yàn)室生物安全概念:避免危險(xiǎn)生物因子造成實(shí)驗(yàn)室人員暴露,向?qū)嶒?yàn)室外擴(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施。生物安全三個(gè)方面:人類的健康安全;人類賴以生存的農(nóng)業(yè)生物安全;
與人類生存有關(guān)的環(huán)境生物安全。生物安全涉及到多個(gè)學(xué)科和領(lǐng)域:預(yù)防醫(yī)學(xué)、環(huán)境保護(hù)、植物保護(hù)、野生動(dòng)物保護(hù)、生態(tài)、農(nóng)藥、林業(yè)等。111/17/2024實(shí)驗(yàn)室生物安全的概念實(shí)驗(yàn)室生物安全主要考慮:通過在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建造、使用個(gè)體防護(hù)設(shè)施、嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的工作及操作程序和規(guī)程等方面采取綜合措施,確保實(shí)驗(yàn)室工作人員不受實(shí)驗(yàn)對(duì)象的感染,確保周圍環(huán)境不受實(shí)驗(yàn)對(duì)象的污染。121/17/2024二、實(shí)驗(yàn)室生物安全級(jí)別131/17/2024感染性微生物的危險(xiǎn)度等級(jí)分類141/17/2024BSL-4BSC:生物安全柜;GMT:微生物學(xué)操作技術(shù)規(guī)范。151/17/2024BSL-2BSL-3BSL-1生物安全水平分級(jí)根據(jù)生物因子危害程度和采取的防護(hù)措施,將生物安全防護(hù)
水平(biosafety
level,BSL)分為4級(jí)(BSL-1、BSL-2
BSL-2、BSL-3、BSL-4表示);動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示。一級(jí)實(shí)驗(yàn)室一般適用于對(duì)健康成年人無致病作用的微生物;二級(jí)適用于對(duì)人和環(huán)境有中等潛在危害的微生物;三級(jí)適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素;四級(jí)適用于對(duì)人體具有高度的危險(xiǎn)性,通過汽溶膠途徑傳播或傳播途徑不明、目前尚無有效疫苗或治療方法的致病微生物或其毒素161/17/2024一級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室BSL-1171/17/2024實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對(duì)健康成年人已知無致病作用的微生物,如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等。E.coliBSL-1實(shí)驗(yàn)室181/17/2024普通建筑物,防節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)洗手池,宜靠近出口處。實(shí)驗(yàn)室門口設(shè)掛衣裝置,個(gè)人便裝與工作服分開。實(shí)驗(yàn)室各表面平整、易清潔、不滲水、耐腐蝕。實(shí)驗(yàn)臺(tái)面防水,耐腐蝕、耐熱。櫥柜和實(shí)驗(yàn)臺(tái)牢固,保持一定距離以便于清潔。如有可開啟的窗戶,應(yīng)設(shè)置紗窗。保證工作照明,避免不必要的反光和強(qiáng)光。有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備。典型的一級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室不需要特殊的一級(jí)和二級(jí)屏障、除需要洗手池外,依靠標(biāo)準(zhǔn)的微生物操作即可獲得基本的防護(hù)水平。191/17/2024二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室BSL-2201/17/2024實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對(duì)人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。hepatitis
A,
B,
and
C,
influenza
A,
Lymedisease,
dengue
fever,
Salmonella,mumps,
Bacillus
subtilis,
measles,MRSA,
VRSABSL-2實(shí)驗(yàn)室211/17/2024滿足BSL-1的要求。實(shí)驗(yàn)室門帶鎖并可自動(dòng)關(guān)閉,門應(yīng)有可視窗。應(yīng)有足夠的存儲(chǔ)空間擺放物品以方便使用。在實(shí)驗(yàn) 室工作區(qū)域外還應(yīng)當(dāng)有供長期使用的存儲(chǔ)空間。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用專門的工作服,戴乳膠手套。在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域外有存放個(gè)人衣物的條件。BSL-2實(shí)驗(yàn)室221/17/2024建筑內(nèi)應(yīng)配備高壓蒸汽滅菌器。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備生物安全柜。設(shè)洗眼設(shè)施,必要時(shí)應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置。通風(fēng),如使用窗戶自然通風(fēng)應(yīng)有防蟲紗窗。有可靠的電力和應(yīng)急照明,必要時(shí)設(shè)備用電源。實(shí)驗(yàn)室出口有在黑暗中可明確辨認(rèn)的標(biāo)識(shí)。BSL-2實(shí)驗(yàn)室在處理危險(xiǎn)度
2級(jí)或更高危險(xiǎn)度級(jí)別的微生物時(shí),在實(shí)驗(yàn)室門上應(yīng)標(biāo)有國際通用的生物危害警告標(biāo)志。231/17/2024典型的二級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室241/17/2024三級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室BSL-3251/17/2024實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素,通常已有預(yù)防傳染的疫苗。anthrax;
West
Nile
virus;
Eastern
equineencephalitis;
SARS;
tuberculosis;
RockyMountain
spotted
fever; and
yellow
fever.BSL-3實(shí)驗(yàn)室261/17/2024在建筑物中自成隔離區(qū)或?yàn)楠?dú)立建筑物。由清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)組成。污染區(qū)和半污染區(qū)之間應(yīng)設(shè)緩沖間。污染區(qū)與半污染區(qū)之間、半污染區(qū)和清潔區(qū)之間應(yīng)設(shè)置傳遞窗。我國的第一個(gè)P3實(shí)驗(yàn)室建于1987年,當(dāng)時(shí)主要用于艾滋病研究。某
BSL3
實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)圖271/17/2024BSL-3實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)表面應(yīng)光滑、耐腐蝕、防水;所有縫隙應(yīng)可靠密封,防震、防火。圍護(hù)結(jié)構(gòu)外圍墻體應(yīng)有適當(dāng)?shù)目拐鸷头阑鹉芰ΑL旎ò?、地板、墻間交角均為圓弧形且可靠密封。不應(yīng)有可開窗戶;內(nèi)設(shè)窗戶應(yīng)防破碎、防漏氣。出入口處應(yīng)采用防止節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物的設(shè)計(jì)。281/17/2024BSL-3實(shí)驗(yàn)室291/17/2024送排風(fēng)系統(tǒng)獨(dú)立的送排風(fēng)系統(tǒng)以控制氣流方向和壓力梯度。送風(fēng)口和排風(fēng)口的布置對(duì)面分布,上送下排。送排風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)為直排式,不得采用回風(fēng)系統(tǒng)。應(yīng)安裝風(fēng)機(jī)和生物安全柜啟動(dòng)自動(dòng)聯(lián)鎖裝置。BSL-3實(shí)驗(yàn)室301/17/2024環(huán)境參數(shù)相對(duì)室外大氣壓,污染區(qū)為-40Pa,并與生物安全柜等裝置內(nèi)氣壓保持安全合理壓差。BSL-3實(shí)驗(yàn)室311/17/2024其他實(shí)驗(yàn)室所需壓力設(shè)備不應(yīng)影響室內(nèi)負(fù)壓梯度。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置通訊系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)記錄等資料應(yīng)通過計(jì)算機(jī)等發(fā)送至實(shí)驗(yàn)室外。清潔區(qū)設(shè)置淋浴裝置。典型的三級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室321/17/2024四級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室BSL-4331/17/2024實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對(duì)人體具有高度的危險(xiǎn)性,通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明,目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。Bolivian
and
Argentine
hemorrhagic
fevers,Marburg
virus;
Ebolavirus; Lassa
fever;Crimean-Congo
hemorrhagic
fever,
and
othervarious
hemorrhagic
diseases.BSL-4實(shí)驗(yàn)室341/17/2024P4實(shí)驗(yàn)室是指生物安全四級(jí)實(shí)驗(yàn)室,專門用于開展烈性傳染病的研究,是全球生物安全最高級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室,目前國內(nèi)尚無一家。P4實(shí)驗(yàn)室的安全措施比P3實(shí)驗(yàn)室更嚴(yán)格,研究人員入內(nèi)不僅要穿全封閉的防護(hù)服,還要攜帶氧氣瓶。中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院在建準(zhǔn)P4實(shí)驗(yàn)室。中科院武漢病毒所P4實(shí)驗(yàn)室2010年完成。與外界溝通351/17/2024動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的生物安全參照BSL1-4實(shí)驗(yàn)室的要求,還應(yīng)考慮動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程產(chǎn)生的潛在生物危害的防護(hù)。應(yīng)根據(jù)動(dòng)物的種類、身體大小、生活習(xí)性、實(shí)驗(yàn)?zāi)?/p>
的等選擇專用于動(dòng)物的生物安全柜、動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施、消毒設(shè)施和清洗設(shè)施等。361/17/2024生物安全設(shè)備分類371/17/20241.超凈臺(tái)2.通風(fēng)櫥3.生物安全柜超凈臺(tái)正壓柜氣流從頂部或底部經(jīng)過過濾器后從操作區(qū)正面流向工作臺(tái)面,被樣品污染的氣流排出柜外,沒有循環(huán)氣流。超凈臺(tái)保護(hù)樣品不受污染,適用于普通實(shí)驗(yàn)室或1級(jí)生物安全水平中對(duì)人員和環(huán)境無保護(hù)要求的實(shí)驗(yàn)。381/17/2024通風(fēng)櫥
是實(shí)驗(yàn)室,特別是化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的一種大型設(shè)備。用途是減少實(shí)驗(yàn)者和有害氣體的接觸。通風(fēng)櫥是保護(hù)人員防止有
毒化學(xué)煙氣危害的一級(jí)屏障。它可以作為作為重要的安全
后援設(shè)備,像在化學(xué)實(shí)驗(yàn)過
程失敗,化學(xué)煙霧、塵埃和
有毒氣體產(chǎn)生時(shí)有效排出有
害氣體,保護(hù)工作人員和實(shí)
驗(yàn)室環(huán)境。391/17/2024生物安全柜Biological
SafetyCabinets401/17/2024生物安全柜的要求:顆粒經(jīng)HEPA過濾去除氣流為層流氣流有方向HEPA
(High
efficiency
particulate
air
Filter),高效空氣過濾器,達(dá)到
HEPA標(biāo)準(zhǔn)的過濾網(wǎng),對(duì)于0.1um和0.3um的有效率達(dá)到99.998%,HEPA網(wǎng)的特點(diǎn)是空氣可以通過,但細(xì)小的微粒卻無法通過。Class I生物安全柜可開啟前窗在負(fù)壓下操作表面風(fēng)速在0.36m/s,排出的氣體經(jīng)HEPA 過濾保護(hù)操作人員和環(huán)境適用于要求生物安全等級(jí)
1、2、3的工作適用于樣品不需保護(hù)的實(shí)驗(yàn)工作411/17/2024Class II生物安全柜421/17/2024所有的二級(jí)生物安全柜同一級(jí)生物安全柜一樣,能夠保護(hù)操作人員和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境免受危害。二級(jí)安全柜也能夠保護(hù)產(chǎn)品樣本在微生物操作過程中免受污染。二級(jí)生物安全柜可以在一、二、三級(jí)生物安全水平的生物因子操作中使用。431/17/2024Class II生物安全柜的分類441/17/2024Class
II生物安全柜空氣流向451/17/2024CLASS
III生物安全柜(手套柜)全封閉的、氣密結(jié)構(gòu)的通風(fēng)柜;通過橡膠手套進(jìn)行操作;柜內(nèi)保持至少120Pa的負(fù)壓;供氣通過HEPA抽入內(nèi);外排的氣流經(jīng)過雙層HEPA過濾或經(jīng)HEPA后再經(jīng)燃燒處理。
CLASS
III
型BSC適用于BSL3
、BSL4的生物實(shí)驗(yàn)。461/17/2024生物安全柜放置五個(gè)遠(yuǎn)離點(diǎn)(氣流) 門風(fēng)扇空調(diào)開著的窗戶人員活動(dòng)頻繁的區(qū)域擺放要求穩(wěn)固的平臺(tái)或支架兩側(cè)、后面和上端留30cmAirRegister設(shè)備首選位置候選位置工作臺(tái)設(shè)備471/17/2024反面教材481/17/2024生物安全柜的使用操作者在移動(dòng)雙臂進(jìn)出安全柜時(shí),應(yīng)該垂直地緩慢進(jìn)出前面的開口。Ⅱ級(jí)生物安全柜前面的進(jìn)氣格柵不能被阻擋。放入柜內(nèi)的物品應(yīng)采用70%酒精來清除表面污染。491/17/2024生物安全柜的使用501/17/2024所有物品應(yīng)盡可能地放在工作臺(tái)后部靠近工作臺(tái)后緣的位置,并使其在操作中不會(huì)阻擋后部格柵??僧a(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備(例如混勻器、離心機(jī)等)應(yīng)靠近安全柜的后部放置。廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品,應(yīng)該放在安全柜內(nèi)的某一側(cè)。生物安全柜的使用理想的工作臺(tái)擺放被污染的區(qū)域干凈的物品廢棄物托盤垃圾袋511/17/2024生物安全柜內(nèi)接種針的滅菌紅外電熱接種環(huán)滅菌器521/17/2024生物安全柜的使用531/17/2024在每次使用前后,要清除生物安全柜內(nèi)表面的污染。工作臺(tái)面和內(nèi)壁要用消毒劑進(jìn)行擦拭,所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里任何微生物。在使用生物安全柜時(shí)應(yīng)穿著個(gè)體防護(hù)服。在進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)生物安全水平的操作時(shí),可穿著普通實(shí)驗(yàn)服。高效空氣過濾工作人員安全無渦流單向流空氣實(shí)驗(yàn)對(duì)象不受污染手套箱式操作口通風(fēng)櫥無是是否否I級(jí)有是否否否II級(jí)有是是是否III級(jí)有是是是是541/17/2024生物安全裝置異同對(duì)各級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室的要求551/17/2024生物安全柜生物安全級(jí)別一級(jí)二級(jí)三級(jí)四級(jí)Ⅰ級(jí)不需要隨意需要不需要Ⅱ級(jí)不需要最好有需要需要,在防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室中使用Ⅲ級(jí)不需要不需要最好有需要,在安全柜室使用個(gè)人防護(hù)裝備實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服面部及身體保護(hù)手套鞋呼吸防護(hù)561/17/2024個(gè)體防護(hù)裝備裝備避免的危害安全性特征實(shí)驗(yàn)服、隔離衣、連體衣污染衣服背面開口罩在日常服裝外塑料圍裙污染衣服·防水鞋襪碰撞和噴濺·不露腳趾護(hù)目鏡碰撞和噴濺·防碰撞鏡片(必須有視力校正或外戴視力校正眼鏡)·側(cè)面有護(hù)罩安全眼鏡碰撞·防碰撞鏡片(必須有視力校正)·側(cè)面有護(hù)罩面罩碰撞和噴濺罩住整個(gè)面部發(fā)生意外時(shí)易于取下571/17/2024個(gè)體防護(hù)裝備裝備避免的危害安全性特征防毒面具吸入氣溶膠手套直接接觸微生物劃破在設(shè)計(jì)上包括一次性使用的、整 個(gè)面部或一半面部空氣凈化的、整個(gè)面部或加罩的動(dòng)力空氣凈化(powered
airpurifying,PAPR)的以及供氣的防毒面具得到微生物學(xué)認(rèn)可的一次性乳 膠、乙烯樹脂或聚腈類材料保護(hù)手網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)581/17/2024四、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理591/17/2024實(shí)驗(yàn)室及其人員生物安全管理,按國務(wù)院令(第424號(hào))《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》于2004年11月起施行。管理制度601/17/2024實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)置和準(zhǔn)入在主實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)合理設(shè)置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)。非實(shí)驗(yàn)有關(guān)人員和物品不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室工作人員、外來合作者、進(jìn)修和學(xué)習(xí)人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室及其崗位之前必須經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室主任的批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)室工作人員資格和培訓(xùn)611/17/2024實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須是受過專業(yè)教育的技術(shù)人員。在獨(dú)立工作前須在中高級(jí)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員指導(dǎo)下進(jìn)行上崗培訓(xùn),達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn),方可開始工作實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須被告知實(shí)驗(yàn)室工作的潛在危險(xiǎn)并接受實(shí)驗(yàn)室安全教育,自愿從事實(shí)驗(yàn)室工作實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程實(shí)驗(yàn)室特殊管理621/17/2024對(duì)可能的危險(xiǎn)因素,制定保證安全的工作程序。事前進(jìn)行有效的培訓(xùn)和模擬訓(xùn)練。對(duì)于意外事故要能夠提供包括緊急救助或?qū)I(yè)性保健治療的措施,足以應(yīng)付緊急情況。實(shí)驗(yàn)室事故處理及上報(bào)。實(shí)驗(yàn)室生物安全管理制度631/17/2024實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度尖銳器具安全使用制度實(shí)驗(yàn)室消毒防護(hù)制度標(biāo)本采集運(yùn)輸制度廢棄物處理制度工作人員防護(hù)制度差錯(cuò)事故處理制度什么是醫(yī)療廢物?641/17/2024醫(yī)療廢物:醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)在醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動(dòng)中產(chǎn)生的具有直接或者間接感染性、毒性以及其他危害性的廢物。醫(yī)療廢物分類651/17/2024感染性廢物病理性廢物損傷性廢物藥物性廢物化學(xué)性廢物處置要點(diǎn)661/17/2024醫(yī)療廢物集中處置包裝物要防滲漏、防銳器穿透,明顯標(biāo)識(shí)和警示說明醫(yī)療廢物儲(chǔ)存設(shè)備定期消毒醫(yī)療廢物制病原體的培養(yǎng)基、標(biāo)本和菌種、毒種保存液等高危險(xiǎn)廢物,在交醫(yī)療廢物
集中處置前應(yīng)就地消毒差錯(cuò)事故、感染事故1、一般差錯(cuò):生物安全柜內(nèi)灑溢,沒有嚴(yán)重后果。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部處理,處理后報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。2、重大差錯(cuò)
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