來自酸熱脂環(huán)酸桿菌的嗜熱的與嗜熱嗜酸的糖基化基因和酶以及相關生物、方法

來自酸熱脂環(huán)酸桿菌的嗜熱的與嗜熱嗜酸的糖基化基因和酶以及相關生物、方法專利名稱：來自酸熱脂環(huán)酸桿菌的嗜熱的與嗜熱嗜酸的糖基化基因和酶以及相關生物、方法技術領域：本發(fā)明總體上涉及生物技術。更具體地說，本發(fā)明涉及來自酸熱脂環(huán)酸桿菌(Alicyclobacillusacidocaldarius)的分離的和/或純化的多肽和編碼多肽的核酸序列以及它們的使用方法。背景直到最近為止人們認為細菌通常不糖基化它們的蛋白。雖然已經(jīng)有一些已報道的例子，但是這些作為罕見的異?，F(xiàn)象而不予考慮(BOrman2006)?，F(xiàn)在正變得更為接受的是細菌確實糖基化它們的蛋白，可能是以比真核生物更多的方式，盡管這種觀點還沒有廣泛傳播(Schaffer等人2001)。在最近的一篇綜述文章中，敘述了糖基化已顯示出協(xié)助蛋白穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)例如可溶性的物理性質(zhì)、防止蛋白水解、改變活性特征、以及靶向分泌(Upreti等人200。1994年，一小組從酸熱脂環(huán)酸桿菌純化出一種淀粉酶并且顯示所述淀粉酶在活性生長過程中是細胞結合的、非糖基化的和不可溶的(khwerman等人1994)。當培養(yǎng)物進入穩(wěn)定期時，所述細胞釋放多種可溶的糖基化形式的淀粉酶進入培養(yǎng)基(khwerman等人1994)。沒有進行比較不同形式淀粉酶活性的嘗試。發(fā)明公開內(nèi)容本發(fā)明的實施方案涉及酸熱脂環(huán)酸桿菌基因組的純化的和/或分離的核苷酸序列、或者其同源物或片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述核苷酸序列選自SEQIDNO.2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240、257、274、291和310或者其同源物或片段中的至少一個。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述同源物選自由對SEQIDN0.2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240、257、274、291和310中的至少一個具有至少80%的序列同一性的核苷酸序列所組成的組。本發(fā)明的實施方案可以進一步涉及一種分離的和/或純化的核酸序列，所述核酸序列包括編碼一種多肽的核酸序列，所述多肽選自由對SEQIDN0.1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290、和309中的至少一個具有至少90%的序列同一性的多肽所組成的組。本發(fā)明的實施方案還涉及由包括酸熱脂環(huán)酸桿菌基因組的核苷酸序列的核苷酸序列或者其同源物或片段所編碼的分離的和/或純化的多肽。在一個實施方案中，所述核苷酸序列包括選自由以下組成的組的核苷酸序列對SEQIDNo.2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240、257、274、291和310中的至少一個具有至少80%的序列同一性的核苷酸序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述核苷酸序列包含選自SEQIDN0.2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240、257、274、291和310或者其同源物或片段中的至少一個的核苷酸序列。在又一實施方案中，所述多肽包含SEQIDNO.1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290、和309的氨基酸序列。還在一實施方案中，所述多肽包含選自由以下組成的組的氨基酸序列對SEQIDNo:1,18,35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290和309中的至少一個具有至少90%的序列同一性的多肽。在本發(fā)明的實施方案中，所述多肽可以是嗜酸的和/或嗜熱的。在其他的實施方案中，所述多肽可以是糖基化的、聚乙二醇化的、或其他方式的翻譯后修飾的。方法的實施方案包括使用第二多肽糖基化或翻譯后修飾第一多肽，所述第二多肽選自由對SEQIDNO:1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273,290和309具有至少90%的序列同一性的多肽所組成的組。方法的另外的實施方案包括調(diào)節(jié)蛋白的穩(wěn)定性、溶解性、降解性、活性特征、和/或第一多肽的分泌的方法，所述方法包括通過第二多肽來糖基化或翻譯后修飾第一多肽，所述第二多肽選自由對SEQIDNo:1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290和309具有至少90%的序列同一性的多肽所組成的組。方法的另外的實施方案包括將產(chǎn)生或編碼一種重組的、純化的、和/或分離的核苷酸序列的細胞和/或一種重組的、純化的和/或分離的多肽放在包括等于或高于約25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90和/或95攝氏度的溫度和/或等于、低于和/或高于8、7、6、5、4、3、2、1和/或0的pH的環(huán)境中，所述核苷酸序列包括選自由以下組成的組的核苷酸序列對SEQIDNo:2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240,257,274,291和310的序列中的至少一個具有至少90%的序列同一性的核苷酸序列；所述多肽選自由對SEQIDNo:1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290和309的序列中的一個具有至少90%的序列同一性的多肽所組成的組?？紤]到在此所包含的教導內(nèi)容，本發(fā)明的這些方面及其他方面將對熟練的技術人員變得明顯。附圖簡述圖1分別描繪了在SEQIDNO1(RAAC00164)與ref|YP_001223775.11、refIYP_729290.1I、refIZP_01084440.1I、refIZP_01079150.1I、以及ref|ZP_01471594.1(SEQIDNo:3_7)之間的序列比對，這些序列都具有表1中SEQIDNO1指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”合。圖2分別描繪了SEQIDNO18(RAAC00517)與ref|ZP_00589533.11、refIΖΡ_01386435.1|,ref|YP_378533.1|,ref|ZP_00513158.1以及ref|YP_374173.1(SEQIDNO:20-24)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo18指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為U”IO圖3分別描繪了SEQIDNO35(RAAC00650)與ref|YP_001127183.11、refIZP_02038504.1Uref|ΥΡ_001647987.1Uref|YP_001377114.1以及ref|NP_835081.1(SEQIDNo:37-41)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo35指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”Iο圖4分別描繪了SEQIDNO52(RAAC00991)與ref|ZP_02327412.11、refIΥΡ_001487207.1Uref|ZP_01172765.1|,ref|NP_831314.1以及refINP_844008.11(SEQIDNO54-58)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNO:52指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”Iο圖5A禾口5B分別描繪了SEQIDNO69(RAAC01110)與ref|YP_001519856.11、refIYP_711688.1|,ref|ΖΡ_01331931.1Uref|YP_001076955.1以及refIYP_336440.1(SEQIDNO:71-75)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo69指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”Iο圖6A禾口6B分另Ij描繪了SEQIDNO86(RAAC01166)與gb|AAR99615.1|、gbIABM68334.2|、ref|ZP_01372248.11、ref|YP_519555.11以及ref|ZP_02234077.11(SEQIDNO88-92)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:86指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖7分另Ij描繪了SEQIDNO103(RAAC01167)與ref|ZP_01515212.11、refIΥΡ_001277643.1Uref|ZP_02291400.1Uref|ΥΡ_001633727.1以及ref|YP_001434357.1(SEQIDNO:105-109)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:103指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖8A和8B分別描繪了SEQIDNO120(RAAC01170)與ref|YP_001324592.11、refIYP_342776.1I、refINP_780975.1I、refIΥΡ_001636830.1I以及ref|YP_001299026.1(SEQIDNO:122-126)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:120指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖9分另Ij描繪了SEQIDNO137(RAAC01248)與ref|ZP_02170160.11、refIZP_01171895.1I、refIYP_076646.1I、refIYP_590910.1I以及ref|ZP_02175410.1(SEQIDNO:139-143)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:137指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖10A和10B分別描繪了SEQIDNO154(RAAC01348)與ref|ZP_01665289.11、refIΖΡ_01643350.11、gb|AAW77167.11、ref|YP_452722.1以及ref|ZP_02241787.1(SEQIDNO:156-160)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:巧4指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖11分另Ij描繪了SEQIDNO171(RAAC01377)與ref|YP_147952.11、refIYP_520670.1|,ref|YP_001395809.1Uref|YP_001309701.1以及ref|YP_001643660.1(SEQIDNO:173-177)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:171指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖12分另Ij描繪了SEQIDNO188(RAAC01611)與ref|YP_146214.11、refIYP_001124463.1|,ref|NP_865262.1|,ref|YP_426013.1以及refIΖΡ_01885526.1(SEQIDNO:190-194)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:188指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖13A和i;3B分別描繪了SEQIDNO:205(RAAC01612)與ref|YP_146215.11、refIYP_001124464.1Uref|ΥΡ_074948.1Uref|ΥΡ_001039503.1以及ref|NP_621770.1(SEQIDNO:207-211)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:205指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖14A禾Π14Β分別描繪了SEQIDNO222(RAAC01926)與ref|ΥΡ_001038202.1|、refIΖΡ_01667587.1|,ref|ΖΡ_01575301.1Uref|YP_001211020.1以及ref|YP_516465.1(SEQIDNO:224-228)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:222指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖15分別描繪了SEQIDNO239(RAAC01998)與ref|NP_348940.11、refINP_721244.11、dbj|BAC75700.11、ref|ZP_00605123.11以及ref|YP_015329.11(SEQIDNo=241-245)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:239指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖16分別描繪了SEQIDNO256(RAAC02011)與ref|YP_754819.11、refIYP_184322.11,ref|NP_577787.11,ref|NP_142068.11以及ref|NP_125751.11(SEQIDNO=258-262)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:256指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖17A和17B分別描繪了SEQIDNO:273(RAAC02381)與ref|NP_622177.11、refIYP_848858.1|,ref|ΥΡ_001374688.1|,ref|NP_470039.1以及ref|ZP_01929325.1(SEQIDNo275_279)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:273指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖18分另Ij描繪了SEQIDNO290(RAAC02421)與ref|ZP_01721811.11、refINP_241897.1|,ref|ΥΡ_001486101.1|,ref|ZP_01170532.1以及ref|ZP_02327994.1(SEQIDNO=292-296)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:290指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。圖19分別描繪了SEQIDNO309(RAAC01168)與ref|ΥΡ_001663880.11、refIYP_001181332.1Uref|YP_675143.1Uref|YP_002352821.1以及ref|YP_001114454.1(SEQIDNO:311-315)之間的序列比對，其中后者都具有表1中SEQIDNo:309指定的功能。在所有序列中保守的氨基酸被指示為“*”，而一般保守的氨基酸被指示為“”。實施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明的實施方案包括與嗜熱嗜酸菌酸熱脂環(huán)酸桿菌的蛋白的糖基化和/或翻譯后修飾有關的基因以及相關蛋白。與這些過程有關的基因的編碼序列是從酸熱脂環(huán)酸桿菌的基因組測序所產(chǎn)生的序列信息中來確定。這些基因和蛋白可能代表酸熱脂環(huán)酸桿菌或其他生物體的代謝工程的目標。與蛋白的糖基化和/或翻譯后修飾相關的在酸熱脂環(huán)酸桿菌的基因組中發(fā)現(xiàn)的核酸序列、以及由此編碼的氨基酸的非限制性實例在表1中列出。糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白可能是但不限于以下類別UDP葡萄糖磷酸轉(zhuǎn)移酶、多萜醇磷酸甘露糖基轉(zhuǎn)移酶、和糖基轉(zhuǎn)移酶以及其他。本發(fā)明的實施方案部分地涉及包括酸熱脂環(huán)酸桿菌的基因和/或蛋白的基因序列和/或蛋白序列。所包括的基因和蛋白是那些在蛋白的糖基化和/或翻譯后修飾中起作用的基因和蛋白。細胞內(nèi)酶活性在本質(zhì)上可能是嗜熱的和/或嗜酸的并且類似基因的一般實例描述于文獻中?；颉⑿蛄?、酶以及因子的類別包括但不局限于表1列出的那些。表1與糖基化相關的酸熱脂環(huán)酸桿菌的基因和蛋白參照蛋白序列基因序列功能RAACOO164SEQIDNO:1SEQIDNO:2糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC00517SEQIDNO:18SEQIDNO:19糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC00650SEQIDNO:35SEQIDNO:36糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC00991SEQIDNO:52SEQIDNO:53糖基轉(zhuǎn)移酶RAACOl110SEQIDNO:69SEQIDNO:70糖基轉(zhuǎn)移酶RAACO1166SEQIDNO:86SEQIDNO:87UDPβ-葡萄糖磷酸轉(zhuǎn)移酶RAACO1167SEQIDNO:103SEQIDNO:104糖基轉(zhuǎn)移酶RAACO1170SEQIDNO:120SEQIDNO:121糖基轉(zhuǎn)移酶RAACO1248SEQIDNO:137SEQIDNO:138糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC01348SEQIDNO:154SEQIDNO:155糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC01377SEQIDNO:171SEQIDNO:172糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC01611SEQIDNO:188SEQIDNO:189糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC01612SEQIDNO:205SEQIDNO:206糖基轉(zhuǎn)移酶RAACO1926SEQIDNO:222SEQIDNO:223糖基轉(zhuǎn)移酶RAACO1998SEQIDNO:239SEQIDNO:240糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC02011SEQIDNO:256SEQIDNO:257多萜醇磷酸甘露糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC02381SEQIDNO:273SEQIDNO:274糖基轉(zhuǎn)移酶RAAC02421SEQIDNO:290SEQIDNO:291糖基轉(zhuǎn)移酶RAACOl168SEQIDNO:309SEQIDNO:310糖基轉(zhuǎn)移酶本發(fā)明涉及如下核苷酸序列包括酸熱脂環(huán)酸桿菌的基因組的分離和/或純化的核苷酸序列，選自SEQIDNo:2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240,257,274,291和310或其片段之一的序列。本發(fā)明同樣涉及分離的和/或純化的核苷酸序列，其特征在于它們包括以下至少之一:a)SEQIDNo:2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、對0、257、274491和310或其片段之一的序列的至少一個的核苷酸序列；b)與如在a)中所定義的核苷酸序列同源的核苷酸序列；c)與如在a)或b)中所定義的核苷酸序列互補的核苷酸序列和它們對應的RNA的核苷酸序列；d)能夠在嚴格條件下與如在a)、b)或c)中所定義的序列雜交的核苷酸序列；e)包含如在a)、b)、c)或d)中所定義的序列的核苷酸序列；以及f)由例如在a)、b)、c)、d)或e)中所定義的核苷酸序列修飾的核苷酸序列。根據(jù)本發(fā)明，核苷酸、多核苷酸或核酸序列將被理解為既表示處于單體和二聚體(所謂的串聯(lián))形式的雙鏈或單鏈DNA又表示所述DNA的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。本發(fā)明的方面涉及這樣的核苷酸序列可能從分離方法起始或從基因工程的方法起始對其進行分離、純化或部分地純化，所述分離方法諸如例如離子交換層析、通過基于分子大小排除、或通過親和性、或者可替代的基于不同溶劑溶解度的分級分離技術，所述基因工程的方法諸如擴增、克隆和亞克隆，對于本發(fā)明的序列來說，由載體攜帶是可能的。根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的核苷酸序列片段將被理解為指定的酸熱脂環(huán)酸桿菌基因組的任何核苷酸片段，并且以非限制性實例的方式可以包括所起源的序列的長度為至少8、12、20、25、50、75、100、200、300、400、500、1000或更長的連續(xù)核苷酸。根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的核苷酸序列的特定片段將被理解為指定的酸熱脂環(huán)酸桿菌基因組的任何核苷酸片段，所述片段在與酸熱脂環(huán)酸桿菌基因組序列的對應片段進行比對或比較之后具有至少一個不同性質(zhì)的核苷酸或堿基。在本發(fā)明的意義上的同源的分離和/或純化的核苷酸序列被理解為表示與根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列的堿基具有至少一定百分比同一性的分離的和/或純化的核苷酸序列，所述百分比同一性為至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,99.5%、99·6%或99.7%，這個百分比是純統(tǒng)計的，并且在這兩條核苷酸序列任意長度和全長之間分布差異是可能的。在本發(fā)明的意義上的特定的同源核苷酸序列被理解為表示具有如以上所定義的特定片段的至少一條核苷酸序列的同源核苷酸序列。所述“特定的”同源序列可以包括例如與代表酸熱脂環(huán)酸桿菌的基因組的變體的基因組序列或其片段的序列相對應的序列。因而這些特定的同源序列能夠?qū)谂c酸熱脂環(huán)酸桿菌菌株內(nèi)的突變有關的變異，并且特別對應于至少一個核苷酸的截短、替換、缺失和/或增添。所述同源序列能夠同樣地對應于與遺傳密碼的簡并性有關的變異。術語“序列同源性的程度或百分比”是指如在本申請中所定義的“在最優(yōu)比對之后在兩條序列之間序列同一性的程度或百分比”。兩條氨基酸或核苷酸序列當如以下文所述進行最大對應比對時，如果在這兩條序列中的氨基酸或核苷酸殘基的序列是相同的，則稱它們是“相同的”。在兩種(或多種)肽或多核苷酸之間的序列比較通常是通過比較在區(qū)段或“比較窗口”的兩條最佳比對的序列的序列而進行，以識別和比較局部區(qū)域的序列相似性。通過Smith和Waterman，Ad.App.Math2:482(1981)的局部同源性算法，通過Neddleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48:443(1970)的同源性比對算法,通過Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85:2444(1988)的搜索相似性方法，通過這些算法的計算機化實施(在Wisconsin遺傳學軟件包，GeneticsComputerGroup(GCG),575ScienceDr.,Madison,Wis.中的GAP、BESTFIT、FASTA、和TFASTA)，或者通過目測可進行用于比較的序列的最優(yōu)比對。通過比較在比較窗口的兩條最佳比對的序列來確定“序列同一性的百分比”(或者同一性的程度)，其中在所述比較窗口中的肽或多核苷酸序列的部分可以包括相比于參考序列(它不包括增添或缺失)的增添或缺失(即空位)，以用于這兩條序列的最優(yōu)比對。百分比的計算是通過確定相同的氨基酸殘基或核酸堿基在兩個序列中都存在的位置的數(shù)目以得出匹配的位置的數(shù)目，用匹配的位置的數(shù)目除以比較窗口中的位置的總數(shù)目，并且將結果乘以100以得出序列同一性的百分比。以上所給出的序列同一性的定義是將被本領域熟練技術人員使用的定義。所述定義本身不需要任何算法的幫助，所述算法僅對實現(xiàn)序列的最優(yōu)比對而不是序列同一性的計算有幫助。從以上所給出的定義，由此可知，對于兩條比較序列之間的序列同一性存在定義明確的唯一值，所述值對應于最佳比對或最優(yōu)比對所獲得的值。BLASTN或BLASTP"BLAST2序列”為在網(wǎng)站worldwideweb.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html中可得到的軟件，并且被發(fā)明人以及通常被熟練技術人員習慣性地用于比較和確定兩條序列之間的同一性，在上述軟件中，依賴于要比較的序列長度的空位值(gapcost)被所述軟件直接選擇(即對于長度大于85的替換矩陣BL0SUM-62，為11.2)。本發(fā)明的序列的互補核苷酸序列被理解為表示如下的任何DNA:其核苷酸與本發(fā)明的序列的核苷酸是互補的，并且其方向是顛倒的(反義序列)。在嚴格條件下與根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列雜交被理解為表示以如下方式所選擇的溫度和離子強度的條件下的雜交所述方式為使得溫度和離子強度允許保持在互補DNA的兩個片段之間的雜交。通過舉例說明的方式，目的是限定以上所述的核苷酸片段的雜交步驟的非常嚴格性的條件有利地如以下所述。在65°C的優(yōu)選溫度，在SSC緩沖液，對應于0.15MNaCl和0.05M檸檬酸鈉的IxSSC的存在下進行雜交。洗滌步驟例如可以如下進行在室溫下的hSSC，接著是用在65°C下的hSSC,0.5%SDS；2x0.5xSSC，0.5%SDS的兩次洗滌；在65°C各持續(xù)10分鐘。使用例如42°C的溫度在&SSC緩沖液的存在下的中度嚴格性條件，或者例如37°C的溫度在^SSC緩沖液存在下的較低嚴格性的條件，分別要求在這兩條序列之間雜交的總體上較少量的互補。用于具有近似350個堿基大小的多核苷酸的以上所述的嚴格雜交條件將由本領域的熟練技術人員根據(jù)Sambrook等人，1989的教導進行修改以適合于更大或更小尺寸的寡核苷酸。允許獲得根據(jù)本發(fā)明的同源序列的方法中可被用作引物或探針的那些核苷酸序列是在根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的核苷酸序列中，這些方法如聚合酶鏈式反應(PCR)、核酸克隆和測序是本領域熟練技術人員公知的。在根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的核苷酸序列中，在允許存在SEQIDNO:2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240、257、274、291和310、其片段之一、或如以下所定義的要被鑒別的其變體之一的方法中可被用作引物或探針的那些核苷酸序列被再次優(yōu)選?？梢岳缤ㄟ^特異性擴增如PCR，或者在用適當?shù)南拗菩詢?nèi)切酶消化根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列之后獲得根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列片段，這些方法具體在Sambrook等人，1989年的著作中描述。同樣能夠根據(jù)本領域的普通技術人員所熟知的方法通過化學合成獲得此類代表性片段。修飾的核苷酸序列將被理解為表示根據(jù)本領域熟練技術人員公知的技術通過誘變獲得的任何核苷酸序列，并且包含關于根據(jù)本發(fā)明的正常序列的修飾，例如在多肽表達的調(diào)節(jié)序列和/或啟動子序列中的突變，特別地導致所述多肽的表達率的改變或?qū)е聫椭浦芷诘恼{(diào)節(jié)。修飾的核苷酸序列同樣將被理解為表示編碼如下文所定義的修飾的多肽的任何核苷酸序列。本發(fā)明涉及包括酸熱脂環(huán)酸桿菌的分離的和/或純化的核苷酸序列的核苷酸序列，其特征在于所述分離的和/或純化的核苷酸序列選自序列SEQIDNO:2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240、257、274、291和310或其片段之一。本發(fā)明的實施方案同樣涉及分離的和/或純化的核苷酸序列，其特征在于它們包含選自以下的核苷酸序列:a)SEQIDNo.2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、M0、257、274、291和310或它們的片段之一或它們的片段之一的核苷酸序列的至少一個；b)如在a)中所定義的序列的特定片段的核苷酸序列；c)與在a)或b)中所定義的序列具有至少80%同一性的同源核苷酸序列；d)如在a)、b)或c)中所定義的序列的互補核苷酸序列或與如在a)、b)或c)中所定義的序列相對應的RNA的序列；以及e)由如在a)、b)、c)或d)中所定義的序列修飾的核苷酸序列。在根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的核苷酸序列之中的是SEQIDNo.13-17,30-34、47-51、64-68、81-85、98-102、115-119、132-136、149-153、166-170、183-187、200-204、217-221、234-238、251-255、268-272、285-289、302-306、319-323、336-340、353-357,370-374,387-391,404-408,421-425,438-442,455-459,472-476,489-493,506-510,523-527,540-544,557-561,574-578,591-595,608-612,625-629,642-646,659-663、676-680、693-697、710-714、727-731、744-748、761-765、778-782和321-325或其片段的核苷酸序列，和對SEQIDNo.2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223,240,257,274,291和310或其片段的序列的至少一個具有至少80%、81%、82%、83%、84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,99.5%,99.6%、或99.7%的同一性的同源性的任何其他分離的和/或純化的核苷酸序列。所述同源序列能夠包括例如與酸熱脂環(huán)酸桿菌的基因組序列對應的序列。以相同的方式，這些特定的同源序列能夠?qū)谂c酸熱脂環(huán)酸桿菌菌株內(nèi)的突變有關的變異并且特別地對應于至少一個核苷酸的截短、替換、缺失和/或增添。正如對于本領域的任何普通的技術人員是明顯的，用標準技術和例如BLAST的公共可得到的計算機程序，此類同源物容易被創(chuàng)造和識別。如此，應該認為以上所指的每種同源物在此被列出并且被完全地描述。本發(fā)明的實施方案包括由根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列或其片段所編碼的分離的和/或純化的多肽，所述片段的序列由片段表示。氨基酸序列與能夠根據(jù)SEQIDNO:2,19,36,53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240、257、274、291和310的序列的至少一個的三個可能的讀碼框中之一編碼的分離的和/或純化的多肽相對應。本發(fā)明的實施方案同樣涉及分離的和/或純化的多肽，其特征在于它們包括選自氨基酸序列SEQIDNo.1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273,290和309或其片段之一的至少一個的多肽。氨基酸序列SEQIDNo.8-12、25-29、42-46、59-63、76-80、93_97、110-114、127-131、144-148、161-165、178-182、195-199、212-216、229-233、246-250、263-267、280-284、297-301、314-318、33卜335、348-352、365-369、382-386、399-403、416-420、433-437,450-454,467-471,484-488,501-505,518-522,535-539,552-556,569-573,586-590,603-607,620-624,637-641,654-658,671-675,688-692,705-709,722-726,739-743,756-760,773-777以及316-320或其片段的分離的和/或純化的多肽，或者是與SEQIDNO:1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290和309或其片段的序列的至少一個具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.6%或99.7%的同一性的同源性的任何其他分離的和/或純化的多肽是在根據(jù)本發(fā)明的實施方案的分離的和/或純化的多肽中。正如對于本領域的任何普通的技術人員將是明顯，用標準技術和例如BLAST的公共可得到的計算機程序，這些同源物容易被創(chuàng)造和識別。如此，應該認為以上所指的每種同源物在此被列出并且被完全描述。本發(fā)明的實施方案還涉及多肽，其特征在于它們包括選自以下的多肽a)根據(jù)本發(fā)明的氨基酸序列的多肽的至少5個氨基酸的特定片段；b)與如在a)所定義的多肽同源的多肽；c)如在a)或b)中所定義的多肽的特定的生物學活性片段；以及d)由在a)、b)或c)中所定義的多肽修飾的多肽。在本說明書中，術語多肽、肽和蛋白質(zhì)是可互換的。在本發(fā)明的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的多肽可以是糖基化的、聚乙二醇化的和/或其他方式的翻譯后修飾的。在另外的實施方案中，糖基化、聚乙二醇化、和/或其他的翻譯后修飾可以在體內(nèi)或體外發(fā)生，和/或可以使用化學技術來實施。在另外的實施方案中，任何糖基化、聚乙二醇化和/或其他的翻譯后修飾可能是N-連接的或0-連接的。在本發(fā)明的實施方案中，任何一種根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的多肽在等于或高于約25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、和/或95攝氏度的溫度可以具有酶活性或功能活性，和/或在等于、低于或高于8、7、6、5、4、3、2、1、和/或0的pH條件下可以具有酶活性或功能活性。在本發(fā)明的其他實施方案中，糖基化、聚乙二醇化和/或其他的翻譯后修飾可能為根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的多肽所需要，所述多肽在等于或低于8、7、6、5、4、3、2、1、和/或0的pH、或者在等于或高于約25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、和/或95攝氏度的溫度具有酶活性或功能活性。本發(fā)明的方面涉及如下多肽其通過從自然來源中純化而被分離或獲得，否則通過遺傳重組或可替代地通過化學合成獲得，并且它們可因此包含如將在下文所描述的非天然氨基酸。根據(jù)本發(fā)明的實施方案的“多肽片段”被理解為指定的包含至少5個連續(xù)的氨基酸、優(yōu)選10個連續(xù)的氨基酸或者15個連續(xù)的氨基酸的多肽。在本發(fā)明中，特定的多肽片段被理解為指定的由根據(jù)本發(fā)明的特定片段核苷酸序列所編碼的連續(xù)的多肽片段。“同源多肽”將被理解為指定的具有關于天然多肽的某些修飾的多肽，具體而言，所述修飾為例如至少一個氨基酸的缺失、增添或替換，截短，延長，嵌合體融合，和/或突變。在所述同源多肽之中，其氨基酸序列與根據(jù)本發(fā)明的多肽的氨基酸的序列具有至少80%或90%同源性的多肽是優(yōu)選的?！疤囟ǖ耐炊嚯摹睂⒈焕斫鉃橹付ǖ娜缫陨纤x的并具有根據(jù)本發(fā)明的多肽的特定片段的同源多肽。在替換的情況中，一個或多個連續(xù)或者非連續(xù)的氨基酸被“等同的”氨基酸代替。表述“等同的”氨基酸在此是針對指定的能夠被堿基結構的氨基酸之一替換、然而沒有實質(zhì)上改變對應肽的生物活性的任何氨基酸，并且這樣使得它們將被下文定義。正如對于本領域的任何普通的技術人員將是明顯的，用標準的分子生物學技術和例如BLAST的公共可得到的計算機程序，此類替換容易被創(chuàng)造和識別。如此，應該認為以上所指的每種替換在此被列出并且被完全描述。在氨基酸序列SEQIDNO.1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290和309中的此類替換的實例可以包括氨基酸序列SEQIDNo.8-12、25-29、42-46、59-63、76-80、93-97、110-114、127-131、144-148、161-165、178-182、195-199、212-216、229-233、246-250、263-267、280-284、297-301、314-318、331-335、348-352、365-369、382-386、399-403、416-420、433-437、450-454、467-471、484-488,501-505,518-522,535-539,552-556,569-573,586-590,603-607,620-624,637-641、654-658、671-675、688-692、705-709、722-726、739-743、756-760、773-777以及316-320的那些分離的和/或純化的多肽。這些等同的氨基酸可以通過依賴于它們與所替換的氨基酸的結構同源性或依賴于能夠被執(zhí)行的在不同多肽之間生物活性的比較測驗的結果來確定。通過非限制性實例的方式，將提及能夠被執(zhí)行而不導致對應的修飾的多肽的生物活性的廣泛改變的替換的可能性，例如亮氨酸被纈氨酸或異亮氨酸代替，天冬氨酸被谷氨酸代替，谷氨酰胺被天冬酰胺代替，精氨酸被賴氨酸代替等等，在相同條件下反向替換自然地是可想象的。在另外的實施方案中，替換被限制為在具有相似的識別的酶活性的其他蛋白中不保守的氨基酸中的替換。例如，本領域任何普通技術人員可比對在相似的生物體中有相同功能的蛋白，并且確定哪些氨基酸在那種功能的蛋白中是一般保守的。可用來產(chǎn)生這樣的比對的程序的一個實例是由與NCBI提供的數(shù)據(jù)庫結合的wordlwideweb.charite.de/bioinf/strap/.此類多肽的實例可以包括但不限于那些在氨基酸序列SEQIDNo.8-12,25-29、42-46、59-63、76-80、93-97、110-114、127-131、144-148、161-165、178-182、195-199、212-216、229-233、246-250、263-267、280-284、297-301、314-318、331-335、348-352,365-369,382-386,399-403,416-420,433-437,450-454,467-471,484-488,501-505,518-522,535-539,552-556,569-573,586-590,603-607,620-624,637-641,654-658、671-675、688-692、705-709、722-726、739-743、756-760、773-777以及316—320中發(fā)現(xiàn)的多肽。因此，根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，可以在具有那種功能的蛋白中一般保守的位置制造替換或突變。在另外的實施方案中，核酸序列可以被突變或替換以使得它們編碼的氨基酸是未改變的(簡并性替換和/或突變)，和/或被突變或替換以使得任何生成的氨基酸替換或突變發(fā)生在具有那種功能的蛋白中一般保守的位置。此類核酸序列的實例包括但不限于在SEQIDNo.13-17、30-34、47-51、64-68、81-85、98-102、115-119、132-136、149-153、166-170、183-187、200-204、217-221、234-238、251-255、268-272、285-289、302-306,319-323,336-340,353-357,370-374,387-391,404-408,421-425,438-442,455-459,472-476,489-493,506-510,523-527,540-544,557-561,574-578,591-595,608-612,625-629,642-646,659-663,676-680,693-697,710-714,727-731,744-748,761-765,778-782以及321-325的或其片段的核酸序列中發(fā)現(xiàn)的核酸序列。特定的同源多肽同樣對應于由如以上所定義的由特定的同源核苷酸序列所編碼的多肽，并且因此在本定義中包括突變的多肽或與可以在酸熱脂環(huán)酸桿菌中存在的變體相對應的多肽，以及特別地與至少一個氨基酸殘基的截短、替換、缺失和/或增添相對應的多肽。根據(jù)本發(fā)明的實施方案的“多肽的特定的生物學活性片段”將被具體理解為指定的特定的多肽片段，如以上所定義那樣，具有根據(jù)本發(fā)明的多肽的至少一個特征。在某些實施方案中，所述肽能夠表現(xiàn)作為表1列出的蛋白類型的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的實施方案的多肽片段能夠與酸熱脂環(huán)酸桿菌中天然存在的分離或純化的片段相對應，或者與能夠通過蛋白水解酶如胰蛋白酶、或糜蛋白酶或膠原酶或通過化學試劑如溴化氰(CNBr)對所述多肽的切割而獲得的片段相對應。此類多肽片段同樣能夠就如通過化學合成、從根據(jù)本發(fā)明的表達載體轉(zhuǎn)化的宿主中容易地制備，所述表達載體包含允許表達所述片段的核酸，所述片段被置于適當?shù)恼{(diào)節(jié)元件和/或表達元件的控制之下。根據(jù)本發(fā)明的實施方案的多肽的“修飾的多肽”被理解為指定的通過將在以下描述的遺傳重組或化學合成而獲得的具有關于正常序列的至少一個修飾的多肽。這些修飾或許能夠或許不能夠?qū)μ禺愋院?或活性的起源、或結構構象的起源、定位、和根據(jù)本發(fā)明的多肽的膜插入的能力的起源的氨基酸有影響。因此，產(chǎn)生具有等同的、提高的或降低的活性以及等同的、更窄的或更寬的特異性的的多肽是可能的。在所述修飾的多肽中，有必要提及如下多肽其中多達5個或更多個氨基酸能夠被修飾、在N-端或C-端的末端被截短、或者甚至被缺失或增添。允許對待說明的真核細胞或原核細胞的所述調(diào)控的方法是本領域普通技術人員公知的。同樣被很好地理解的是使用編碼所述修飾的多肽的核苷酸序列用于所述調(diào)控例如通過根據(jù)本發(fā)明并且在以下描述的載體將是可能的。前述的修飾的多肽可以通過使用組合化學獲得，在所述組合化學中，在模型、細胞培養(yǎng)物或微生物上測驗多肽之前系統(tǒng)地改變多肽的部分例如以選擇最具活性或具有尋找的特性的化合物是可能的。化學合成同樣具有能夠利用非天然氨基酸或非肽鍵的優(yōu)點。因此，為了提高根據(jù)本發(fā)明的多肽的壽命持續(xù)時間，利用非天然氨基酸例如D形式或其他的氨基酸同源物例如特別是含硫形式可能是令人感興趣的。最后，將根據(jù)本發(fā)明的多肽的結構、其特定的或修飾的同源形式整合到多肽類型或其他類型的化學結構中將是可能的。因此，提供在N端和C端的末端不被蛋白酶識別的分子可能是令人感興趣的。編碼根據(jù)本發(fā)明的多肽的核苷酸序列同樣是本發(fā)明的部分。本發(fā)明同樣涉及可作為引物或探針使用的核苷酸序列，其特征在于所述序列選自根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列。被很好地理解的是本發(fā)明在各種實施方案中同樣涉及由核苷酸序列編碼的酸熱脂環(huán)酸桿菌的特定的多肽，所述多肽能夠通過從天然多肽中純化、通過遺傳重組或通過化學合成通按本領域熟練技術人員公知以及如以下具體描述的方法而獲得。以相同的方式，直接針對由所述核苷酸序列所編碼的所述特定多肽的標記或未標記的單克隆抗體或多克隆抗體也被本發(fā)明包括。本發(fā)明的實施方案另外涉及根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列作為引物或探針來檢測和/或擴增核酸序列的用途。因此，可使用根據(jù)本發(fā)明的實施方案的核苷酸序列來擴增核苷酸序列，特別是通過PCR技術(聚合酶鏈式反應)(Erlich，1989；Innis等人，1990；Rolfs等人，1991；以及White等人，1997)。這些寡脫氧核糖核苷酸或寡核糖核苷酸引物有利地具有至少8個核苷酸、優(yōu)選至少12個核苷酸、以及甚至更優(yōu)選的至少20個核苷酸的長度?？梢杂欣夭捎冒泻怂岬钠渌麛U增技術作為PCR的替代。本發(fā)明的核苷酸序列、特別是根據(jù)本發(fā)明的引物同樣能夠在擴增靶核酸的其他方法中采用，例如TAS技術(基于轉(zhuǎn)錄的擴增系統(tǒng))，由Kwoh等人在1989年描述；3SR技術(自主序列復制)，由Guatelli等人在1990年描述；NASBA技術(基于核酸序列的擴增)，由Kievitis等人在1991年描述；SDA技術(鏈置換擴增)(Walker等人，1992)；TMA技術(轉(zhuǎn)錄介導的擴增)。本發(fā)明的多核苷酸還能夠在用作探針的核酸的擴增或修飾技術中采用，例如LCR技術(連接酶鏈式反應)，由Landegren等人在1988年描述并且由Barany等人在1991年改進，所述技術采用熱穩(wěn)定連接酶；RCR技術(修復鏈式反應)，由Segev在1992年描述；CPR技術(循環(huán)探針反應)，由Duck等人在1990年描述；用Q-β復制酶的擴增技術，由Miele等人在1983年描述并且特別地由Chu等人在1986年、Lizardi等人在1988年改進，然后由Burg等人以及Mone等人在1996年改進。在待檢測的靶多核苷酸可能是RNA例如一種mRNA的情況中，借助根據(jù)本發(fā)明的至少一種引物采用擴增反應之前或者借助本發(fā)明的至少一種探針采用檢測步驟之前，使用逆轉(zhuǎn)錄酶類型的酶以便從包含在所述生物樣品中的RNA獲得cDNA是可能的。獲得的cDNA將因此用作在根據(jù)本發(fā)明的擴增或檢測步驟中所采用的一種或多種引物或者一種或多種探針的靶。將以這樣的方式選擇所述檢測探針使得它與靶序列或從靶序列中產(chǎn)生的擴增子雜交。通過序列的方式，這樣一種探針將有利地具有至少12個核苷酸的序列、特別地至少20個核苷酸的序列以及優(yōu)選地至少100核苷酸的序列。本發(fā)明的實施方案還包括可作為根據(jù)本發(fā)明的探針或引物使用的核苷酸序列，其特征在于它們用一種放射性化合物或非放射性化合物標記。所述未標記的核苷酸序列可以直接作為探針或引物使用，盡管所述序列普遍用一種放射性同位素(32P、35S、3H、125I)或用一種非放射性分子(生物素、乙酰氨基芴、地高辛、5-溴脫氧尿苷、熒光黃素)標記以獲得可用于許多應用的探針。核苷酸序列的非放射性標記的實例描述于例如法國專利號78.10975中，或者被Ureda等人或Sanchez-Pescador等人在1988年描述。在后一種情況中，使用在專利FR-M22956和FR-2518755中所述的標記方法中的也將是可能的。雜交技術能夠以各種方式進行(Matthews等人，1988)。最普遍的方法包括將細胞的核酸提取物固定在支持體(如硝酸纖維素、尼龍、聚苯乙烯)上，并且包括在定義明確的條件下固定的靶核酸與探針一起孵育。在雜交后，清除過量的探針并且通過適當方法(與所述探針相關的放射活性、熒光或酶活性的測量)檢測形成的雜交分子。本發(fā)明在各種實施方案中同樣包括根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列，其特征在于它們被共價或非共價地固定在支持體上。根據(jù)利用依據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列的另一個有利方式，后者能夠固定在支持體上使用并且可因此用來通過特異性雜交捕獲從待測驗的生物樣品中獲得的靶核酸。如果必要，將所述固相支持體從所述樣品中分離，然后在第二探針即用一種可容易檢測的元素標記的所謂的檢測探針的幫助下檢測在所述捕獲探針與所述靶核酸之間所形成的雜交復合物。本發(fā)明的另一方面是用于序列的克隆和/或表達的載體，其特征在于它包含根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列。根據(jù)本發(fā)明的載體特征在于它們包含允許所述核苷酸序列在確定的宿主細胞中整合、表達和/或分泌的元件，它們同樣是本發(fā)明的部分。所述載體那么可以包含啟動子、翻譯起始和終止的信號以及適當?shù)霓D(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)域。載體能穩(wěn)定地保持在所述宿主細胞中，并且能夠任選地具有指定所述翻譯的蛋白分泌的特殊的信號?？梢愿鶕?jù)所用的宿主細胞的功能來選擇這些不同的元件。為此目的，可以將根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列插入到所選宿主內(nèi)的自主復制載體或所選宿主的整合載體中。將根據(jù)本領域熟練技術人員目前使用的方法來制備此類載體，并且將自其產(chǎn)生的克隆通過標準方法可能引入到適當?shù)乃拗髦?，所述標準方法諸如例如脂質(zhì)轉(zhuǎn)染、電穿孔和熱激。根據(jù)本發(fā)明的載體是例如質(zhì)?；虿《緛碓吹妮d體。用于表達本發(fā)明的多肽的載體的一個實例是桿狀病毒。這些載體對于轉(zhuǎn)化宿主細胞以便克隆或表達本發(fā)明的核苷酸序列而言是有用的。本發(fā)明同樣包括被根據(jù)本發(fā)明的一種載體轉(zhuǎn)化的宿主細胞。這些細胞可以通過將已插入到如以上所定義的載體中的核苷酸序列引入到宿主細胞中、然后在允許復制和/或表達所述轉(zhuǎn)染的核苷酸序列的條件下培養(yǎng)所述細胞來獲得。所述宿主細胞可以選自原核或真核系統(tǒng)，諸如例如細菌細胞(Olins和Lee，1993)；同樣還有酵母細胞(Βικ:1Λ01Ζ，1993)；以及植物細胞，例如擬南芥；以及動物細胞，特別是哺乳動物細胞(Edwards和Aruffo，1993)的培養(yǎng)物，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞；同樣還有其中利用應用桿狀病毒的方法是可能的昆蟲的細胞，例如sf9昆蟲細胞(Luckow，1993)。本發(fā)明的實施方案同樣涉及包含所述根據(jù)本發(fā)明的所述轉(zhuǎn)化的細胞之一的生物。表達酸熱脂環(huán)酸桿菌的一種或多種基因或基因的部分的根據(jù)本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因生物的獲得，可以根據(jù)本領域熟練技術人員公知的方法如通過病毒或非病毒轉(zhuǎn)染，在例如大鼠、小鼠或兔中進行。在具有普遍存在性或者對一種組織類型選擇性的強啟動子的控制下，通過轉(zhuǎn)染多個拷貝的所述基因獲得表達一種或多種所述基因的轉(zhuǎn)基因生物是可能的。通過以下獲得轉(zhuǎn)基因生物同樣將是可能的在胚細胞株中的同源重組，將這些細胞株轉(zhuǎn)移到胚，在生殖線水平選擇這些受感染的嵌合體，并且使所述嵌合體生長。根據(jù)本發(fā)明的轉(zhuǎn)化細胞和轉(zhuǎn)基因生物在用于制備重組多肽的方法中是可利用的?，F(xiàn)今，通過基因工程、使用由根據(jù)本發(fā)明的表達載體所轉(zhuǎn)化的細胞或者使用根據(jù)本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因生物相對大量地生產(chǎn)重組多肽是可能的。用于制備重組形式的本發(fā)明的多肽的方法的特征在于它們采用了根據(jù)本發(fā)明的載體，和/或由根據(jù)本發(fā)明的載體所轉(zhuǎn)化的細胞，和/或包含根據(jù)本發(fā)明的所述轉(zhuǎn)化的細胞之一的轉(zhuǎn)基因生物，這些方法本身包含在本發(fā)明中。如在此使用的“轉(zhuǎn)化”和“轉(zhuǎn)化的”涉及將核酸引入細胞中，無論是原核的還是真核的。進一步，如在此使用的“轉(zhuǎn)化”和“轉(zhuǎn)化的”不需要涉及生長控制或生長失調(diào)。在用于制備重組形式的本發(fā)明的多肽的所述方法之中，采用載體和/或由所述載體轉(zhuǎn)化的細胞和/或包含所述轉(zhuǎn)化的細胞之一的轉(zhuǎn)基因生物的制備方法，包含根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列，所述核苷酸序列編碼酸熱脂環(huán)酸桿菌的多肽。根據(jù)本發(fā)明的變體可以包括產(chǎn)生與“載體”蛋白相融合的重組多肽(嵌合蛋白)。這個系統(tǒng)的優(yōu)點是它可以允許重組產(chǎn)物的穩(wěn)定和/或蛋白水解的減少，在體外復性過程中溶解度的增加，和/或當融合伙伴對特定配體具有親和性時純化的簡化。更具體地說，本發(fā)明涉及用于制備本發(fā)明的多肽的方法，包括以下步驟a)在允許表達根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列的重組多肽的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的細胞；b)如果需要的話，回收所述重組多肽。當用于制備本發(fā)明的多肽的方法采用根據(jù)本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因生物時，所述重組多肽就從所述生物中被提取出來。本發(fā)明還涉及能夠通過如之前所描述的本發(fā)明的方法獲得的多肽。本發(fā)明還包括用于制備合成多肽的方法，其特征在于它使用根據(jù)本發(fā)明的多肽的氨基酸序列。本發(fā)明同樣涉及通過根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的合成多肽。根據(jù)本發(fā)明的多肽同樣能夠通過在肽合成領域中常規(guī)的技術制備。這種合成可以在均相溶液中或在固相中進行。例如，可以借助于由Houben-Weyl在1974年所描述的在均相溶液中的合成技術。這種合成方法包括按所需順序?qū)B續(xù)氨基酸進行兩個兩個地連續(xù)縮聚，或者包括按適當順序?qū)χ靶纬刹⑶乙寻瑤讉€氨基酸的氨基酸和片段、或可替代地之前以這種方式制備的幾個片段進行縮聚，應當理解的是有必要事先保護由這些氨基酸或片段所攜帶的所有的反應性官能團，除了一端的胺官能團和另一端的羧基之外或者反之亦然，根據(jù)在肽合成中公知的方法，所述胺官能團和羧基在正常情況下必須參與肽鍵的形成，特別是在活化羧基官能團之后。還可以借助于由Merrifield所描述的技術。根據(jù)Merrifield方法，為了制備肽鏈，借助于非常多孔的聚合樹脂，鏈的第一C端氨基酸被固定在所述樹脂上。這種氨基酸通過它的羧基被固定在樹脂上并且它的胺官能團受到保護。這樣將要形成所述肽鏈的氨基酸被一個接一個地固定在已形成并連在樹脂上的肽鏈部分的氨基上，所述氨基每次都事先被脫保護。當已經(jīng)形成整個的所述希望肽鏈時，將形成肽鏈的不同氨基酸的保護基團清除，并在酸的幫助下將所述肽從所述樹脂中分離。本發(fā)明另外涉及雜合多肽，所述雜合多肽具有根據(jù)本發(fā)明的至少一種多肽和能夠在人或動物中誘導免疫反應的多肽的序列。有利地，所述抗原決定簇是這樣的它能夠誘導體液反應和/或細胞反應。對于這樣的決定簇來說，包括糖基化、聚乙二醇化、和/或其他方式的翻譯后修飾的形式的根據(jù)本發(fā)明的多肽將是可能的，使用所述多肽目的在于獲得能夠誘導直接針對多個表位的抗體的合成的免疫原性組合物。這些雜合分子可以部分地被形成根據(jù)本發(fā)明的多肽載體分子或其片段，所述分子或其片段與可能的免疫原性部分特別是白喉毒素、破傷風毒素、乙型肝炎病毒的表面抗原(專利FR7921811)、脊髓灰質(zhì)炎病毒的VPl抗原或者任何其他病毒或細菌的毒素或抗原的表位有關。用于合成雜合分子的方法包括在基因工程中用于構建編碼對所尋找的多肽序列的雜合核苷酸序列的方法。例如，有利地引用由Minton在1984年描述的用于獲得編碼融合蛋白的基因的技術是可能的。編碼雜合多肽和根據(jù)本發(fā)明的雜合多肽的所述雜合核苷酸序列特征在于它們是通過表達所述雜合核苷酸序列而獲得的重組多肽，它們同樣是本發(fā)明的一部分。本發(fā)明同樣包括載體，其特征在于它們包含所述雜合核苷酸序列之一。由所述載體轉(zhuǎn)化的宿主細胞、包含所述轉(zhuǎn)化的細胞之一的轉(zhuǎn)基因生物以及使用所述載體、所述轉(zhuǎn)化的細胞和/或所述轉(zhuǎn)基因生物來制備重組多肽的方法同樣是本發(fā)明的一部分。根據(jù)本發(fā)明的多肽、以下所述的根據(jù)本發(fā)明的抗體以及根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列，可以有利地在用于在能夠包含酸熱脂環(huán)酸桿菌的樣品中檢測和/或鑒定酸熱脂環(huán)酸桿菌的方法中采用。按照根據(jù)本發(fā)明的多肽、抗體以及核苷酸序列的特異性，將使用的這些方法具體能夠檢測和/或鑒定酸熱脂環(huán)酸桿菌。根據(jù)本發(fā)明的多肽可有利地被用于在能夠包含酸熱脂環(huán)酸桿菌的樣品中檢測和/或鑒定酸熱脂環(huán)酸桿菌的方法，其特征在于它包括以下步驟a)將這份樣品與根據(jù)本發(fā)明的多肽或其片段之一相接觸(在允許所述多肽與可能存在于所述生物樣品中的抗體之間的免疫反應的條件下)；b)顯示可能形成的抗原抗體復合物。任何常規(guī)方法可被用來對可能形成的抗原抗體復合物進行檢測。通過舉例的方式，優(yōu)選的方法帶來作用為根據(jù)通過免疫熒光的ELISA技術的免疫酶促方法或放射免疫方法(RIA)或其等同方法。因此，本發(fā)明同樣涉及根據(jù)本發(fā)明的、借助充分的標記如酶促、熒光的或放射性的類型標記的多肽。此類方法包括例如以下步驟將根據(jù)本發(fā)明的確定量的多肽組合物放在微滴定板的孔中，向所述孔中加入遞增稀釋度的血清或不同于之前所定義的必須被分析的生物樣品，孵育微滴定板，向微滴定板的孔中加入直接針對豬免疫球蛋白標記了的抗體，這些抗體已借助酶進行了標記，所述酶選自能夠水解底物改變底物至少在確定的波長例如在^Onm發(fā)光的吸收的酶，通過與對照試驗進行比較來檢測水解的底物的量。根據(jù)本發(fā)明的多肽允許制備單克隆抗體或多克隆抗體，這些抗體的特征在于它們特異性地識別根據(jù)本發(fā)明的多肽。有利的是，根據(jù)由Kohler和Milstein在1975年描述的技術從雜交瘤制備所述單克隆抗體是可能的。例如，通過用與所述免疫反應的佐劑相關聯(lián)的、根據(jù)本發(fā)明的多肽或DNA免疫動物特別是小鼠，然后在已事先固定了用作抗原的多肽的親和柱上純化包含在免疫了的動物血清中特異性抗體來制備所述單克隆抗體是可能的。根據(jù)本發(fā)明的多克隆抗體也可以通過在已事先固定了用作抗原的多肽的親和柱上純化包含在動物血清中的抗體來制備，所述動物通過免疫的方式受到酸熱脂環(huán)酸桿菌或者根據(jù)本發(fā)明的多肽或片段攻擊。本發(fā)明同樣涉及單克隆或多克隆抗體或者它們的片段、或者嵌合抗體，其特征在于它們能夠特異性識別根據(jù)本發(fā)明的多肽。對于本發(fā)明的抗體來說，用與之前對本發(fā)明的核酸探針所述相同的方式如酶的、熒光的或放射性類型的標記來標記它們同樣是可能的。本發(fā)明另外涉及用于在樣品中檢測和/或鑒定酸熱脂環(huán)酸桿菌的方法，其特征在于它包括以下步驟a)將所述樣品與根據(jù)本發(fā)明的單克隆或多克隆抗體相接觸(在允許所述抗體與可能存在于所述生物樣品中的酸熱脂環(huán)酸桿菌的多肽之間免疫反應的條件下)；b)顯示可能形成的抗原抗體復合物。本發(fā)明同樣涉及用于在樣品中檢測和/或鑒定酸熱脂環(huán)酸桿菌的方法，其特征在于它采用根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列。更具體而言，本發(fā)明涉及用于在樣品中檢測和/或鑒定酸熱脂環(huán)酸桿菌的方法，其特征在于它包括以下步驟a)如果需要的話，從待分析的樣品中分離DNA；b)借助根據(jù)本發(fā)明的至少一種引物或一對引物特異性擴增所述樣品的DNA；c)顯示擴增產(chǎn)物。例如，這些可以利用根據(jù)本發(fā)明的核酸探針通過分子雜交技術來檢測。這種探針將有利地用非放射性元素(冷探針)或放射性同位素標記。出于本發(fā)明的目的，“生物樣品的DNA”或“包含在生物樣品中的DNA”將被理解為表示在所考慮的生物樣品中存在的DNA或可能在逆轉(zhuǎn)錄酶類型的酶對所述生物樣品中存在的RNA作用后所獲得的cDNA。本發(fā)明的另外的實施方案包括一種方法，其特征在于它包括以下步驟a)將根據(jù)本發(fā)明的核苷酸探針與生物樣品相接觸，如果需要，包含在所述生物樣品中的DNA在允許所述探針與所述樣品的DNA雜交的條件下之前已變得容易雜交；b)顯示在所述核苷酸探針與所述生物樣品的DNA之間所形成的雜交體。本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的一種方法，其特征在于它包括以下步驟a)將固定在根據(jù)本發(fā)明的支持體上的核苷酸探針與生物樣品相接觸，如果需要所述樣品的DNA在允許所述探針與所述樣品的DNA雜交的條件下之前已變得容易雜交；b)將在支持體上固定的所述核苷酸探針與包含在生物樣品的DNA之間所形成的雜交體，如果需要在將沒有與所述探針雜交的所述生物樣品的DNA清除后，與根據(jù)本發(fā)明的標記了的核苷酸探針相接觸；c)顯示在步驟b)中所形成的新的雜交體。根據(jù)之前所定義的檢測和/或鑒定的方法的有利的實施方案，其特征在于，在步驟a)之前，首先借助根據(jù)本發(fā)明的至少一種引物擴增所述生物樣品中的DNA。方法的實施方案包括用第二多肽糖基化或翻譯后修飾第一多肽，所述第二多肽選自由對SEQIDNo.1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290和309具有至少90%的序列同一性的多肽所組成的組。方法的另外的實施方案包括調(diào)節(jié)蛋白的穩(wěn)定性、溶解性、降解性、活性特征和/或第一多肽的分泌的方法，所述方法包括通過第二多肽來糖基化或翻譯后修飾所述第一多肽，所述第二多肽選自由對SEQIDNO:1、18、35、52、69、86、103、120、137、巧4、171、188、205、222、239、256、273、290和309具有至少90%的序列同一性的多肽所組成的組。方法的另外的實施方案包括將產(chǎn)生或編碼一種重組的、純化的、和/或分離的核苷酸序列的細胞和/或一種重組的、純化的和/或分離的多肽放在包括等于或高于約25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90和/或95攝氏度的溫度和/或等于、低于和/或高于8、7、6、5、4、3、2、1和/或0的pH的環(huán)境中，所述核苷酸序列包括選自由以下組成的組的核苷酸序列對SEQIDNo:2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、對0、257、274、四1和310的序列中的至少一個具有至少90%的序列同一性的核苷酸序列；所述多Jft選自由對SEQIDNo.1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290和309的序列中的至少一個具有至少90%的序列同一性的多肽所組成的組。本發(fā)明提供了已被遺傳處理具有改變的產(chǎn)生表達蛋白的能力的細胞。特別的，本發(fā)明與革蘭氏陽性微生物相關，例如具有感興趣蛋白的提高表達的桿菌種類，其中一種或多種染色體基因被失活，和/或其中一種或多種染色體基因已經(jīng)從所述桿菌染色體中刪除。在另外一些實施方案中，一種或多種天然的染色體區(qū)域已經(jīng)從相應的野生型桿菌宿主染色體中刪除。在另外的實施方案中，所述桿菌是脂環(huán)酸桿菌屬的某個種或者是酸熱脂環(huán)酸桿菌。在另外的實施方案中，在等于或高于約25、30、；35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、和/或95攝氏度的溫度和/或在等于、低于和/或高于8、7、6、5、4、3、2、1、和/或0的pH時糖基化和/或翻譯后修飾一種多肽的方法，是通過一種重組的、純化的、和/或分離的核苷酸序列和/或一種重組的、純化的和/或分離的多肽實施的，所述核苷酸序列包括選自由以下組成的組的核苷酸序列對SEQIDNO:2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、對0、257、274、四1和310的序列的至少一個具有至少90%的序列同一性的核苷酸序列，所述多肽選自由對SEQIDNo.1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290和309的序列中的一個具有至少90%的序列同一性的多肽所組成的組。在本發(fā)明的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的任何一種分離的和/或純化的多肽在等于或高于約25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、和/或95攝氏度的溫度下可以具有酶活性或功能活性，和/或在等于或低于和/或高于8、7、6、5、4、3、2、1、和/或0的pH下可以具有酶活性或功能活性。在本發(fā)明的其他實施方案中，糖基化、聚乙二醇化和/或其他的翻譯后修飾可能為根據(jù)本發(fā)明的分離的和/或純化的多肽所需要，所述多肽在等于或低于8、7、6、5、4、3、2、1、和/或0的pH、或者在等于或高于約25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、和/或95攝氏度的溫度具有酶活性或功能活性。在以下用作說明的實施例中對本發(fā)明進行了另外詳細的描述。盡管所述實施例可能僅代表本發(fā)明的選擇的實施方案，但應該理解以下實施例是用作說明的而非限制。實施例實施例1使用來自酸熱脂環(huán)酸桿菌的核苷酸和氨基酸序列的糖基化在SEQIDNO:2、19、36、53、70、87、104、121、138、155、172、189、206、223、240、257、274、291和310中提供了從酸熱脂環(huán)酸桿菌中分離的并且分別編碼SEQIDN0:l、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、