母羊地方流行性流產(chǎn)補體結(jié)合試驗操作規(guī)程

母羊地方流行性流產(chǎn)補體結(jié)合試驗操作規(guī)程效份視勻，4℃16h~18h感作，取出后37℃水浴30##+一 #一一一#溶溶溶效價效份視勻，4℃16h～18h感作，取出后37℃水浴30##+一一#一 一#溶溶溶7結(jié)果判定7.1在最后一次37℃水浴(或汽浴)30min后，立即進行試驗結(jié)果判定。7.2各組對照為如下結(jié)果時試驗方成立，否則應重復試驗：——被檢血清抗補體對照：完全溶血(一);——陽性血清加抗原對照：完全抑制溶血(#);—陰性血清加抗原對照：完全溶血(一);——抗原抗補體對照：完全溶血(一);——溶血素對照；完全溶血(一);—生理鹽水對照；完全抑制溶血(#)7.3判定標準；血清效價以50%溶血(++)為判定終點。被檢血清效價；——1:4(+++)判為陰性：—-1:4(++)判為可疑；重復試驗仍為可疑，則判為陽性。23567134567一一一一一一一3#+ #+一 溶溶溶溶溶溶注：敏化紅組胞系由1%公綿羊紅細胞懸液加等量的2個工作單位的溶血(規(guī)范性附錄)1%綿羊紅細胞懸液的制備B.1頸靜脈采取成年健康公綿羊血液，以常規(guī)方法脫纖后，按1:1加入紅細胞保存液，混勻后分裝成3000r/min離心5min,按紅細胞泥容量加生理鹽水配成1%紅細胞懸液。B.2紅細胞保存液配方：葡萄糖20.5g,氧化鈉4.2g,檸檬酸三的8g,檸檬酸0.55g,燕餾水加至(規(guī)范性附錄)溶血素效價滴定C.1先將溶血素1:100稀釋(0.2mL含甘油的溶血素加9.8mL生理鹽水),按表C.1稀釋成不同倍數(shù)，再按表C.2操作。表C.1溶血素稀釋123456789912345678111111111表C.2溶血素效價測定12356789000一一一一一一一+#一#C.2以完全溶血的溶血素最高稀釋倍數(shù)為一個溶血單位，表C.2所示為7000倍，正式試驗時，使用兩個溶血素單位，則本例溶血素稀釋倍數(shù)為7000÷2-3500倍。(規(guī)范性附錄)抗原、陽性血清效價滴定方法D.1取80支試管，排成縱橫各9排的方陣(第9排缺1管)。D.2抗原和陽性血清分別從1:8～1:512作倍比稀釋，陰性血清作1:4稀釋，設抗原、血清和生理鹽水對照。D.3每管按不同稀釋度的要求加入陽性血清各0.1mL,抗原對照組一排不加血清，而用0,1mL.生理鹽水代替。D.4每管再按不同稀釋度的要求，各加入不同稀釋倍數(shù)的抗原0.1ml,血清對照不加抗原，面用0.1ml.生理鹽水代替。D.5每管中加入0.2ml.含2單位補體。D.6搖勻，置4℃冰箱感作16h~18h,次日取出放37℃水洛30min。D.7每管加入敏化紅細胞0.2mL。D.B混勻，置37℃水浴30min后，取出靜置2h~3h.判定結(jié)果。D.9效價判定；能與最高稀釋度的陽性血清呈現(xiàn)完全抑制溶血(#)反應的最高抗原稀釋度，即為抗原效價(一個工作量)如表D.1所示，抗原效價為1:128,陽性血清效價為1:256(一個血清工作量)。表D