臨床免疫學和免疫檢驗概論

臨床免疫學和免疫檢驗概論

1

中樞免疫器官

2

免疫系統(tǒng)-免疫細胞

T細胞

3

B細胞

第02講概論（二）

免疫系統(tǒng)一免疫分子

4

1.

免疫球蛋白

2.補體系統(tǒng)

5

3.細胞因子

6

4.黏附分子

5.CD抗原

人類白細胞分化抗原（HLA）是指血細胞在分化成熟為不同譜系、分

化的不同階段及細胞活化過程中，出現(xiàn)或消失的細胞表面標記分子。采

用單克隆抗體鑒定識別的自細胞分化抗原稱CD抗原。

檢測CD抗原是實驗室識別細胞及不同分化階段細胞或細胞亞群最主

要的方法。

7

8

C.抵抗并清除傳染性因子的能力

D.發(fā)現(xiàn)和消除惡變細胞的能力

E.清除體內衰老損傷細胞的能力

『正確答案JB

『答案解析J免疫的概念是指機體免疫系統(tǒng)具有識別和排除抗原性異

物

的能力。

機體免疫自穩(wěn)功能低下，可導致A.免疫缺陷病B.免疫增殖病C.自身

免疫病D.惡性腫瘤E.超敏反應

『正確答案』C

『答案解析J免疫自穩(wěn)是清除損傷或衰老細胞，功能低下時可導致自

身

免疫病。

人體內最大的外周免疫器官是A.胸腺B.骨髓C.脾D.淋巴結E.法氏

囊

『正確答案JC『答案解析J人體內最大的外周免疫器官是脾。

可非特異直接殺傷靶細胞的是A.NK細胞B.Th細胞C.Ts細胞D.Tc細

胞

9

E.TCRa

8+細胞

『正確答案』A『答案解析』NK細胞可非特異直接殺傷靶細胞。

新生兒從初乳中獲得的1g主要是A.IgEB.lgDC.IgGD.SIgAE.IgM

『正確答案』D『答案解析』新生兒從初乳中獲得的1g主要是SlgAo

特異性免疫效應功能不包括A.漿細胞分泌特異性抗體，執(zhí)行體液免疫

功能B.Th細胞分泌細胞因子等效應因子，執(zhí)行細胞免疫功能C.CTL細胞

殺傷靶細胞D.產生記憶細胞E.中性粒細胞吞噬與殺滅細菌

『正確答案JE

『答案解析J中性粒細胞吞噬與殺滅細菌屬于固有免疫，是非特異性

免

疫。

粘膜伴隨的淋巴組織主要的功能是A.B、T淋巴細胞棲息和增殖場所

B.各種免疫細胞的發(fā)源地C.T細胞分化成熟的場所D.B細胞分化成熟的場

所E.主要產生IgA及分泌性IgA,執(zhí)行體液免疫與局部特異免疫作用

10

『正確答案JE

『答案解析J粘膜伴隨的淋巴組織主要的功能是分泌性IgAo

抗原抗體反應

第01講抗原抗體反應

抗原抗體反應

抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結合反應。

體內反應可介導吞噬、溶菌、殺菌、中和毒素等體液免疫效應；

體外反應則根據(jù)抗原、抗體性質的不同和反應條件的差別，在抗原抗

體復合物形成后表現(xiàn)為不同的現(xiàn)象。包括：沉淀反應、凝集反應等?！?/p>

抗原抗體反應(antigen-antibodyreaction)

抗原抗體反應的原理抗原抗體反應的特點影響抗原抗體反應的因

素免疫學檢測技術的類型

11

抗原抗體反應的原理

一、抗原抗體結合力

抗原和抗體的結合為分子間結構互補的特異結合，是一種非共價的結

合，不形成牢固的共價鍵。在抗原抗體特異結合后有四種分子間引力參與

并促進其結合。

靜電引力

范德華引力

氫鍵

疏水作用力

靜電引力(electrostaticforces)范德華引力：作用最小。(vander

Waalsinteractions)氫鍵：最具特異性。(hydrogenbond)疏水作用

力：作用最大。(hydrophobicinteractions)

二、抗原抗體的親和力與親合力

親和性(affinity)

12

抗體分子上一個抗原結合點與一個相應抗原表位之間結合強度，抗原

抗體的親和性取決于兩者空間構型互補的程度。

親合力（avidity）

指一個完整抗體分子的抗原結合部位與若干相應抗原表位之間的結

合強度。與親和性、抗體結合價、抗原的有效抗原表位有關。

Avidity

TheoverallstrengthofbindingbetweenanAgwithmanydeterminants

andmultivalentAbs

三、親水膠體轉化為疏水膠體

抗原抗體反應的特點

特異性

13

可逆性

比例性

階段性

一、特異性

抗原與抗體結合反應的專一性

分子基礎：抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構型的互補性。

兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結構的抗原表位，可與彼此

相應的抗血清發(fā)生反應，稱為交叉反應。

14

二、比例性

抗原與抗體發(fā)生可見反應需遵循一定的量比關系等價帶：抗原抗體

比例合適。帶現(xiàn)象：抗原抗體比例不合適。前帶：抗體過量。后帶：

抗原過量。

三、可逆性免疫復合物可在一定條件下解離為游離抗原與抗體影響

因素：抗體對相應抗原的親合力越高，結合越牢固，越不易解離。環(huán)境

因素對復合物的影響一pH、離子強度。

15

四、階段性

影響抗原抗體反應的因素

一、反應物自身因素

1.抗原

抗原的理化性狀、表面抗原決定簇的種類和數(shù)目均可影響抗原抗體反

應的結果。

2.抗體

抗體的來源、濃度、特異性與親和性均可影響抗原抗體反應。

二、環(huán)境因素電解質：生理鹽水或緩沖液。酸堿度：pH6?9。溫度：

15℃~40℃,37℃最適。

免疫學檢驗技術的類型取決于：抗原、抗體的性質反應條件其他

參與成分五種主要類型：凝集反應沉淀反應補體參與的反應中和反

應標記免疫反應

【習題】

抗原抗體結合力中作用最大的是

16

A.靜電引力

B.范德華引力C.氫鍵結合力D.疏水作用力E.分子間結合力

『正確答案』Dr答案解析』抗原抗體結合力中作用最大的是疏

水作用力。

有

用已知抗原或抗體來檢測相對應的抗體或抗原，是由于抗原抗體反應

具A.特異性B.比例性C.可逆性D.親和性E.帶現(xiàn)象

『正確答案JA

『答案解析J已知抗原或抗體來檢測相對應的抗體或抗原是由于抗原

抗

體反應具有特異性。

抗原抗體反應比例不合適出現(xiàn)的沉淀物減少的現(xiàn)象稱為A.前帶B.后

帶C.帶現(xiàn)象D.等價帶E.等電點

『正確答案JC

『答案解析』抗原抗體反應比例不合適出現(xiàn)的沉淀物減少的現(xiàn)象稱為

市4+h

現(xiàn)象。

有關交叉反應的描述，正確的是

A.為非特異性抗原抗體反應

17

B.由于不同抗原分子上存在共同抗原表位所致

C.對免疫學診斷結果判斷沒影響D.利用交叉反應進行診斷典型例子

是肥達試驗E.利用交叉反應進行診斷典型例子是庫姆試驗

『正確答案JBf答案解析』交叉反應是由于不同抗原分子上存

在共同抗原表位。

下列關于抗原抗體反應的特點表述，正確的是A.抗原抗體反應有交叉

反應，故抗原抗體反應特異性不強B.抗原抗體反應必須抗體量略大于抗原

量C.抗原抗體反應形成的復合物又可解離為游離的抗原與抗體D.抗體與

抗原結合牢固，不易被解離E.抗原抗體反應分為兩個階段，兩個階段之間

有明顯的界限

『正確答案JC

『答案解析J抗原抗體反應形成的復合物又可解離為游離的抗原與抗

體，

這是抗原抗體反應的可逆性。

免疫原和抗血清的制備

第01講免疫原和抗血清的制備

免疫原和抗血清的制備

抗原和抗體是免疫反應的基本條件也是免疫檢驗的兩大重要因素?？?/p>

原是制備特異性抗體的前提條件，抗體可用于純化抗原和檢測抗原，也是

醫(yī)學檢驗中用于疾病診斷和研究的重要物質。

免疫原的制備

免疫佐劑

抗血清的制備

抗血清的鑒定和保存

抗血清的純化

顆粒性抗原的制備

顆粒性抗原主要是指細胞抗原和細菌抗原，制備的方法較簡單，通過分

離或純培養(yǎng)即可得到。

細胞抗原——綿羊紅細胞。

細菌抗原菌體0抗原。

可溶性抗原的制備

18

可溶性抗原：蛋白質、糖蛋白、脂蛋白、酶類、補體、細菌外毒素等。

（一）組織可溶性抗原的粗提（二）可溶性抗原的純化（三）純化抗原

的鑒定

（-）組織可溶性抗原的粗提

1.組織均漿的制備：高速組織搗碎機法、研磨法；

2.細胞的破碎：反復凍融法、超聲破碎法、自溶法、酶處理法、表面

活性劑處理法。

（二）可溶性抗原的提取和純化

1.超速離心法；

2.選擇性沉淀法：核酸去除法、鹽析法、有機溶劑沉淀法、聚合物沉

淀法;

3.凝膠過濾法;

4.離子交換層析法；

5.親和層析法；

6.電泳法。

（三）純化抗原的鑒定

主要包括蛋白含量測定、分子量測定、純度鑒定、免疫活性鑒定等。

半抗原性免疫原的制備

半抗原只具有抗原性而無免疫原性；如某些多肽、多糖、激素、小分

子量的藥物等。半抗原與蛋白質載體或高分子聚合物結合后才有免疫原性。

（一）載體

1.蛋白質類：牛血白蛋白等；

2.多肽聚合物：多聚賴氨酸等；

3.大分子聚合物和某些顆粒：聚乙烯毗咯烷酮等。

（二）半抗原與載體的連接方法

1.物理方法：通過電荷和微孔吸附半抗原，吸附的載體有淀粉、聚乙

烯毗咯烷酮、硫酸葡聚糖、竣甲基纖維素等。

2.化學方法：利用某些功能基團將半抗原連接到載體上。如碳二亞胺

法、戊二醛法等。

（三）半抗原性免疫原的鑒定

與載體結合的半抗原數(shù)目與免疫原性密切相關。所以，應測定半抗原

與載體的比例，方法有：①吸收光譜分析法：②放射性核素標記半抗原滲

入法。

免疫佐劑

指先于抗原或與抗原同時注入體內，可增強機體對抗原的免疫應答的

物質。

佐劑的作用機制

19

①改變抗原的物理性狀，延緩抗原降解和排除；②增強APC處理和

提呈抗原的能力；③刺激淋巴細胞增殖和分化；④改變抗體的產生類型；

⑤誘導遲發(fā)型超敏反應。

抗血清的制備

將制備好的免疫原按照一定的程序，免疫動物，使其產生多克隆抗體。

然后采集動物血液，分離含有抗體的血清，即為抗血清。

免疫動物的選擇1.抗原來源與動物種屬差異越大，免疫原性越強，免

疫效果越好。2.適齡、健康、體重合適。3.對于蛋白質抗原大部分動物

皆適合，常用的是山羊和家兔。

免疫程序

1.免疫原的劑量：由免疫原性的強弱、動物的個體狀態(tài)和免疫時間確

7E。

2.免疫途徑：初次免疫一般選擇皮內接種，加強免疫和顆粒性抗原一

般選擇靜脈注射。

3.免疫間隔時間：重要因素。第1次與第2次免疫間隔時間以10?20

天為好，第3次及以后的間隔一般為7?10天。

動物采血法1.頸動脈采血法2.心臟采血法3.靜脈采血法

抗血清的鑒定和保存抗血清的鑒定1.抗體特異性的鑒定2.抗體效

價的測定3.抗體純度的鑒定

20

4.抗體親和力的鑒定

抗血清的保存①2?8c保存：用于短期保存；②冷凍保存：一般可

保存5年；③真空干燥保存:用真空凍干機進行干燥,在冰箱中可保存5?

10年。

抗血清的純化

純化方法有鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析法、親和層析法等。

【習題】屬于顆粒性抗原的是A.脂多糖B.球蛋白C.白蛋白D.DNAE.

血小板

『正確答案JE

『答案解析J顆粒性抗原包括血小板。可溶性抗原：蛋白質、糖蛋白、

脂蛋白、酶類、補體、細菌外毒素等。

顆粒性抗原免疫接種方法一般采用A.淋巴結注射B.靜脈注射C.皮內

注射D.皮下注射E.肌肉內注射

『正確答案JBr答案解析』顆粒性抗原免疫接種方法一般采用

靜脈注射。

要從組織和細胞勻漿中粗提某種蛋白抗原，最常用又簡便的分離方法

A.鹽析法

21

B.凝膠過濾法

C.離子交換層析法D.免疫親和層析法E.免疫電泳法

『正確答案JA

『答案解析J鹽析法是組織和細胞中粗提蛋白抗原最常用且簡便的分

離

方法。

純化特異性抗體時，可采用下列哪種方法除去雜抗體A.鹽析法B.凝

膠過濾法C.離子交換層析法D.免疫親和層析法E.免疫電泳法

『正確答案JD『答案解析』免疫親和層析法能有效的去除雜抗

體。

蛋白質抗原首次免疫接種后，最好間隔多長時間再進行第二次免疫

A.7?10天B.10?20天C.20?30天D.30?60天E,3個月

『正確答案JB

『答案解析J蛋白質抗原首次免疫接種后，最好間隔10?20天再進

行第

二次免疫。

免疫小鼠的采血方法常為A.靜脈采血法B.心臟采血法C.頸動脈放血

法

22

D.斷尾法或摘除眼球法

E.股動脈放血法

『正確答案JDf答案解析』免疫小鼠的采血方法常為斷尾法或

摘除眼球法。

單克隆抗體與基因工程抗體的制備

第01講單克隆抗體與基因工程抗體的制備

單克隆抗體與基因工程抗體的制備

由一個B細胞克隆產生的，針對單一表位、結構相同、功能均一的抗

體，稱為單克隆抗體（mAb）。

第一代抗體：多克隆抗體（pAb）；

第二代抗體：單克隆抗體（mAb）；

第三代抗體：基因工程抗體（）

GEAb0

雜交瘤技術的基本原理

單克隆抗體的制備

基因工程抗體制備

單克隆抗體的應用

23

GeorgesKohlerandCesarMilstein,1975,discoveredhybridomatechnique

1984

24

雜交瘤技術1.小鼠骨髓瘤細胞①細胞株穩(wěn)定，易于傳代培養(yǎng)；②細

胞株自身不會產生免疫球蛋白或細胞因子；③次黃喋吟磷酸核酸核糖轉

化酶（HGPRT）的缺陷株。

2.免疫脾細胞

①與骨髓瘤細胞同源的純系小鼠；

②皮內多點注射抗原。

3.細胞融合

PEG可能導致細胞膜上脂類物質的物理結構重排，使細胞膜容易打開

而有助于細胞融合。

25

4.雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng)

陽性雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)與凍存

有限稀釋法

26

有限稀釋法

單克隆抗體的制備

單克隆抗體的產生

體內誘生法

體外培養(yǎng)法：將雜交瘤細胞置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，待培養(yǎng)液顏色改變或細

胞過多開始死亡時，收集上清液，離心去掉碎片及細胞即可。

單克隆抗體的純化①用半飽和、飽和硫酸錢進行沉淀，達到初步濃

縮和純化的目的。②經過適當溶解和充分稀釋后，用親和層析法進一步

純化。單克隆抗體的性質鑒定舊類型測定、特異性測定、抗體效價測定、

表位測定、親和力測定。單克隆抗體的特性1.高度特異性。2.高度的均

一性和可重復性。

27

3.弱凝集反應和不呈現(xiàn)沉淀反應。

4.對環(huán)境敏感性。

單克隆抗體的優(yōu)點

（1）雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代。

（2）可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。

（3）適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA

等。

（4）由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學功能，可用于體內的

放射免疫顯像和免疫導向治療。

單克隆抗體的局限性

（1）單克隆抗體固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應用范

圍。

（2）反應強度不如多克隆抗體。

（3）制備技術復雜，而且費時費工，價格較高。

基因工程抗體制備

多克隆抗體和單克隆抗體來自異種動物，用于人體會引起很強的排斥

反應。應用DNA重組及蛋白工程技術對抗體編碼基因按不同需要進行改造

和裝配，經導入適當?shù)氖荏w細胞后重新表達的抗體，稱為基因工程抗體。

①降低甚至消除人體對抗體的排斥反應；

②分子量較小，更有利于穿透血管壁，進入病灶的核心部位；③

根據(jù)治療的需要，制備新型抗體；

④生產成本低。

人源化抗體、小分子抗體、抗體融合蛋白、雙特異性抗體、噬菌體抗

體庫技術。

單克隆抗體的應用

檢驗醫(yī)學診斷試劑

單克隆抗體廣泛應用于ELISA、放射免疫分析、免疫組化和流式細胞儀

等技術，并且單克隆抗體的應用很大程度上促進了商品化試劑盒的發(fā)展。

①病原微生物抗原、抗體的檢測；②腫瘤抗原的檢測；③免疫細胞及其亞

群的檢測；④激素測定；⑤細胞因子的測定

蛋白質的提純

28

【習題】單克隆抗體目前效果較好的純化方法A.親和層析法B.凝膠

過濾法C.離子交換層析法D.超速離心法E.鹽析法

『正確答案』AF答案解析』單克隆抗體目前效果較好的純化方

法是親和層析法。

在HAT選擇培養(yǎng)基中可長期存活者是A.細胞多聚體B.融合的脾細胞

與瘤細胞C.融合的瘤細胞與瘤細胞D.未融合的瘤細胞E.未融合的脾細胞

『正確答案』B（答案解析』融合的脾細胞與瘤細胞能在HAT選

擇培養(yǎng)基中可長期存活。

雜交瘤技術中的骨髓瘤細胞應具備的特點不包括

29

A.穩(wěn)定和易培養(yǎng)

B.自身無分泌功能C.細胞無惡性變化D.融合度高E.HGPRT缺陷

『正確答案JC『答案解析J雜交瘤技術中的骨髓瘤細胞需要其

惡性變化。

小鼠骨髓瘤細胞與下列哪種細胞融合A.經過免疫的B淋巴細胞B.經

過免疫的T淋巴細胞C.未經過免疫的B淋巴細胞D.未經過免疫的T淋巴

細胞E.淋巴細胞

『正確答案JA『答案解析J小鼠骨髓瘤細胞與經過免疫的B淋

巴細胞融合。

關于雜交瘤細胞特點的錯誤描述A.具備了雙親細胞的特點B.分泌人

源性單克隆抗體C.分泌鼠源性單克隆抗體D.體外繁殖快速E.能分泌抗體

『正確答案』B

『答案解析J雜交瘤細胞是分泌鼠源性單克隆抗體，而不是人源性單

克

隆抗體。

HAT培養(yǎng)基中三種關鍵成分為A.次黃喋嶺、氨基蝶吟、胸腺喀咤核昔

B.黃喋吟、氨基蝶吟、胸腺喀咤核昔C.氨基喋嶺、氨基蝶吟、胸腺喀咤核

昔

30

D.腺喋吟、氨基蝶吟、胸腺喀喔核甘

E.鳥喋吟、氨基蝶吟、胸腺喀咤核音

『正確答案JA

『答案解析JHAT培養(yǎng)基中三種關鍵成分為次黃喋嶺、氨基蝶吟、胸

腺喀

咤核昔。

凝集反應

第01講凝集反應

凝集反應

細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體在適當電解質存在下，形成肉

眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應。

凝集反應的特點

直接凝集反應

間接凝集反應

凝集反應的特點

1.可定性檢測，也可進行半定量檢測。

2.靈敏度高、方法簡便，因而在臨床檢驗中被廣泛應用。

3.分為兩個階段：①抗原抗體的特異性結合;②出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。

直接凝集反應

細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原，在適當?shù)碾娊赓|參與下可直接

與相應抗體結合出現(xiàn)凝集。

玻片凝集試驗

31

試管凝集試驗

32

間接凝集反應

將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當大小的顆粒性載體表面（致敏

顆粒），然后與相應抗體（或抗原）作用，在適宜電解質存在的條件下，

出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應。

間接凝集反應的類型

33

1.正向間接凝集反應

可溶性抗原致敏載體，用于檢測標本中相應抗體的方法。簡便、快速、

敏感性和特異性好，成本低。

2.反向間接凝集反應

選用已知特異性抗體致敏載體以檢測標本中相應的抗原。

3.間接凝集抑制反應

先將可溶性抗原（或抗體）與相應的抗體（或抗原）混合，然后再加

入抗原（或抗體）致敏的紅細胞，則能抑制原先的血凝現(xiàn)象。

4.協(xié)同凝集反應

實質上是反向間接凝集試驗，但所用載體是金黃色葡萄球菌。方法簡

便、34

快速、靈敏，可用于細菌、病毒、毒素及各種可溶性抗原的檢測。

間接血凝試驗

是以紅細胞作為載體的間接凝集試驗。試驗結果穩(wěn)定，具有簡便、快

速、成本低廉等特點，其敏感性高于膠乳凝集試驗和直接凝集反應。

膠乳凝集試驗

是以聚苯乙烯膠乳微粒（0.8Rm）作為載體，將抗原（或抗體）與膠

乳顆粒結合成為致敏乳膠后，直接用以檢測標本中相應抗體（或抗原）的

凝集反應。

明膠凝集試驗

將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上，當致敏顆粒與樣品

血清作用時，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集。

間接凝集反應的應用

快速、敏感、操作簡便、無需特殊的實驗設備，可用于抗原或抗體的

測定。

【習題】試管凝集試驗的效價判斷標準是依據(jù)出現(xiàn)肉眼可見的如下凝

集現(xiàn)象

A.+

B.+或++

C.++

D.+++

E.++++

『正確答案JC『答案解析J試管凝集試驗的效價判斷標準是依

據(jù)出現(xiàn)肉眼可見的++凝35

集現(xiàn)象。

間接凝集反應不能檢測A.抗體B.AFP抗原C.傷寒沙門菌菌體抗原D.

類風濕因子E.HCG抗原

『正確答案jcr答案解析』傷寒沙門菌菌體抗原是顆粒性抗原，

屬于直接凝集反應。

關于正向間接凝集試驗說法錯誤的是A.抗原致敏載體B.用于檢測標

本中抗原C.出現(xiàn)凝集則為陽性D.敏感性高E.特異性強

『正確答案』Bf答案解析』正向間接凝集試驗用于檢測標本中

抗體。

關于間接血凝試驗說法錯誤的是A.紅細胞作為載體B.不能檢測抗原

C.可檢測抗體D.可判斷陽性反應的強弱E.應用廣泛

『正確答案JBf答案解析』間接血凝試驗可以檢測抗原也可以

檢測抗體。

關于反向間接凝集試驗說法錯誤的是

36

A.抗體致敏載體

B.用于檢測標本中抗原C.出現(xiàn)凝集為陰性D.敏感性高E.特異性強

『正確答案』cr答案解析』反向間接凝集試驗出現(xiàn)凝集為陽性。

關于間接凝集抑制試驗說法錯誤的是A.檢測標本中抗原B.出現(xiàn)凝集

為陽性C.抗體為診斷試劑D.抗原致敏載體E.不出現(xiàn)凝集為陽性

『正確答案JB『答案解析』間接凝集抑制試驗出現(xiàn)凝集為陰性。

協(xié)同凝集試驗所用的載體是A.新鮮紅細胞B.洗滌紅細胞C.醛化紅細

胞D.聚苯乙烯顆粒E.金黃色葡萄球菌

『正確答案JE『答案解析』協(xié)同凝集試驗所用的載體是金黃色

葡萄球菌。

沉淀反應

第01講沉淀反應

沉淀反應

蛋白質、多糖、毒素等可溶性抗原與相應抗體在特定條件下特異性結

合，出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象，稱為沉淀反應。

37

38

免疫濁度測定的影響因素

1.抗原抗體比例

當反應液中抗體過量時，IC的形成隨著抗原遞增而增加，至抗原、抗

體最適比例處達最高峰，這就是經典的海德堡曲線理論。

2.抗體的質量

要求：抗體的特異性強、效價高、親和力強。

R型,H型。

3.抗原抗體反應的溶液

PH6.5?8.5,磷酸鹽緩沖液。

4.增濁劑

聚乙二醇（PEG）、吐溫-20,可消除抗原或抗體分子周圍的電子云和水

化層，促進抗原、抗體分子靠近，結合形成大分子復合物。

39

免疫比濁方法分類

透射和散射免疫比濁法

免疫膠乳比濁法

凝膠內沉淀試驗單向免疫擴散試驗

40

Mancini曲線：適用大分子抗原和長時間擴散（＞48小時）的結果；

2公式：c/d=k。

Fahey曲線：適用于小分子抗原和較短時間（＜24h）擴散的結果處理，

用半對數(shù)紙畫線。

公式：logc/d=ko

雙向免疫擴散試驗

41

免疫電泳技術免疫電泳技術是電泳分析與沉淀反應的結合產物。1.

加快了反應速度2.集中了擴散方向3.分開了不同的蛋白

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火箭免疫電泳

免疫電泳

免疫固定電泳

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44

Mancini曲線

A.適用于小分子抗原，擴散時間大于48hB.適用于小分子抗原，擴散

時間小于24hC.適用于大分子抗原，擴散時間小于24hD.抗原濃度與沉淀

環(huán)直徑的平方呈線性關系E.使用半對數(shù)坐標紙作圖

『正確答案JD『答案解析』Mancini曲線抗原濃度與沉淀環(huán)直徑

的平方呈線性關系。

單向瓊脂擴散法可用于A.抗體定性B.抗體定量C.抗原定性D.抗原

定量E.抗體效價滴定

『正確答案』Dr答案解析』單向瓊脂擴散法可用于抗原定量。

雙向瓊脂擴散試驗出現(xiàn)多條沉淀線的原因A.抗原抗體過剩B.抗原抗

體相等C.抗原抗體缺乏D.抗原抗體不純E.抗原抗體分子量不等

『正確答案JDF答案解析』雙向瓊脂擴散試驗出現(xiàn)多條沉淀線

是由于抗原抗體不純。

根據(jù)海德堡曲線，下列說法錯誤的是A.抗原過量時產生鉤狀效應，沉

淀物少B.抗體過量時，沉淀物也少C.抗原抗體比例適當時產生沉淀量最

多

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D.免疫比濁法中抗原過量導致測量失敗

E.免疫比濁法中抗體過量導致測量失敗

『正確答案JE『答案解析J海德堡曲線免疫比濁法中抗原過量

導致測量失敗。

放射免疫分析

第01講放射免疫分析

放射免疫分析

放射免疫分析是利用放射性核素可探測的靈敏性、精確性和抗原抗體

反應特異性相結合的一種免疫技術。

放射免疫技術

放射免疫分析

免疫放射分析

放射免疫分析技術的應用

放射免疫技術

具有靈敏度高、特異性強、重復性好、樣品及試劑用量少、操作簡便

且易于標準化等優(yōu)點，廣泛應用于生物醫(yī)學研究和臨床診斷領域中各種微

量蛋白質、激素、小分子藥物和腫瘤標志物的定量分析，對相關學科的發(fā)

展起到了極大的推動作用。

基本類型及原理

1.放射免疫分析（RIA）

2.免疫放射分析（IRMA）

常用的放射性核素

放射免疫技術常用的放射性核素有125I、131I、3H、14c等。使用

最廣泛的是125I,可采用探測Y射線的晶體閃爍計數(shù)器測量。

標志物制備及鑒定

125I以放射性碘原子通過置換被標志物分子中酪氨酸或酪胺殘基以

及組胺殘基上的氫原子。

（1）氯胺T（ch-T）法。

（2）乳過氧化物酶標記法。

（3）間接標記法。

放射性標志物的純化

（1）凝膠過濾法：分子篩。

（2）離子交換層析法：極性差異。

（3）聚丙烯酰胺凝膠電泳法（PAGE）：電荷和直徑。

（4）高效液相色譜法。

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放射性標志物的鑒定

1.放射化學純度：大于95%。

2.免疫活性：標志物與抗體結合的能力。

3.比放射性：標志物中所含的放射性強度。

方法學評價

除常規(guī)的靈敏度、精密度、準確性、特異性和穩(wěn)定性等指標外，還應

注意以下指標：

（1）可靠性。

（2）劑量-反應曲線。

（3）高劑量鉤狀效