《生物技術(shù)一》實(shí)驗(yàn)教案

第第頁(yè)《生物技術(shù)一》實(shí)驗(yàn)教案蚌埠醫(yī)學(xué)院

《生物技術(shù)一》試驗(yàn)教案2022/2022學(xué)年第二學(xué)期

選用教材醫(yī)用生物化學(xué)試驗(yàn)〔自編，3版〕

生物化學(xué)試驗(yàn)〔上海交通高校出版社〕授課老師夏俊

職稱教授

授課專業(yè)2022級(jí)生物科學(xué)本科

教研室檢驗(yàn)系生物化學(xué)與分子生物學(xué)

蚌埠醫(yī)學(xué)院教案

2022-2022年度第二學(xué)期

老師姓名：職稱：系〔部〕：生物科學(xué)系教研室：試驗(yàn)中心

授課對(duì)象：08生物本科專業(yè)生物班級(jí)授課時(shí)間：2022年3月4日

蚌埠醫(yī)學(xué)院教案

2022-2022年度第二學(xué)期

老師姓名：職稱：系〔部〕：生物科學(xué)系教研室：試驗(yàn)中心

蚌埠醫(yī)學(xué)院教案

2022-2022年度第二學(xué)期

老師姓名：職稱：系〔部〕：生物科學(xué)系教研室：試驗(yàn)中心

授課對(duì)象：08生物本科專業(yè)生物班級(jí)授課時(shí)間：2022年3月4日

復(fù)習(xí)舊課：

新課導(dǎo)言：細(xì)胞培育概念和意義

細(xì)胞培育是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)討論中最常用的手段之一。分為原代培育和傳代培育兩種。

體獵取組織或器官的一部分進(jìn)行培育。

剛剛從活體組織分別出來(lái)，

狀態(tài)。這一方法可為討論生物體細(xì)胞生長(zhǎng)，代謝，繁殖提供有力的手段，同時(shí)也為以后傳代培育制造條件。舉例：細(xì)胞各種生理活動(dòng)如增殖的討論

講授新課：

試驗(yàn)九：胎鼠細(xì)胞原代培育

織

塊培育法和消化培育法；

械

細(xì)

胞傳代培育、細(xì)胞純化和冷凍保存等試驗(yàn)提供材料。

二、主要器材與試劑

培育箱〔調(diào)整至

手術(shù)器械、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī)、水浴箱〔

〔一〕細(xì)胞培育的分類啟發(fā)式提問

細(xì)胞培育是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)討論中最常用的手段之一?？?/p>

分為原代培育和傳代培育兩種。

〔二〕細(xì)胞原代培育的原理

原代培育：是徑直從生物體獵取的細(xì)胞、組織或器官的

一部分進(jìn)行培育；由于剛從活體組織分別出來(lái)，故更接

近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)。這一方法可為討論生物體細(xì)

胞生長(zhǎng)，代謝，繁殖提供有力的手段，同時(shí)也為以后傳

代培育制造條件。

〔三〕胰酶消化法原理

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶〔常

用胰蛋白酶〕、螯合劑〔常用EDTA〕或機(jī)械方法處理，

分散成單細(xì)胞，置合適的培育基中培育，使細(xì)胞得以生

存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培育。

25分鐘四、內(nèi)容與操作

〔一〕組織塊徑直培育法

1、將孕鼠拉頸椎致死，取胎鼠帶入超凈臺(tái)內(nèi)。

2、超凈臺(tái)內(nèi)，將孕鼠子宮剪開取胚胎。

3、用小鑷子撕破胎膜，取出胎鼠，用PBS洗滌3次。

4、將胚胎轉(zhuǎn)移到另一裝有PBS的平皿中，用手術(shù)剪將

其

剪成小塊〔1mm3〕，再用PBS液洗三次。

5、將組織塊轉(zhuǎn)移到培育瓶，貼附瓶壁。翻轉(zhuǎn)此壁朝上，

將培育液加至瓶中，培育液勿接觸組織塊。

6、37℃靜置3-5小時(shí)，輕輕翻轉(zhuǎn)培育瓶，使組織浸入培

養(yǎng)液中〔勿使組織漂起〕，37℃繼續(xù)培育。

〔二〕、酶消化分別細(xì)胞培育法

原理：在組織塊培育法基礎(chǔ)上，經(jīng)各種酶〔常用胰蛋白

酶與膠原酶〕處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培育基中

培育。

1、將孕鼠拉頸椎致死，取胎鼠帶入超凈臺(tái)內(nèi)。

2、超凈臺(tái)內(nèi)，將孕鼠子宮剪開取胚胎。

3、用小鑷子撕破胎膜，取出胎鼠，用PBS洗滌3次。

4、將胚胎轉(zhuǎn)移到另一裝有PBS的平皿中，用手術(shù)剪將

其

剪成小塊〔1mm3〕，再用PBS液洗三次。

5、視組織塊量加入5-6倍0.25%胰酶液，37℃中消化

20-40分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，使細(xì)胞分別。

6、加入3-5ml培育液以終止胰酶消化作用。

7、靜置5-10分鐘，使未分散的組織塊下沉，取懸液加

入

到離心管中。

8、1000rpm，離心10分鐘，棄上清液。

9、加入培育液l—2ml〔視細(xì)胞量〕，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

10、將細(xì)胞調(diào)整到5105/ml左右，轉(zhuǎn)移至25ml細(xì)胞

培

養(yǎng)瓶中，37℃下培育。

80分鐘〔三〕操作演示同學(xué)分組，進(jìn)入無(wú)菌操作室詳細(xì)操作。

老師巡察指導(dǎo)

五考前須知

1、操作前，提前將操作間和超凈工作臺(tái)內(nèi)紫外燈打開，

消毒殺菌30分鐘。

2、進(jìn)操作間前要洗手，進(jìn)入超凈臺(tái)后手要用75%酒精

或

0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。

3、點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰四周進(jìn)行。

4、手不能在開蓋的消毒物品上方活動(dòng)。

5、凡在超凈臺(tái)外操作的步驟，各器皿需用蓋子或橡皮

塞，

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2022-2022年度第二學(xué)期

老師姓名：職稱：系〔部〕：生物科學(xué)系教研室：試驗(yàn)中心

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