脂類總量的測(cè)定專家講座

第七章脂質(zhì)測(cè)定

Chapter7DeterminationofLipidsinFood

教學(xué)要求：1、掌握幾個(gè)提取溶劑特點(diǎn)和適用范圍2、掌握樣品預(yù)處理方法3、掌握常見脂質(zhì)測(cè)定方法原理和操作。本章重點(diǎn)：脂質(zhì)測(cè)定方法本章難點(diǎn)：依據(jù)物料性質(zhì)不一樣選擇對(duì)應(yīng)溶劑進(jìn)行預(yù)處理

脂類總量的測(cè)定專家講座第1頁(yè)第一節(jié)概述一、脂類測(cè)定意義1、膳食組成主要成份供熱是糖、蛋白質(zhì)二倍以上，提供必需脂肪酸（亞油酸、亞麻酸、花生四稀酸），提供脂溶性Vit，磷脂、糖脂等。不足會(huì)影響正常生長(zhǎng)，發(fā)育、生殖、皮膚等，過量又有負(fù)作用，應(yīng)適量。2、有些食品生產(chǎn)質(zhì)量管理主要指標(biāo)缸頭蔬菜、面包、蛋糕、脫脂奶粉等。脂類總量的測(cè)定專家講座第2頁(yè)二、脂類組成飽和脂肪酸中性脂肪（90％）甘油三酸酯不飽和脂肪酸脂類硬脂酸類脂質(zhì)（10％）軟脂酸、磷脂、糖脂、脂溶性Vit、甾醇等。油酸脂類總量的測(cè)定專家講座第3頁(yè)三、脂肪化學(xué)性質(zhì)1、正常情況下，無臭、無味、不溶于水、溶于有機(jī)溶劑中。2、氫化、氧化、水解、皂化、乳化反應(yīng)。脂類總量的測(cè)定專家講座第4頁(yè)第二節(jié)

索氏抽提法測(cè)定食品中粗脂肪

一、幾個(gè)主要溶劑標(biāo)準(zhǔn)：相同相溶規(guī)律，進(jìn)行提取。1、乙醚沸點(diǎn)，34.6℃，標(biāo)準(zhǔn)分析法提取劑。約可飽和2%水分，含水乙醚會(huì)同時(shí)抽出糖分等非脂類成份，影響檢測(cè)準(zhǔn)確性。處理方法：樣品烘干或加脫水劑再提取。2、石油醚沸點(diǎn)30～60℃，允許樣品中含微量水分，提出物較靠近真實(shí)脂類。脂類總量的測(cè)定專家講座第5頁(yè)

總結(jié)：1、2兩種提取劑對(duì)結(jié)合脂類（磷脂、糖脂、脂蛋白質(zhì)等）無提取能力。3、氯仿—甲醇提取劑對(duì)結(jié)合脂提取效果好，尤其適于動(dòng)物類食品。4、水飽和正丁醇尤其適合于谷類食品。

二、樣品預(yù)處理目標(biāo)：絞碎、控溫和防化學(xué)改變。脂類總量的測(cè)定專家講座第6頁(yè)1、控制水分

方法：A、烘箱干燥；B、冷凍干燥法；C、加無水硫酸鈉。2、控制顆粒度大小

樣品加4～6倍海砂粉碎，效果好。3、破壞結(jié)合加硫酸或鹽酸或氨水，使非脂成份水解。脂類總量的測(cè)定專家講座第7頁(yè)三、索氏提取法〈經(jīng)典法〉1、原理利用脂肪能溶于有機(jī)溶劑性質(zhì)，在索氏抽提器中將樣品用無水乙醚或石油醚等溶劑重復(fù)萃取，提取樣品中脂肪后，蒸去溶劑所得物質(zhì)即為脂肪（粗脂肪）。2、適用范圍與特點(diǎn)

適于各類食品中脂肪含量測(cè)定，尤其適于脂肪含量較高，結(jié)合態(tài)脂類含量較少，能烘干磨細(xì)，不易吸潮結(jié)塊樣品測(cè)定。脂類總量的測(cè)定專家講座第8頁(yè)優(yōu)點(diǎn)；溶劑用量少，樣品不變質(zhì)，操作方便。

缺點(diǎn)：用時(shí)較長(zhǎng)。3、操作（谷、豆類）樣品研碎、半固體或液體樣品于沸水浴上蒸干——95～105℃烘干——5~10g裝入濾紙筒中（兩端復(fù)以脫脂棉）——放入提取筒中——裝好儀器——注入乙醚——小心加熱回流6～12h——回收乙醚——烘干、恒重。4、計(jì)算脂肪（%）=（m2－m1）/m×100脂類總量的測(cè)定專家講座第9頁(yè)脂類總量的測(cè)定專家講座第10頁(yè)脂類總量的測(cè)定專家講座第11頁(yè)

脂類總量的測(cè)定專家講座第12頁(yè)5、注意事項(xiàng)1）濾紙筒高度不能超出回流管，不然脂肪不能提凈。2）重復(fù)加熱可能會(huì)因脂類氧化而增重，質(zhì)量增加時(shí)，以增重前質(zhì)量作為恒重。3）對(duì)于糖類、碳水化合物含量較高樣品，可先用冷水處理以除去糖分，干燥后再提取脂肪。4）在揮發(fā)乙醚或石油醚時(shí)，切忌用直接火加熱，應(yīng)該用電熱套或電水浴等。放入烘箱前要全部驅(qū)除乙醚或石油醚。脂類總量的測(cè)定專家講座第13頁(yè)5）每小時(shí)回流6～12次為宜。6）冷凝管上端最好接一個(gè)氯化鈣干燥管或塞一團(tuán)干燥脫脂棉，以防空氣中水分進(jìn)入。7）濾紙筒一定要嚴(yán)密，但也不要包太緊。二、酸水解法1、原理將試樣與鹽酸溶液一起加熱進(jìn)行水解，使結(jié)合或包藏在組織里脂肪游離出來，再用有機(jī)溶劑提取脂肪，回收有機(jī)溶劑，即可得脂肪含量。脂類總量的測(cè)定專家講座第14頁(yè)2、適用范圍和特點(diǎn)不怕輕易吸潮結(jié)塊不易烘干樣品，不宜用于含有大量磷脂樣品，也不適于含糖高樣品。3、操作固體樣品約2g、液體樣品約10g于50mL大試管中——加8mL水混勻后再加10mL鹽酸——70～80℃水浴40～50分鐘——加10mL乙醇混勻——冷卻后移入100mL具塞量筒中——25mL乙醚分次洗試管一并移入量筒中——加塞振搖1分鐘、放氣、塞好、靜置10～20分鐘，用石油醚-乙醚等量混和液沖洗塞子和管口——吸出上清液于恒重錐形瓶中——加5mL乙醚于量筒中、振搖、靜置——吸出上清液于恒重錐形瓶中——回收乙醚——恒重。脂類總量的測(cè)定專家講座第15頁(yè)

4、說明與討論1）樣品須磨細(xì)，液體樣品需混合均勻，不然結(jié)合性脂肪不能充分提出。2）水解時(shí)應(yīng)預(yù)防水分損失，使酸濃度升高。3）加入乙醇可促進(jìn)脂肪球聚合，同時(shí)溶解一些碳水化合物、有機(jī)酸等。因乙醇可溶于乙醚，需加入石油醚降低乙醇在醚中溶解度，使乙醇溶解物殘留在水層，并使分層清楚。4）用等量乙醚及石油醚溶解殘留物并過濾，可去除黑色焦油狀雜質(zhì)，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

脂類總量的測(cè)定專家講座第16頁(yè)三、羅紫——哥特里氏法（堿性乙醚提取法）1、原理

利用氨一乙醇溶液破壞乳膠體性狀及脂肪球膜使非脂成份溶解于氨一乙醇溶液中，而脂肪游離出來，再用乙醚—石油醚提取出脂肪，蒸餾去除溶劑后，殘留物即為乳脂肪。2、適用范圍各種液狀乳及奶粉、奶油等能在堿性溶液中溶解乳制品，也適合用于豆乳或加水呈乳狀食品。脂類總量的測(cè)定專家講座第17頁(yè)3、操作樣品適量——60℃水10mL數(shù)次洗入抽脂瓶（或具塞量筒）中——1.25mL氨水充分混勻——60℃水浴中5min——振搖2min——加入10mL乙醇充分搖勻、冷水中冷卻——加入25mL乙醚振搖0.5min——加入25mL石油醚再振搖0.5min、靜置30min——讀取醚層體積——取一定量提取醚于恒重?zé)恐谢厥栈旌厦选獡]干混合醚后100～105℃烘箱中干燥1.5h——恒重。

4、計(jì)算脂肪含量（％）＝（m1-m0）/[m/(V1/V0)]×100脂類總量的測(cè)定專家講座第18頁(yè)5、注意事項(xiàng)1）若無抽脂瓶，可用100mL具塞量筒代替。2）加氨水后要充分混合均勻，不然影響下一步醚對(duì)脂肪提取。3）加入石油醚作用是降低乙醚極性，使乙醚與水不混溶。4）對(duì)已結(jié)塊乳粉，用本法測(cè)定會(huì)使結(jié)果偏低。5）加入乙醇作用是沉淀蛋白質(zhì)以預(yù)防乳化，并溶解醇溶性物質(zhì)，使其留在水中。脂類總量的測(cè)定專家講座第19頁(yè)四、巴布科克氏法和蓋勃法

1、原理用濃硫酸溶解乳中乳糖和蛋白質(zhì)等非脂成份，將牛奶中酪蛋白鈣鹽轉(zhuǎn)變成可溶性重硫酸酪蛋白，使脂肪球膜被破壞，脂肪游離出來，再利用加熱離心，使脂肪完全快速分離，直接讀取脂肪層數(shù)值，便可知被測(cè)乳含脂率。

2、適用范圍鮮乳及乳制品脂肪測(cè)定，不適于含糖多乳制品。

脂類總量的測(cè)定專家講座第20頁(yè)3、操作

牛乳17.6mL于乳脂瓶中17.5mL濃硫酸搖動(dòng)緩入（棕紫色）（1000r/mim）離心5min加80℃以上熱水至球部滿（1000r/mim）離心2分鐘加80℃以上熱水至2～3刻度處1000r/mim離心1min55～60℃水浴中5分鐘穩(wěn)定讀數(shù)。4、計(jì)算乳脂（%）=(X×0.9)/(17.6×1.032)×100脂類總量的測(cè)定專家講座第21頁(yè)4、蓋勃法乳脂計(jì)中加入10mL硫酸沿管壁加入混勻牛乳11mL加1mL異戊醇塞上橡皮塞、包好瓶口、振搖至凝塊完全溶解靜置幾min65～70℃水浴中5min調(diào)整橡皮塞使脂肪在刻度內(nèi)800～1000r/min離心5min65～70℃水浴中5分鐘馬上讀數(shù)。脂類總量的測(cè)定專家講座第22頁(yè)五、氯仿—甲醇（2：1）提取法

1、原理

試樣和CM混合液微沸，提取全部脂肪，濾除非脂成份，回收溶劑，殘留脂類用石油醚提取，蒸去石油醚后定量。2、適用范圍和特點(diǎn)

適合結(jié)合態(tài)脂類，尤其是磷脂含量高樣品（魚、肉、禽、蛋、大豆及其制品）。對(duì)高水分試樣測(cè)定更為有效。

脂類總量的測(cè)定專家講座第23頁(yè)3、測(cè)定方法提取過濾回收有機(jī)溶劑石油醚提?。o水硫酸鈉）離心移出并蒸除石油醚烘干、恒重。4、計(jì)算脂類（％）＝[（m2－m1）×2.5]/m×100六、牛奶脂肪測(cè)定儀介紹

MSC133型乳成份綜合分析儀，功效同MSC104，采取微機(jī)控制，為使用者提供極大方便。

脂類總量的測(cè)定專家講座第24頁(yè)七、折射率法含有高折射率溶劑溶解油脂后，混合液折射率與純?nèi)軇┫啾葘?huì)顯著降低，降低數(shù)值與油脂含量成正比。而且溶劑折射率與被測(cè)樣品折射率相差越大，測(cè)定誤差就越小?？捎脕頊y(cè)定油料中含油量，也可用于測(cè)定蔬菜制品、罐藏肉制品、魚及魚制品、巧克力、面食制品中脂肪含量。

特點(diǎn)：簡(jiǎn)便快速，適合于生產(chǎn)上使用，但準(zhǔn)確性差。脂類總量的測(cè)定專家講座第25頁(yè)第四節(jié)脂肪理化指標(biāo)測(cè)定一、脂肪酸價(jià)測(cè)定1、定義酸價(jià)：中和1g油脂中游離脂肪酸所需氫氧化鉀毫克數(shù)。2、原理油脂中游離脂肪酸與氫氧化鉀發(fā)生中和反應(yīng)，由氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗量可計(jì)算出油脂酸價(jià)。脂類總量的測(cè)定專家講座第26頁(yè)3、試劑脂類總量的測(cè)定專家講座第27頁(yè)4、操作方法脂類總量的測(cè)定專家講座第28頁(yè)5、計(jì)算酸價(jià)＝Vc×56.11/m6、注意事項(xiàng)1）酸價(jià)平行試驗(yàn)允許差不超出0.2。2）沒有標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鉀時(shí)候，也可用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉代替。3）試驗(yàn)中加入乙醇目標(biāo)是預(yù)防反應(yīng)中生成脂肪酸鉀鹽離解。4）假如樣品顏色過深，可適當(dāng)降低樣品量或增加中和混合試劑量。脂類總量的測(cè)定專家講座第29頁(yè)二、脂肪碘價(jià)測(cè)定1、碘價(jià)指100g油脂所吸收碘克數(shù)。2、原理在溴化鉀酸性溶液中，溴化鉀與不飽和脂肪酸起加成反應(yīng)，游離碘可用硫代硫酸鈉溶液滴定，從而計(jì)算出被測(cè)樣品中所吸收溴化鉀克數(shù)。3、試劑脂類總量的測(cè)定專家講座第30頁(yè)脂類總量的測(cè)定專家講座第31頁(yè)4、測(cè)定脂類總量的測(cè)定專家講座第32頁(yè)5、計(jì)算公式碘價(jià)＝[c（V1-V2）×0.1269]/m×100脂類總量的測(cè)定專家講座第33頁(yè)三、脂肪皂化價(jià)測(cè)定1、皂化價(jià)定義指1g油脂完全皂化時(shí)所需氫氧化鉀毫克數(shù)。2、原理油脂與氫氧化鉀乙醇溶液共熱時(shí)，發(fā)生皂化反應(yīng)，剩下堿可用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定，從而可計(jì)算出中和油脂所需氫氧化鉀毫克數(shù)。脂類總量的測(cè)定專家講座第34頁(yè)四、脂肪過氧化值測(cè)定1、過氧化值定義2、原理油脂氧化過程中產(chǎn)生過氧化物，當(dāng)與碘化氫反應(yīng)時(shí)析出碘，用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，計(jì)算過氧化值。脂類總量的測(cè)定專家講座第35頁(yè)3、試劑脂類總量的測(cè)定專家講座第36頁(yè)4、