實驗四細胞的冷凍保存_第1頁
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文檔簡介

關(guān)于實驗四細胞的冷凍保存一、實驗目的掌握細胞凍存與復蘇的基本原理、方法和要領(lǐng)熟練進行細胞凍存與復蘇的操作第2頁,共11頁，2024年2月25日，星期天二、實驗原理細胞凍存的主要目的：保存種子細胞。減少細胞被污染的危險性。減少細胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變。避免有限細胞系出現(xiàn)衰老或惡性轉(zhuǎn)化。降低人力和物力。第3頁,共11頁，2024年2月25日，星期天冰晶細胞脫水電解質(zhì)濃度變化pH變化蛋白質(zhì)變性水解酶釋出線粒體功能障礙細胞超微結(jié)構(gòu)改變?nèi)苊阁w膜透性變化核內(nèi)DNA構(gòu)型和生物學行為的變化細胞損傷冰晶對細胞的損傷第4頁,共11頁，2024年2月25日，星期天冷凍保存原則

冷凍過程要緩慢。凍存細胞必須處在對數(shù)生長期細胞濃度控制在：1×107－5×107/ml使用高濃度血清或蛋白保護劑使用合適的細胞冷凍保護劑，以保護細胞在冷凍過程中免受冰晶破壞。第5頁,共11頁，2024年2月25日，星期天細胞冷凍保護劑的選擇對細胞無毒易穿透進入細胞，使冰點降低提高細胞膜對水的通透性常用冷凍保護劑是DMSO(二甲基亞砜)GL(甘油)EG(乙二醇)第6頁,共11頁，2024年2月25日，星期天標準冷凍程序降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5～-10℃/min到－100℃時，則可迅速浸入液氮中。第7頁,共11頁，2024年2月25日，星期天簡易冷凍程序細胞凍存管放入泡沫小盒放入-70℃冰箱3h細胞凍存管放入紗布小袋中液氮表面上停留30min直接投入液氮細胞凍存管放入泡沫小盒放入-20℃冰箱3h細胞凍存管放入紗布小袋中放入液氮灌的液氮蒸汽中，逐漸下降到液氮表面（30－40min）停留30min后，直接投入液氮中細胞凍存管裝入紗布小袋液氮罐口緩慢放入，按-1℃/min，在30－40min內(nèi)到達液氮表面停留30min投入液氮第8頁,共11頁，2024年2月25日，星期天液氮從液體向氣體轉(zhuǎn)化的過程中產(chǎn)生的深低溫-196℃

第9頁,共11頁，2024年2月25日，星期天本次冷凍程序細胞凍存管用厚棉花包裹，放入塑料盒中或泡沫盒中，直接投入-70℃超低溫冰箱中。第10頁,共11頁，2

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