口蹄疫疫苗的質(zhì)量控制及檢驗(yàn)

01口蹄疫疫苗的質(zhì)量控制（一）原輔料、包裝材料、標(biāo)簽的質(zhì)量控制倉(cāng)庫(kù)應(yīng)由專(zhuān)人負(fù)責(zé)對(duì)進(jìn)廠的原輔料進(jìn)行驗(yàn)收、保管、收放管理，并定期填寫(xiě)原輔材料質(zhì)量報(bào)告。車(chē)間應(yīng)由專(zhuān)人負(fù)責(zé)車(chē)間用的原輔材料、包裝材料、標(biāo)簽的領(lǐng)取、驗(yàn)收和使用。（二）生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制范圍應(yīng)由質(zhì)量管理部門(mén)和生產(chǎn)部門(mén)共同制定，并形成書(shū)面技術(shù)檔案。為了保證生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制得以實(shí)施，質(zhì)量管理部門(mén)和生產(chǎn)部門(mén)有必要對(duì)具體實(shí)施的方法加以規(guī)定。生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制點(diǎn)由疫苗生產(chǎn)企業(yè)根據(jù)生產(chǎn)工藝和工序?qū)|(zhì)量影響重要程度來(lái)決定。檢查或檢驗(yàn)后，應(yīng)填寫(xiě)檢查或檢驗(yàn)記錄。生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制與監(jiān)督工作由車(chē)間(兼職質(zhì)監(jiān)員)與質(zhì)量管理部門(mén)(專(zhuān)職質(zhì)監(jiān)員)共同完成。檢驗(yàn)性的質(zhì)量控制由質(zhì)量管理部門(mén)在生產(chǎn)過(guò)程中實(shí)施。各級(jí)專(zhuān)職和兼職質(zhì)量監(jiān)督員，要按照疫苗的工藝要求和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，檢查半成品(中間體)、成品質(zhì)量和工藝衛(wèi)生情況并做好記錄，填寫(xiě)半成品及成品的質(zhì)量報(bào)告。（三）批生產(chǎn)記錄和批檢驗(yàn)記錄的管理質(zhì)量管理部負(fù)責(zé)對(duì)批生產(chǎn)記錄和批檢驗(yàn)記錄的審核，以及配料、稱(chēng)量過(guò)程的復(fù)核，各工序生產(chǎn)記錄、清場(chǎng)記錄、中間產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)結(jié)果、偏差處理、成品檢驗(yàn)結(jié)果的復(fù)核等。（四）產(chǎn)品出廠后的質(zhì)量監(jiān)控（1）處理退貨質(zhì)量管理部門(mén)應(yīng)對(duì)退貨的產(chǎn)品進(jìn)行復(fù)檢、確認(rèn)，重大問(wèn)題會(huì)同有關(guān)部門(mén)分析原因，提出處理意見(jiàn)和防范措施，記錄存檔，并向企業(yè)負(fù)責(zé)人提交書(shū)面報(bào)告。（2）用戶(hù)訪問(wèn)質(zhì)量管理部門(mén)必須按規(guī)定要求，組織開(kāi)展對(duì)用戶(hù)的訪問(wèn)或發(fā)放產(chǎn)品征詢(xún)質(zhì)量改進(jìn)意見(jiàn)單，重視用戶(hù)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的意見(jiàn)，制訂整改措施并監(jiān)督實(shí)施。（3）留樣觀察質(zhì)檢部門(mén)應(yīng)設(shè)立留樣觀察室，根據(jù)留樣觀察制度，明確規(guī)定留樣品種、批數(shù)、數(shù)量、復(fù)查項(xiàng)目、復(fù)查期限、留樣時(shí)間等．指定專(zhuān)人進(jìn)行留樣觀察，填寫(xiě)留樣觀察記錄。產(chǎn)品留樣期間如有異常質(zhì)量變化，應(yīng)填寫(xiě)留樣樣品質(zhì)量變化通知單，報(bào)告質(zhì)量管理部門(mén)負(fù)責(zé)人，由部門(mén)負(fù)責(zé)人報(bào)告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)及部門(mén)分析原因研究措施，并監(jiān)督執(zhí)行。（4）穩(wěn)定性試驗(yàn)質(zhì)量管理部門(mén)應(yīng)開(kāi)展對(duì)原料、中間產(chǎn)品及成品的質(zhì)量穩(wěn)定性考核，根據(jù)考核結(jié)果來(lái)確定物料的貯存期，為制定藥品有效期提供依據(jù)。02口蹄疫滅活疫苗的質(zhì)量檢驗(yàn)質(zhì)量檢驗(yàn)應(yīng)包括生產(chǎn)前期的相關(guān)檢驗(yàn)、生產(chǎn)過(guò)程的中間檢驗(yàn)及產(chǎn)品最終檢驗(yàn)和試驗(yàn)。生產(chǎn)準(zhǔn)備和生產(chǎn)過(guò)程中間的檢驗(yàn)指原輔材料、包裝材料、工藝用水、中間產(chǎn)品的檢驗(yàn)。所有生產(chǎn)過(guò)程涉及的物料必須進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格并提供文件證明才可以投放到生產(chǎn)工序中。最終檢驗(yàn)和試驗(yàn)成品必須在各工序的檢驗(yàn)和試驗(yàn)合格后才能進(jìn)行成品的最終檢驗(yàn)和試驗(yàn)，檢驗(yàn)合格并提供文件證明，且有關(guān)文件得到認(rèn)可后成品才能出廠。滿(mǎn)足質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定全部要求的為合格品，反之為不合格品。（一）取樣取樣是指按取樣規(guī)定抽取一定數(shù)量的能代表全體物料的樣本來(lái)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)的結(jié)論才可信。取樣工作由質(zhì)量管理部門(mén)負(fù)責(zé)，由專(zhuān)職的取樣員取樣。1.取樣的原則（1）保證樣品的代表性，而且不影響所取容器內(nèi)物料的原始質(zhì)量，著重需要考慮微生物和理化方面的影響因素。（2）取樣時(shí)盡可能將物料移至指定的取樣區(qū)。取樣環(huán)境的空氣潔凈度級(jí)別應(yīng)與生產(chǎn)要求一致。（3）對(duì)原輔料、半成品(中間體)、成品、副產(chǎn)品及包裝材料都應(yīng)制定取樣辦法，對(duì)取樣環(huán)境的潔凈要求，取樣人員、取樣容器、取樣的部位、順序、取樣方法、取樣量、樣品混合方法、取樣容器的清洗、保管、必要的留樣時(shí)間，以及對(duì)無(wú)菌或有毒物料在取樣時(shí)的特殊要求都應(yīng)有明確的規(guī)定，否則會(huì)失去取樣的意義或影響檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。2.取樣的程序（1）將盛放物料的容器移至取樣區(qū)。（2）按清潔規(guī)定清潔并隨機(jī)取樣，取樣數(shù)量應(yīng)參照有關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。（3）樣品容器上貼簽，注明必要的內(nèi)容，如：批號(hào)；原料名稱(chēng)；取樣員簽名、取樣日期。（4）重新關(guān)閉容器，并注明“已取樣”。（5）將容器放回原處，并填寫(xiě)取樣記錄。（二）檢驗(yàn)1.質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的編寫(xiě)（1）原輔料(包括工藝用水)、半成品、成品及包裝材料的檢驗(yàn)操作規(guī)程由質(zhì)檢室根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)組織編制，經(jīng)質(zhì)管負(fù)責(zé)人審查，技術(shù)副廠長(zhǎng)或總工程師批準(zhǔn)、簽章后，按規(guī)定日期起執(zhí)行。（2）檢驗(yàn)操作規(guī)程內(nèi)容應(yīng)包括：檢品名稱(chēng)(中、外文名)、代號(hào)、結(jié)構(gòu)式、分子式、分子量、性狀、鑒別、檢驗(yàn)項(xiàng)目與限度及操作方法等。（3）滴定溶液、標(biāo)準(zhǔn)液、指示劑、試劑、酸堿度、熱原、生物效價(jià)等單項(xiàng)檢驗(yàn)操作方法，參閱《中華人民共和國(guó)獸藥典》或有關(guān)規(guī)定。2.檢驗(yàn)獸藥生產(chǎn)中所有的原輔料、包裝材料、半成品、成品、工藝用水的檢驗(yàn)工作均由質(zhì)量管理部門(mén)按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定組織實(shí)施。在口蹄疫疫苗生產(chǎn)中一般有四個(gè)最重要的質(zhì)量查證點(diǎn)：原輔材料檢驗(yàn)、病毒效價(jià)檢測(cè)、滅活檢測(cè)、成品檢驗(yàn)。（1）原輔料檢驗(yàn)。對(duì)于購(gòu)入的原輔料，應(yīng)著重進(jìn)行理化檢驗(yàn)和無(wú)菌檢驗(yàn)。檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)與供應(yīng)原料的生產(chǎn)廠家提供的檢驗(yàn)報(bào)告進(jìn)行核對(duì)，如雙方的檢驗(yàn)結(jié)果相差較大(如供應(yīng)廠家檢驗(yàn)報(bào)告結(jié)論是合格，而購(gòu)貨廠家檢驗(yàn)報(bào)告結(jié)論是不合格；或雖均為合格結(jié)論，但檢驗(yàn)數(shù)據(jù)相差較大)時(shí)，質(zhì)量管理部門(mén)必須仔細(xì)檢查所收到供應(yīng)廠家的檢驗(yàn)證書(shū)的一致性和完整性。并有必要與供應(yīng)廠家進(jìn)行聯(lián)系，共同分析檢驗(yàn)結(jié)論不一致的原因，以取得雙方檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果的一致性。（2）包裝材料的檢驗(yàn)。包裝材料檢驗(yàn)項(xiàng)目的內(nèi)容主要包括材質(zhì)、外觀、規(guī)格和理化性質(zhì)。直接接觸藥品的包裝材料、容器，還要對(duì)其衛(wèi)生狀況進(jìn)行檢查。檢驗(yàn)后質(zhì)檢員要填寫(xiě)檢驗(yàn)報(bào)告。包裝材料經(jīng)檢驗(yàn)合格后，由質(zhì)管部門(mén)出具合格證書(shū)并貼上合格的標(biāo)志或標(biāo)簽，方可使用。不合格品貼上不合格的標(biāo)志，并在較短的時(shí)間內(nèi)退回供應(yīng)廠家。（3）半成品的檢驗(yàn)。半成品的檢驗(yàn)是在生產(chǎn)中進(jìn)行的。如病毒液的pH、顏色、病毒含量等項(xiàng)目的檢驗(yàn)；疫苗灌裝中要進(jìn)行裝量檢查，灌裝后要進(jìn)行裝量和穩(wěn)定性的檢查；印字后要進(jìn)行內(nèi)容、字跡清晰度的檢驗(yàn)；裝盒后要對(duì)裝入盒內(nèi)支數(shù)的抽查等。其中最重要的是病毒效價(jià)檢測(cè)和滅活檢測(cè)（安全性檢驗(yàn)和無(wú)菌檢驗(yàn)）。半成品的每一步檢驗(yàn)，都應(yīng)該由專(zhuān)職質(zhì)檢員來(lái)完成，經(jīng)檢驗(yàn)合格并由質(zhì)檢員簽字后，方可進(jìn)入下一步的生產(chǎn)程序。①牛、羊口蹄疫疫苗用病毒抗原效價(jià)的檢測(cè)：將待測(cè)效價(jià)的口蹄疫病毒液用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液作十倍梯度稀釋?zhuān)謩e標(biāo)記為10-1、10-2、……10-8。取10-6、10-7、10-83個(gè)稀釋度的病毒液分別接種到培養(yǎng)24?48小時(shí)生長(zhǎng)良好的細(xì)胞管中（或乳鼠）。將接毒后的細(xì)胞管置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天定時(shí)觀察兩次。根據(jù)細(xì)胞的病變情況做好記錄，連續(xù)觀察72小時(shí)。按各稀釋度細(xì)胞病變情況計(jì)算病毒的TCID50，TCID50應(yīng)≥7。②豬口蹄疫疫苗用病毒抗原效價(jià)的檢測(cè)：將待測(cè)效價(jià)的口蹄疫病毒液用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液作十倍梯度稀釋?zhuān)謩e標(biāo)記為10-1、10-2、……10-8。取10-6、10-7、10-83個(gè)稀釋度的病毒液分別接種于2日齡乳鼠（或細(xì)胞），每個(gè)稀釋度接種4只，每天定時(shí)觀察兩次。根據(jù)小鼠病變及死亡情況做好記錄，連續(xù)觀察72小時(shí)。按各稀釋度小鼠死亡情況計(jì)算病毒的LD50，LD50應(yīng)≥7。③口蹄疫抗原滅活后的無(wú)菌檢驗(yàn)方法：參考《中華人民共和國(guó)獸藥典》。④口蹄疫抗原滅活后的安全性檢驗(yàn)方法：a.將滅活后的病毒液頸部皮下接種3～4日齡乳鼠4～5只，0.2mL/只，并設(shè)空白對(duì)照，觀察7天，乳鼠不得出現(xiàn)口蹄疫癥狀和發(fā)病死亡。b.將滅活后的病毒液接種不帶母源抗體未經(jīng)免疫的30～40日齡仔豬，每頭仔豬兩側(cè)耳根后接種5mL，觀察10天應(yīng)不出現(xiàn)口蹄疫癥狀和死亡。（4）成品的檢驗(yàn)?？谔阋邷缁钜呙缭谂鷾?zhǔn)銷(xiāo)售前應(yīng)進(jìn)行成品的理化檢驗(yàn)、無(wú)菌檢驗(yàn)、安全性檢驗(yàn)、效力檢驗(yàn)，以保證其符合企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)要求。①口蹄疫滅活疫苗的理化檢驗(yàn)方法：口蹄疫滅活油佐劑疫苗應(yīng)為乳白色或淡粉紅色略帶粘滯性的乳劑。吸取疫苗逐滴滴入盛有潔凈冷水的容器，除第一滴呈云霧狀擴(kuò)散外，其余均不擴(kuò)散。以0.12cm內(nèi)徑的1mL吸管吸取疫苗1mL，在室溫下垂直放置使疫苗自然跌落，放出0.4mL的時(shí)間不得超過(guò)10秒。以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，乳劑液面出油不得超過(guò)液體高度的1/10，底部出水也不得超過(guò)液體高度的1/10。②口蹄疫滅活疫苗的無(wú)菌檢驗(yàn)方法：參考《中華人民共和國(guó)獸藥典》。③口蹄疫滅活疫苗的安全性檢驗(yàn)：a.皮下接種豚鼠和小白鼠，每只豚鼠皮下注射2mL，每只小白鼠皮下注射0.5mL，接種后觀察7d，應(yīng)不出現(xiàn)口蹄疫癥狀和因注射疫苗引起的毒性反應(yīng)。b.對(duì)于豬口蹄疫滅活疫苗，除按a步驟檢驗(yàn)外，還應(yīng)取抗體檢測(cè)陰性的30?40日齡仔豬兩頭，每頭仔豬兩側(cè)耳根后接種疫苗兩頭份，觀察14d，應(yīng)不出現(xiàn)口蹄疫癥狀和因注射疫苗引起的毒性反應(yīng)。c.對(duì)于牛羊口蹄疫滅活疫苗，除按a步驟檢驗(yàn)外，取抗體檢測(cè)陰性6月齡以上牛3頭，每頭牛舌面皮內(nèi)注射疫苗20個(gè)點(diǎn)，每點(diǎn)0.1mL，7d后頸部再注射疫苗3頭份（6mL）觀察10天，接種牛不得出現(xiàn)口蹄疫癥狀或因注射疫苗引起的毒性反應(yīng)。④口蹄疫滅活疫苗的效力檢驗(yàn)：a.對(duì)于豬用滅活疫苗，選體重40kg左右的健康且抗體檢測(cè)陰性仔豬17頭，其中15頭隨機(jī)分為3組，每組5頭，將疫苗按1頭份、1/3頭份、1/9頭份接種，每劑量于耳根后肌肉接種5頭豬，接種后28天，連同2頭對(duì)照豬，每頭耳根后肌肉注射1000個(gè)半數(shù)感染量（ID50）口蹄疫強(qiáng)毒，觀察10d，對(duì)照豬均應(yīng)至少一蹄出現(xiàn)水皰或潰瘍，免疫豬出現(xiàn)任何口蹄疫癥狀，判為不保護(hù)，根據(jù)免疫豬的保護(hù)頭數(shù)計(jì)算PD50，每頭份疫苗應(yīng)不低于3個(gè)PD50。b.對(duì)牛羊用滅活疫苗，選6月齡以上健康且抗體檢測(cè)陰性牛17頭，其中15頭隨機(jī)分為3組，每組5頭，將疫苗按1頭份、1/3頭份、1/9頭份接種，每劑量頸部肌肉接種5頭牛，接種后21天，連同2頭對(duì)照牛，每頭牛舌面分兩點(diǎn)皮內(nèi)注射1000個(gè)半數(shù)感染量（ID50）的同源口蹄疫強(qiáng)毒，觀察10d，對(duì)照牛每頭必須3個(gè)以上蹄部出現(xiàn)口蹄疫典型病變。免疫牛除舌面以外，不得出現(xiàn)任何口蹄疫病變判為保護(hù)。根據(jù)各劑量發(fā)病牛的數(shù)量計(jì)算PD50。要求每劑量疫苗效力不得低于3個(gè)PD50。3.檢驗(yàn)記錄檢驗(yàn)人員應(yīng)按規(guī)定作好檢驗(yàn)操作記錄。檢驗(yàn)操作記錄為檢驗(yàn)所得數(shù)據(jù)、記錄、運(yùn)算等原始資料。檢驗(yàn)結(jié)果由檢驗(yàn)人簽字，專(zhuān)業(yè)技術(shù)負(fù)責(zé)人復(fù)核，檢驗(yàn)報(bào)告單由質(zhì)