抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓專家講座

第十一章抗生素類藥品分析抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第1頁

抗生素是指由微生物所產(chǎn)生、極微量即含有選擇性地抑制或殺滅其它微生物一類有機化合物。一、抗生素藥品特點

抗生素在低微濃度下即可對一些生物生命活動有特異抑制作用化學物質總稱。第一節(jié)概述1.生物合成（發(fā)酵）2.化學合成或半合成細菌放線菌真菌

抗生素藥品含有選擇性地抑制或殺滅其它微生物作用藥品?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第2頁控制抗生素質量復雜性*分子結構多不穩(wěn)定*發(fā)酵過程不易控制生產(chǎn)工藝復雜穩(wěn)定性差發(fā)酵液中含有各種無機鹽、脂肪、蛋白質、降解產(chǎn)物、色素、熱原、毒性物質*發(fā)酵過程易受污染*易降解療效↓

失效

毒副作用↑抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第3頁二、抗生素藥品質量分析（一）判別試驗1.理化法2.生物學法（1）化學法（2）儀器法抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第4頁例青霉素鈉Ch.P（）【判別】（1）取本品與已知含量青霉素適量，分別加水制成每1ml中約含50mg溶液，各取1ml，加入不少于200單位青霉素酶溶液1ml,在37℃滅活1小時后，取滅菌濾紙片，分別用上述溶液浸濕后，用濾紙吸去多出液體，置攤布金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]培養(yǎng)基上。在37℃培養(yǎng)約16小時后均無抑菌作用，而用同一方法檢驗未經(jīng)青霉素酶滅活溶液都有抑菌作用.抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第5頁（二）檢驗普通雜質、特殊雜質常增加“安全性檢驗”【檢驗】異常毒性熱原細菌內毒素降壓物質無菌抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第6頁例鹽酸四環(huán)素Ch.P（）【檢驗】酸度溶液澄清度相關物質干燥失重雜質吸光度熱原無菌抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第7頁（三）含量測定1.生物學方法以生物學方法或生化方法測定生理活性物質，并按效價單位（IU）計算測定方法抗生素微生物檢定法抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第8頁抗生素微生物檢定法以抗生素抑制微生物生長或殺死微生物能力作為衡量效價標準Ch.P→管碟瓊脂擴散法比濁法USP抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第9頁例磺芐西林鈉Ch.P（）【含量測定】精密稱取本品適量，用滅菌水制成每1ml中約含1000單位溶液，照抗生素微生物檢定法（附錄ⅪA）測定。1000磺芐西林單位相當于1mgC16H18N2O7S2?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第10頁例抗生素【含量測定】Ch.P（）

抗生素微生物檢定法（附錄ⅪA）

紅霉素、兩性霉素B、桿菌肽、硫酸多黏菌素B、硫酸慶大霉素、硫酸阿米卡星、硫酸卷曲霉素、硫酸核糖霉素、硫酸鏈霉素、磺芐西林鈉原料及制劑抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第11頁微生物檢定法優(yōu)點

*與臨床效果一致

*靈敏度高

*干擾物質少

*可用于未知藥品缺點

*操作繁瑣

*耗時

*準確度、精密度差抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第12頁以理化方法測定主藥含量，按有效物質質量計算測定方法優(yōu)點*準確度高*簡便快速缺點*不一定代表生物效價*易受雜質干擾*僅用于己知藥品2.理化方法抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第13頁Ch.P（）【含量測定】青霉素類滴定法UVHPLC法微生物檢定法頭孢菌素類HPLC法汞量法碘量法抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第14頁細菌

枯草菌真菌

青霉素類、頭孢類、

灰黃霉素放線菌

鏈霉素1.按產(chǎn)生菌分類三、抗生素分類廣譜

青霉素、頭孢類G+

紅霉素（金葡菌）

G-

卡那霉素、慶大霉素綠膿桿菌

阿莫西林2.按抗菌譜分類3.按作用機制分類抑制轉肽酶交聯(lián)方式

青霉素抑制蛋白質合成過程

紅霉素影響細胞膜通透性

多粘菌素4.按化學結構和性質分類β-內酰胺類多烯大環(huán)類氨基糖苷類多肽類四環(huán)素類苯烴胺類大環(huán)內酯類蒽環(huán)類等

抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第15頁第二節(jié)

-內酰胺類抗生素青霉素類青霉素鈉（鉀）氨芐西林（鈉）阿莫西林（鈉）普魯卡因青霉素頭孢菌素類頭孢氨芐頭孢羥氨芐頭孢拉啶頭孢噻吩鈉抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第16頁青霉素類頭孢菌素類一、結構與性質（一）結構氫化噻唑環(huán)氫化噻嗪環(huán)

-內酰胺環(huán)抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第17頁青霉素類頭孢菌素類123456712346578抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第18頁青霉素類母核6-氨基青霉烷酸（6-APA）

-內酰胺環(huán)酰胺側鏈酸性手性C抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第19頁青霉素G（芐青霉素）青霉素鉀KNa

青霉素鈉抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第20頁青霉素鉀（lidocainehydrochloride）青霉素鈉（Benzylpenicillinsodium）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第21頁氨芐西林（氨芐青霉素）（ampicillin）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第22頁阿莫西林（羥氨芐青霉素）（amoxicillin）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第23頁·普魯卡因青霉素（procainebenzylpenicillin）·抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第24頁磺芐西林鈉（sulbenicillinsodium）S抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第25頁頭孢菌素類母核7-氨基頭孢烷酸（7-ACA）酰胺側鏈

-內酰胺環(huán)酸性手性C抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第26頁頭孢氨芐（cefalexin）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第27頁頭孢羥氨芐（cefadroxil）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第28頁頭孢拉定（cefradine）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第29頁頭孢噻吩鈉（cefalotin）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第30頁（二）性質*與堿金屬成鹽易溶于水pKa=2.5～2.81.酸性羧基*與有機堿成鹽難溶于水抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第31頁難溶于水易溶于有機溶劑青霉素易溶于水難溶于有機溶劑K+青霉素鉀青霉素鈉溶解性抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第32頁2.旋光性（5%頭孢唑啉鈉溶液–18～–24°）手性C抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第33頁3.UV共軛體系抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第34頁抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第35頁4.不穩(wěn)定性水溶液不穩(wěn)定、易開環(huán)失效干燥純凈較穩(wěn)定

-內酰胺環(huán)四元環(huán)張力大酰胺鍵易水解不穩(wěn)定性原因抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第36頁溫度↑氧化劑（頭孢噻吩鈉水溶液25℃24h失活8%）（青霉素鈉水溶液30℃24h失活56%）Cu2+、Pb2+、Hg2+、Ag+抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第37頁青霉素降解反應青霉烯酸pH4pH2脫羧青霉噻唑酸H+△-CO2青霉素青霉噻唑酸OHˉHgCl2HgCl2△青霉二酸H+or醇青霉胺orHgCl2H+青霉醛＋H+△抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第38頁不一樣pH條件下青霉素鈉降解情況24℃0.41.4129233621812531.29.31.4半衰期(h)234567891011pH抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第39頁溫度對青霉素鈉穩(wěn)定性影響pH2，30′溫度℃52637↓%67797抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第40頁二、判別試驗（一）呈色反應1.羥肟酸鐵反應內酰胺OH-紅、棕、褐色Fe3+/3H+抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第41頁OH-Fe3+/3H+紅、棕、褐抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第42頁例磺芐西林鈉Ch.P（）【判別】（1）取本品約20mg，加水15ml溶解后，加鹽酸羥胺試液與氫氧化鈉試液各2ml，放置5分鐘后，加鹽酸溶液（1→100）3ml與三氯化鐵試液1ml，隨即振搖，即顯赤褐色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第43頁例頭孢哌酮Ch.P（）【判別】（1）取本品約10mg，加水2ml與鹽酸羥胺溶液[取34.8%鹽酸羥胺1份，醋酸鈉-氫氧化鈉溶液（取醋酸鈉10.3g與氫氧化鈉86.5g，加水溶解使成1000ml）1份，乙醇4份，混勻]3ml，振搖溶解后，放置5分鐘，加酸性硫酸鐵銨試液1ml,搖勻，顯紅棕色。抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第44頁2.類似肽鍵反應雙縮脲反應紫色開環(huán)，[H]抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第45頁例阿莫西林Ch.P（1995）【判別】（2）取本品約10mg，加水6ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，即顯紫色。例氨芐西林鈉Ch.P（1995）【判別】（1）取本品約10mg，加水6ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，即顯紫色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第46頁茚三酮反應△藍紫色抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第47頁例阿莫西林Ch.P（）【判別】（4）TLC法對照品法

顯色劑0.3%茚三酮-乙醇溶液（90℃加熱15分鐘）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第48頁3.其它呈色反應*與重氮苯磺酸鹽反應*與變色酸-硫酸反應*H2SO4-HNO3反應*與銅鹽反應抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第49頁1.K+、Na+火焰反應附錄ⅢK+火焰→紫色+0.1%四苯硼鈉+HAc→↓白（二）各種鹽反應Na+火焰→鮮黃色+醋酸氧鈾鋅→↓抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第50頁例青霉素鈉Ch.P（）【判別】（4）本品顯鈉鹽火焰反應（附錄Ⅲ）。例青霉素鉀Ch.P（）【判別】（3）本品顯鉀鹽火焰反應（附錄Ⅲ）?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第51頁2.重氮化-偶合反應芳香第一胺類反應普魯卡因青霉素重氮化紅色↓堿性β-萘酚（偶合）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第52頁例普魯卡因青霉素Ch.P（）【判別】（3）本品顯芳香第一胺類判別反應（附錄Ⅲ）?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第53頁3.沉淀反應堿金屬鹽溶于過量HCl或有機溶劑抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第54頁例青霉素鈉青霉素鉀Ch.P（）【判別】（2）取本品約0.1g，加水5ml溶解后，加稀鹽酸2滴，即生成白色沉淀；此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量鹽酸中溶解.抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第55頁（三）光譜法1.IR法

β-內酰胺環(huán)上羰基伸縮振動增強而向高波數(shù)方向位移抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第56頁例青霉素鈉Ch.P（）【判別】（2）本品紅外光吸收圖譜應與對照圖譜（光譜集222圖）一致。例青霉素鉀Ch.P（）【判別】（2）本品紅外光吸收圖譜應與對照圖譜（光譜集223圖）一致?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第57頁2.UV-Vis法樣品或分解產(chǎn)物抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第58頁青霉素V鉀268、2741.20~1.25頭孢唑林鈉272264~292頭孢氨芐262220~245頭孢噻肟鈉262400~440抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第59頁Cu2+pH3.8△△Cu2+抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第60頁（四）色譜法1.TLC法2.HPLC法對照品法比較Rf和斑點顏色比較tR抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第61頁例頭孢拉定Ch.P（）【判別】（1）取本品與頭孢拉定對照品適量,分別加水溶解并稀釋制成每1ml中約含6mg溶液.作為供試品溶液和對照品溶液，照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗，吸收上述兩種溶液各5

l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以0.1mol/L枸櫞酸溶液-0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液-丙酮（60:40:1.5）為展開劑，展開，于105℃加熱15分鐘后，檢視，供試品溶液所顯主斑點顏色與位置應與對照品溶液所顯主斑點顏色與位置相同?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第62頁例頭孢拉定Ch.P（）【判別】（2）在含量測定項下統(tǒng)計色譜圖中，供試品溶液主峰保留時間應與對照品溶液主峰保留時間一致。抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第63頁例

頭孢氨芐Ch.P（）【判別】（1）在含量測定項下統(tǒng)計色譜圖中，供試品溶液主峰保留時間應與對照品溶液主峰保留時間一致。

（2）本品紅外光吸收圖譜應與對照圖譜（光譜集1090圖）一致。

抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第64頁（五）微生物檢定法例青霉素鈉Ch.P（）【判別】（1）取本品與已知含量青霉素適量，分別加水制成每1ml中約含50

g溶液，各取1ml，加入不少于200單位青霉素酶溶液1ml，在37℃滅活1小時后，取滅菌濾紙片，分別用上述溶液浸濕后，用濾紙吸去多余液體，置攤布金色黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]培養(yǎng)基上，在37℃培養(yǎng)約16小時后均無抑菌作用，而用同一方法檢驗未經(jīng)青霉素酶滅活溶液都有抑菌作用。對照品對照法抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第65頁三、特殊雜質檢驗*高分子聚合物*吸光度雜質*相關物質*異構體抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第66頁例青霉素鈉【檢驗】青霉素聚合物例青霉素鉀【檢驗】青霉素聚合物例阿莫西林【檢驗】阿莫西林聚合物（青霉噻唑蛋白+青霉素、青霉噻唑多肽類）例頭孢他啶【檢驗】頭孢他啶聚合物例頭孢曲松鈉【檢驗】頭孢曲松聚合物例頭孢哌酮鈉【檢驗】頭孢哌酮聚合物抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第67頁例青霉素鈉Ch.P（）【檢驗】青霉素聚合物照分子排阻色譜法（附錄ⅤH）測定。填充劑葡聚糖凝膠G-10（40~120μm）流動相A0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0）[0.1mol/LNa2HPO4-0.1mol/LNaH2PO4(61:39)]

流動相B水

流速1.5ml/min檢測波長254nm抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第68頁例頭孢他啶Ch.P（）【檢驗】頭孢他啶聚合物照分子排阻色譜法（附錄ⅤH）測定。填充劑葡聚糖凝膠G-10（40~120μm）

流動相A含3.5%硫酸銨0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)[0.1mol/LNa2HPO4-0.1mol/LNaH2PO4(61:39)]

流動相B水

流速0.8ml/min檢測波長254nm抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第69頁例頭孢呋辛酯中異構體檢驗抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第70頁例頭孢氨芐中“相關物質”檢驗α-苯甘氨酸（對照品法）≤1%7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸(對照品法)≤1%其它雜質（高低濃度對比法）≤1%抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第71頁例青霉素鈉Ch.P（）

【檢驗】吸光度取本品，加水制成每1ml中含1.80mg溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅣA），在280nm波優(yōu)點測定吸光度，不得大于0.10；在264nm波優(yōu)點有最大吸收，吸光度應為0.80~0.88?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第72頁*β－內酰胺類不直接與碘反應*β－內酰胺類水解產(chǎn)物可與碘發(fā)生定量反應1.原理（一）碘量法（剩下碘量法）四、含量測定抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第73頁例注射用普魯卡因青霉素Ch.P（）【含量測定】取裝量差異項下內容物，精密稱取約0.12g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置碘瓶中，加1mol/L氫氧化鈉溶液1ml放置20分鐘，再加1mol/L鹽酸溶液1ml與醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH4.5）5ml,精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，搖勻，在20~25℃暗處放置20分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴定，抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第74頁近終點時加淀粉指示液，繼續(xù)滴定并強力振搖，至藍色消失；另精密量取供試品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，搖勻，在暗處放置20分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴定，作為空白。同時用青霉素鈉對照品同法測定作對照，算出供試品含量。抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第75頁2.討論酸↑

*Na2S2O3→SO2+S↓（1）弱酸性環(huán)境pH4.5*普魯卡因與碘在酸性條件下會產(chǎn)生復鹽↓堿↑抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第76頁（2）溫度24~26℃溫度↑

未水解供試品亦消耗碘（3）氧氣干擾碘瓶抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第77頁（4）反應時間*長時間放置使空氣氧化作用加強20′*反應20′后，耗碘量隨時間改變較小，可減小測定誤差?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第78頁（5）空白試驗A.消除樣品已降解產(chǎn)物干擾B.消除樣品中其它消耗碘雜質干擾C.消除碘揮發(fā)造成誤差以未經(jīng)水解樣品作空白測定抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第79頁（6）采取對照品平行測定A.可消除溫度、pH、操作、環(huán)境等條件影響B(tài).使本法測定結果與微生物檢定法一致抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第80頁例注射用普魯卡因青霉素Ch.P（）【含量測定】取裝量差異項下內容物，精密稱取約0.12g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置碘瓶中，加1mol/L氫氧化鈉溶液1ml放置20分鐘，再加1mol/L鹽酸溶液1ml與醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH4.5）5ml,精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，搖勻，在20~25℃暗處放置20分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴定，抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第81頁近終點時加淀粉指示液，繼續(xù)滴定并強力振搖，至藍色消失；另精密量取供試品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，搖勻，在暗處放置20分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴定，作為空白。同時用青霉素鈉對照品同法測定作對照，算出供試品含量?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第82頁（二）電位配位滴定法——汞量法*β－內酰胺類不直接與汞鹽反應*β－內酰胺類水解產(chǎn)物可與汞鹽發(fā)生定量反應1.原理抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第83頁水解水解青霉胺絡汞Ch.P（）青霉素鉀青霉素鈉苯唑西林鈉普魯卡因青霉素氯唑西林鈉抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第84頁NaOHpH4.6脫羧Hg(NO3)2pH4.62:1突躍11:1突躍2Hg(NO3)2pH4.6青霉胺絡汞抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第85頁青霉胺與硝酸汞發(fā)生絡合反應。先按2分子青霉胺與1分子汞離子百分比絡合，發(fā)生第一次滴定突躍，但突躍范圍很小，改變比較平緩，不宜用于做終點，繼續(xù)用硝酸汞滴定時，青霉胺分子與汞離子按1:1百分比絡合，生成穩(wěn)定絡合物——青霉胺絡汞，發(fā)生第二次滴定突躍。其突躍范圍較大，改變較急劇，宜于確定終點?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第86頁2.方法醋酸鹽緩沖液滴定水解pH4.6pH4.6滴定抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第87頁3.討論（1）電位法指示終點，以第二次滴定突躍為終點反應摩爾比1:1

（2）空白試驗

用未降解樣品測定（3）優(yōu)點

不需標準品抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第88頁例青霉素鈉Ch.P（）【含量測定】取本品約50mg，精密稱定，加水5ml溶解后，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，搖勻,放置15分鐘，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸鹽緩沖液（pH4.6）20ml及水20ml，搖勻，照電位滴定法（附錄ⅦA）,用鉑電極為指示電極，汞-硫酸亞汞電極為參比電極，在35~40℃，用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）遲緩滴定，（控制滴定過程約為15分鐘），不計第一個等當點，計算第二個等當點時消耗滴定液量?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第89頁每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg總青霉素（按C16H17N2NaO4S計算）。另取本品約0.5g，精密稱定，加水與上述醋酸鹽緩沖液各25ml，振搖使完全溶解，在室溫下,馬上用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）滴定，滴定終點判斷方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg降解物（按C16H17N2NaO4S計算）。每1mgC16H17N2NaO4S相當于1670青霉素單位。抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第90頁1.硫醇汞鹽法

降解，咪唑（1）原理催化劑青霉素族（三）紫外-分光光度法抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第91頁咪唑（降解）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第92頁2.討論（1）咪唑催化降解率高，且硫醇汞鹽穩(wěn)定（≥3h）

（2）側鏈有-NH2時，需加醋酐先將其乙?；蟛拍馨l(fā)生上述反應抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第93頁pH9咪唑抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第94頁例青霉素V鉀片Ch.P（）【含量測定】取本品10片（如為糖衣片則除去糖衣）,精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于青霉素V0.15g）置250ml量瓶中，加水150ml，振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5ml，置25ml量瓶中，加咪唑溶液至刻度，搖勻，置60℃水浴中加熱30分鐘，取出放冷至室溫，照分光光度法（附錄ⅣA）,在325nm波優(yōu)點測定吸收度；另取青霉素V對照品，同法測定，計算?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第95頁青霉素V鉀

C16H17N2O5SK

388.48576青霉素V

C16H18N2O5S

350.39964抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第96頁水解2.酸水解-銅鹽法JP青霉素族螯合物（不穩(wěn)定）λmax320~360nm（穩(wěn)定劑）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第97頁3.羥肟酸比色法USPJPβ-內酰胺類NaOH紅棕色H+抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第98頁（四）RP-HPLC法特點快速高效靈敏度高專屬性強重現(xiàn)性好一法多用(判別、檢驗、含測)Ch.P抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第99頁例頭孢克洛Ch.P（）

【含量測定】

填充劑C18

流動相磷酸二氫鉀溶液（pH3.4）-乙腈（92:8）

檢測波長254nm

對照品頭孢克洛、頭孢克洛δ-3-異構體（二者分離度應大于1.5）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第100頁例頭孢他啶【判別】【檢驗】頭孢他啶聚合物【含量測定】托西酸舒他西林【判別】【檢驗】相關物質【含量測定】阿莫西林【判別】【檢驗】相關物質、阿莫西林聚合物【含量測定】抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第101頁（五）生物樣品中β-內酰胺類抗生素分析色譜法，微生物法，放射免疫法抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第102頁例HPLC法測定人血漿中阿莫西林

填充劑YWGC18

流動相0.033mol/L磷酸緩沖液（pH7.2）-甲醇（85:15）檢測波長229nm

對照品阿莫西林內標替硝唑除蛋白HClO4抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第103頁抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第104頁第三節(jié)氨基糖苷類抗生素一、結構與性質（一）結構堿性環(huán)己多元醇抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第105頁鏈霉素（streptomycin）鏈霉胍鏈霉糖N-甲基葡萄糖胺（氨基糖）鏈霉雙糖胺抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第106頁巴龍霉素（paromomycin）脫氧鏈霉胺D-核糖D-葡萄糖胺（氨基糖）巴龍霉糖（氨基糖）巴龍胺巴龍二糖胺抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第107頁慶大霉素（gentamycin）（C復合物）（氨基糖）絳紅糖胺（氨基糖）加洛糖胺脫氧鏈霉胺抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第108頁慶大霉素C復合物

慶大霉素C1

R1、R2=CH3R3=H

慶大霉素C2

R1=CH3R2=R3=H

慶大霉素C1a

R1、R2、R3=H

慶大霉素C2a

R1=R2=HR3=CH3抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第109頁奈替米星（netilmicin）脫氧鏈霉胺（氨基糖）絳紅糖胺（氨基糖）加洛糖胺抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第110頁2.性質（1）溶解性與堿性溶解性

-OH水溶性堿性

-NH2可與酸成鹽臨床上多用硫酸鹽抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第111頁巴龍霉素鏈霉素抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第112頁慶大霉素奈替米星抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第113頁（2）旋光性手性C硫酸慶大霉素硫酸巴龍霉素硫酸卡那霉素50mg/ml水溶液抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第114頁（3）穩(wěn)定性鏈霉素pH5~7.5穩(wěn)定OH-N-甲基葡萄糖胺鏈霉糖OH-麥芽酚反應坂口反應反應抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第115頁坂口反應麥芽酚反應N-甲基葡萄糖胺反應抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第116頁（4）UV鏈霉素λmax=230nm抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第117頁（一）茚三酮反應α-氨基醇、羥基胺類△藍紫色二、判別試驗抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第118頁水合茚三酮α-氨基、伯胺一些羥基胺類酮式烯醇式+縮合抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第119頁例硫酸慶大霉素Ch.P（）【判別】（1）取本品約5mg，加水溶解后，加0.1%茚三酮水飽和正丁醇溶液1ml與吡啶0.5ml，在水浴中加熱5分鐘，即顯紫藍色。例硫酸小諾霉素Ch.P（）【判別】（1）取本品約5mg，加水溶解后，加0.1%茚三酮水飽和正丁醇溶液1ml與吡啶0.5ml，在水浴中加熱5分鐘，即顯藍紫色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第120頁（二）Molisch反應水解或蒽酮抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第121頁例硫酸卡那霉素Ch.P（）【判別】（1）取本品約1mg，加水2ml溶解后，加0.2%蒽酮硫酸溶液4ml，在水浴中加熱15分鐘，冷卻，即顯藍紫色。例硫酸核糖霉素Ch.P（）【判別】（1）取本品約10mg，加水2ml溶解后，加0.1%蒽酮硫酸溶液3ml，即顯藍至藍綠色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第122頁（三）N-甲基葡萄糖胺反應對二甲氨基苯甲醛H+櫻桃紅色（Elson-Morgan反應）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物水解鏈霉素慶大霉素奈替米星抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第123頁N-甲基葡萄糖胺反應對二甲氨基苯甲醛H+OH-(縮合)乙酰丙酮抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第124頁例硫酸新霉素Ch.P（）【判別】（1）取本品約10mg，加水1ml溶解后，加鹽酸溶液（9→100）2ml，在水浴中加熱10分鐘，加8%氫氧化鈉溶液2ml與2%乙酰丙酮水溶液1ml，置水浴中加熱5分鐘，冷卻后，加對二甲氨基苯甲醛試液1ml，即顯櫻桃紅色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第125頁（四）麥芽酚反應鏈霉糖特征反應△H+紫紅色（Maltol反應）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第126頁麥芽酚反應H+

Fe3+分子重排麥芽酚抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第127頁例硫酸鏈霉素Ch.P（）【判別】（2）取本品約20mg，加水5ml溶解后，加氫氧化鈉試液0.3ml，置水浴上加熱5分鐘,加硫酸鐵銨溶液（取硫酸鐵銨0.1g，加0.5mol/L硫酸溶液5ml使溶解）0.5ml，即顯紫紅色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第128頁（五）坂口反應鏈霉胍特征反應水解（Sakaguchi反應）橙紅色次溴酸鈉8-羥基喹啉（或α-萘酚）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第129頁坂口反應+OH-抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第130頁例硫酸鏈霉素Ch.P（）【判別】（1）取本品約0.5mg，加水4ml溶解后，加氫氧化鈉試液2.5ml與0.1%8-羥基喹啉乙醇溶液1ml，放冷至約15℃，加次溴酸鈉試液3滴,即顯橙紅色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第131頁（六）反應例【判別】顯硫酸鹽判別反應Ch.P（）

硫酸新霉素硫酸鏈霉素硫酸核糖霉素硫酸依替米星硫酸奈替米星硫酸阿米卡星硫酸慶大霉素硫酸西索米星硫酸卡那霉素硫酸巴龍霉素硫酸小諾霉素抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第132頁（七）色譜法TLC，HPLC法例【判別】HPLC法Ch.P（）

硫酸依替米星硫酸卡那霉素硫酸小諾霉素硫酸奈替米星硫酸阿米卡星硫酸慶大霉素硫酸西索米星硫酸巴龍霉素妥布霉素抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第133頁例硫酸小諾霉素Ch.P（）

【判別】（3）HPLC法【檢驗】小諾霉素組分HPLC法例硫酸依替米星Ch.P（）

【判別】（2）HPLC法【含量測定】HPLC法例硫酸卡那霉素Ch.P（）

【判別】（2）HPLC法【含量測定】HPLC法抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第134頁例【判別】TLC法Ch.P（）

硫酸依替米星硫酸奈替米星硫酸阿米卡星硫酸慶大霉素硫酸西索米星硫酸巴龍霉素硫酸小諾霉素妥布霉素抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第135頁（八）光譜法IR法例【判別】紅外光吸收圖譜Ch.P（）

鹽酸大觀霉素（光譜集1007圖）

硫酸新霉素（光譜集492圖）硫酸鏈霉素（光譜集491圖）硫酸阿米卡星（光譜集1079圖）硫酸慶大霉素（光譜集485圖）硫酸卡那霉素（光譜集484圖）硫酸巴龍霉素（光譜集483圖）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第136頁三、特殊雜質檢驗及組分分析（一）鏈霉素中鏈霉素B檢驗（甘露糖鏈霉素）3.方法TLC1.起源發(fā)酵時菌種產(chǎn)生2.效價鏈霉素20~25%（甘露糖對照品法）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第137頁例硫酸鏈霉素Ch.P（）【檢驗】鏈霉素B取本品0.25mg，精密稱定，置回流瓶中，加入5ml新鮮配置硫酸-甲醇溶液（3:97）溶解，加熱回流1小時,冷卻，用甲醇沖洗冷凝管，合并沖洗液，并用甲醇定量稀釋成每1ml中含10mg溶液，作為供試品溶液。精密稱取甘露糖對照品約36mg，置回流瓶中，同法處理后定量制成每1ml中含72μg溶液，作為對照溶液。取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上以甲苯-醋酸-甲醇（50:25:25）為展開劑，展開，晾干，噴以新鮮配制顯色劑（取0.2%1,3-萘二酚乙醇溶液與20%硫酸溶液等等體積混合，即得），在110℃加熱數(shù)分鐘顯色，供試品溶液所顯鏈霉素B斑點顏色與對照溶液主斑點比較，不得更深（3.0%）?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第138頁（二）硫酸奈替米星中相關物質檢驗（西索米星及其它未知雜質）3.顯色劑茚三酮1.起源原料引入2.標準品溶液（1）1.5mg/ml奈替米星標準品（2）3mg/ml奈替米星標準品（3）西索米星標準品≤1%≤1%≤2%抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第139頁慶大霉素C1、C2、C1a*對微生物活性無顯著差異*毒副作用和耐藥性不一樣發(fā)酵菌種不一樣工藝差異C組分百分比不一致要求各組分相對百分含量Ch.P、BPUSP、JPHPLC法（三）慶大霉素C組分測定抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第140頁慶大霉素本身無紫外吸收，可衍生化λmax=330nmpH10.4巰基醋酸抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第141頁++1-烷基硫代-2-烷基異吲哚衍生物抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第142頁例硫酸慶大霉素Ch.P（）【檢驗】慶大霉素C組分照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測定。

填充劑十八烷基硅烷鍵合硅膠

流動相0.2mol/L三氟醋酸-甲醇（92:8）

檢測器蒸發(fā)光檢測器檢測波長330nm標準品慶大霉素、小諾霉素抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第143頁測定法取小諾霉素標準品適量，精密稱定，分別用流動相制成每1ml中約含小諾霉素0.2mg、0.5mg和1.0mg溶液作為標準溶液(1)、(2)、(3)。取上述三種溶液各20ml,分別注入液相色譜儀，統(tǒng)計色譜圖，計算標準品溶液濃度對數(shù)值與對應主峰面積對數(shù)值回歸方程，相關系數(shù)（r）應大于0.99；另取本品適量，精密稱定，用流動相制成每1ml中約含慶大霉素2.5mg溶液，同法測定，用回歸方程計算供試品中對應各組分量（XCx），并依據(jù)所得各組分量（XCx）按下面公式計算出各組分含量?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第144頁Ch.P（）要求C125~50%C1a15~40%C2a+C220~50%抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第145頁（四）硫酸鹽測定剩下滴定法空白滴定抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第146頁例硫酸奈替米星Ch.P（）【檢驗】硫酸鹽取本品約0.12g，精密稱定，加水100ml使溶解，用濃氨溶液調整pH值至11后，精密加氯化鋇滴定液（0.1mol/L）10ml、酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05mol/L）滴定，注意保持滴定過程中pH值為11，滴定至紫色開始消褪，加入乙醇50ml，繼續(xù)滴定，至藍紫色消失，并將滴定結果用空白試驗校正。每1ml氯化鋇滴定液（0.1mol/L）相當于9.606mg硫酸鹽（SO4），本品含硫酸鹽量按無水物計算應為31.5%~35.0%?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第147頁微生物檢定法四、含量測定微生物檢定法，HPLC法例硫酸鏈霉素Ch.P（）

【含量測定】精密稱取本品適量，加滅菌水定量制成每1ml中約含1000單位溶液，照抗生素微生物檢定法（附錄ⅪA）測定，1000鏈霉素單位相當于1mgC21H38N7O12?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第148頁例硫酸慶大霉素Ch.P（）【含量測定】精密稱取本品適量，加滅菌水定量制成每1ml中含1000單位溶液，照抗生素微生物檢定法（附錄ⅪA）測定，可信限率不得大于7%。1000慶大霉素單位相當于1mg慶大霉素.抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第149頁例【含量測定】

Ch.P（）

微生物檢定法

鹽酸大觀霉素，硫酸新霉素，硫酸鏈霉素，硫酸核糖霉素，硫酸奈替米星，硫酸阿米卡星，硫酸慶大霉素，硫酸西索米星，硫酸巴龍霉素，硫酸小諾霉素HPLC法

硫酸依替米星，硫酸卡那霉素抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第150頁第四節(jié)四環(huán)素類抗生素一、化學結構與性質（一）結構ABCD抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第151頁碳原子編號123456789101112抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第152頁四環(huán)素（TC）

（tetracycline）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第153頁金霉素（CTC）

（chlortetracycline）（氯四環(huán)素）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第154頁土霉素（OTC）

（oxytetracycline）（氧四環(huán)素）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第155頁

多西環(huán)素（DOTC）

（doxycycline）（脫氧土霉素）（強力霉素）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第156頁美他環(huán)素（METC）

（metacycline）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第157頁兩性弱酸性、UV、FR弱堿性抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第158頁二甲胺基弱堿性酚羥基、烯醇型羥基弱酸性1.酸堿性（二）性質兩性抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第159頁OH-難溶于水易溶于有機溶劑易溶于水難溶于有機溶劑游離四環(huán)素四環(huán)素鹽溶解性臨床上多用鹽酸鹽抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第160頁2.旋光性手性C3.UV共軛體系4.與金屬離子生成有色配位化合物酚羥基、烯醇基Ca2+、Mg2+、Fe3+、Al3+抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第161頁pH3~7.5有強烈熒光抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第162頁（1）差向異構化5.不穩(wěn)定性抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第163頁土霉素、多西環(huán)素、美他環(huán)素不易差向異構化抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第164頁（2）降解性質A.酸性下降解抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第165頁四環(huán)素脫水四環(huán)素-H2O抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第166頁四環(huán)素pH＜2脫水四環(huán)素pH＜2差向脫水四環(huán)素4-差向四環(huán)素抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第167頁B.堿性下降解（熒光）抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第168頁二、判別試驗1.硫酸反應氧化、脫水例鹽酸土霉素ChP（）【判別】（1）取本品約0.5mg，加硫酸2ml,即顯深朱紅色；再加水1ml，溶液變?yōu)辄S色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第169頁例鹽酸金霉素Ch.P（）【判別】（1）取本品約0.5mg，加硫酸2ml即顯藍色，漸變?yōu)殚蠙炀G色，加水1ml后，顯金黃色或棕黃色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第170頁2.與三氯化鐵反應酚羥基例鹽酸四環(huán)素Ch.P（）【判別】（1）取本品約0.5mg，加硫酸2ml，即顯深紫色，再加三氯化鐵試液1滴，溶液變?yōu)榧t棕色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第171頁例鹽酸金霉素ChP（1995）【判別】（2）取本品約5mg，加水1ml溶解后,加三氯化鐵試液與乙醇混合液（1→10）2滴，即顯深褐色?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第172頁3.TLC法薄層板硅藻土pH7.0（黏合劑EDTA+甘油）穩(wěn)定展開劑乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮（2:2:1）（含EDTA）克服痕量金屬離子引發(fā)拖尾現(xiàn)象抗生素類藥物分析專業(yè)知識培訓第173頁例鹽酸土霉素Ch.P（）【判別】（2）取本品與土霉素、鹽酸金霉素及鹽酸四環(huán)素對照品，分別加甲醇制成每1ml中含1mg溶液；另取土霉素、鹽酸金霉素及鹽酸四環(huán)素對照品，加甲醇制成每1ml中含上述三種對照品各1mg混合溶液，照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗，吸收上述五種溶液各1

l，分別點于同一薄層板上，取4%乙二胺四醋酸二鈉溶液（pH7.0）5ml，加至乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮（2:2:1）200ml中為展開劑，展開后，晾干，用氨蒸氣熏后，置紫外光燈（365nm）下檢視，混合溶液應顯示三個顯著斑點，供試品溶液所顯斑點熒光強度及位置應與對應對照品溶液斑點相同?？股仡愃幬锓治鰧I(yè)知識培訓第174頁4.HPLC法例鹽酸四環(huán)素Ch.P（）【判別】（2）在含量測定項下統(tǒng)計色譜圖中，供試品溶液主峰保留時間應與對照品溶液主峰保留時間一致。鹽酸土霉素，鹽酸金霉素，鹽酸多西環(huán)素，