微生物的簡單染色和革蘭氏染色

細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌

制片和簡單染色

革蘭氏染色法

微生物的簡單染色和革蘭氏染色第1頁

細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌

制片和簡單染色一、試驗?zāi)繕?biāo)學(xué)習(xí)掌握微生物制片及簡單染色基本

技術(shù)

初步了解細(xì)菌、放線菌、酵母菌及

霉菌形態(tài)特征和相互區(qū)分

鞏固顯微鏡操作技術(shù)及無菌操作

技術(shù)微生物的簡單染色和革蘭氏染色第2頁二、基本原理

染色前必須固定細(xì)菌

其目標(biāo)有二：

一是殺死細(xì)菌并使菌體粘附于玻片上

二是增加其對染料親和力

慣用有加熱和化學(xué)固定兩種方法

固定時盡可能維持細(xì)胞原有形微生物的簡單染色和革蘭氏染色第3頁

慣用堿性染料進行簡單染色，原因在于微生物細(xì)胞在堿性、中性及弱酸性溶液中常帶負(fù)電荷，而堿性染料在電離時，其分子染色部分帶正電荷，所以堿性染料染色部分很輕易與微生物細(xì)胞結(jié)合使其著色。常用作簡單染色染料有美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH下降時，細(xì)菌所帶

正電荷增加，此時可用伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅

等酸性染料染色微生物的簡單染色和革蘭氏染色第4頁三、試驗器材與試劑

菌種：牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)12-18小時枯草芽

胞桿菌和培養(yǎng)24h金黃色葡萄球菌

溶液和試劑：草酸銨結(jié)晶紫染液、齊氏石炭酸復(fù)紅染液、

呂氏堿性美藍(lán)染液、革蘭氏染色用碘液、

乳酸石炭酸棉藍(lán)染液

儀器和其它用具：雙層瓶、接種環(huán)、接種鏟、接種針、

平皿、U型玻璃棒、解剖針、

解剖刀、50%乙醇、20%甘油、高氏一號培養(yǎng)

基平板、馬鈴薯瓊脂薄層平板等微生物的簡單染色和革蘭氏染色第5頁四、操作步驟安全警示1.加熱固定時要使用載玻片夾子，以免燙傷。不要將

載玻片在火焰上燒烤時間過長，以免載玻片破裂2.使用燃料時防止粘到衣服上3.放線菌和霉菌制片要降低空氣流動，防止吸入孢子4.試驗完成后洗手，金黃色葡萄球菌為條件致病菌，

二甲苯為有毒物質(zhì)。微生物的簡單染色和革蘭氏染色第6頁細(xì)菌制片及簡單染色涂片：將玻片分成兩個區(qū)域，各滴上一小滴蒸餾水，再用無菌操

作方法挑菌少許枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌于玻

片水中，并充分混勻涂成薄膜干燥：將涂片置火焰高處微熱烘干或自然干燥固定：涂面朝上，經(jīng)過微火2-3次染色：玻片泠卻后加結(jié)晶紫滴于涂片上，覆蓋涂面染色1分鐘水洗：傾去染色液，用水自玻片一端輕輕沖洗至洗出水變無色為止

（注：勿沖去菌體）干燥：自然干燥，或用吸水紙吸干鏡檢：顯微鏡下觀察并統(tǒng)計微生物的簡單染色和革蘭氏染色第7頁四、試驗步驟1、菌落形態(tài)觀察：2、細(xì)菌簡單染色：3、細(xì)菌革蘭氏染色。注意：菌落顏色、濕度、形狀、大小、透明度、顏色、邊緣是否規(guī)則等特征。染色過程：涂片→干燥→固定→染色（1min）→水洗→干燥→鏡檢注意事項：涂片：取菌量不能太大干燥：自然干燥水洗：水流不能直接沖在涂菌處滴加少許水挑取菌體涂片干燥固定染色水洗干燥微生物的簡單染色和革蘭氏染色第8頁放線菌革蘭染色微生物的簡單染色和革蘭氏染色第9頁青霉顯微結(jié)構(gòu)微生物的簡單染色和革蘭氏染色第10頁曲霉顯微顯微結(jié)構(gòu)微生物的簡單染色和革蘭氏染色第11頁毛霉顯微結(jié)構(gòu)微生物的簡單染色和革蘭氏染色第12頁根霉顯微形態(tài)

微生物的簡單染色和革蘭氏染色第13頁電鏡下酵母微生物的簡單染色和革蘭氏染色第14頁

革蘭氏染色法一、目標(biāo)要求學(xué)習(xí)掌握革蘭氏染色法

了解革蘭氏染色原理

鞏固顯微鏡操作技術(shù)及無菌操

作技術(shù)微生物的簡單染色和革蘭氏染色第15頁二、基本原理（革蘭氏染色）革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理ChristainGram氏創(chuàng)建，可將細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最主要判別染色法革蘭氏染色法所以能將細(xì)菌分為革蘭氏陽性和

革蘭氏陰性，是由這兩類細(xì)菌細(xì)

胞壁結(jié)構(gòu)和組成不一樣決定微生物的簡單染色和革蘭氏染色第16頁微生物的簡單染色和革蘭氏染色第17頁三、試驗器材與試劑菌種：大腸桿菌16小時牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物

金黃色葡萄球菌16小時牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物溶液和試劑：革蘭氏染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘

液、95%乙醇、番紅復(fù)染液等儀器和其它用具：顯微鏡、雙層瓶、接種環(huán)、載玻片夾

子、無菌生理鹽水等微生物的簡單染色和革蘭氏染色第18頁本試驗為何采取上述生物？微生物的簡單染色和革蘭氏染色第19頁四、操作步驟革蘭氏染色法基本步驟是：

制片—初染（結(jié)晶紫）—媒染（碘液）—

脫色（95%乙醇或丙酮）—復(fù)染

(番紅)

—

鏡檢（油鏡）—混合涂片染色經(jīng)此方法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色

細(xì)菌為革蘭氏陽性菌；細(xì)菌染上復(fù)染劑顏

色(紅色)，該菌屬于革蘭氏陰性菌微生物的簡單染色和革蘭氏染色第20頁染色結(jié)果金黃色葡萄球菌革蘭氏染色結(jié)果微生物的簡單染色和革蘭氏染色第21頁染色結(jié)果大腸桿菌革蘭氏染色結(jié)果微生物的簡單染色和革蘭氏染色第22頁染色結(jié)果金黃色葡萄球菌和大腸桿菌混合菌樣革蘭氏染色結(jié)果微生物的簡單染色和革蘭氏染色第23頁附：油鏡使用雙目顯微鏡單目顯微鏡微生