生化蛋白質(zhì)測定專家講座_第1頁
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文檔簡介

試驗二人血清蛋白質(zhì)含量測定生化蛋白質(zhì)測定專家講座第1頁蛋白質(zhì)測定主要方法依據(jù)蛋白質(zhì)元素組成——凱氏定氮法；依據(jù)蛋白質(zhì)組成特點建立比色法——雙縮脲法，lowry改良法，考馬斯亮藍染色法，BCA法；依據(jù)蛋白質(zhì)吸收特征建立紫外分光光度法；生化蛋白質(zhì)測定專家講座第2頁生化蛋白質(zhì)測定專家講座第3頁蛋白質(zhì)紫外吸收蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵芳香族氨基酸。它們含有吸收紫外光性質(zhì)。其最高吸收峰在280nm波優(yōu)點，且在此波長內(nèi)吸收峰光密度值與其濃度成正比。生化蛋白質(zhì)測定專家講座第4頁TyrTrp生化蛋白質(zhì)測定專家講座第5頁雙縮脲法測定蛋白質(zhì)

試驗原理——雙縮脲反應180oC生化蛋白質(zhì)測定專家講座第6頁雙縮脲在堿性條件下可與銅結(jié)合成紫紅色復合物

生化蛋白質(zhì)測定專家講座第7頁生化蛋白質(zhì)測定專家講座第8頁Cu2+OH-蛋白質(zhì)含有雙縮脲結(jié)構(gòu)，在堿性條件下也能與銅結(jié)合成紫紅色復合物在一定范圍內(nèi)，顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比——1-10mg，所以經(jīng)過比色法能夠測定蛋白質(zhì)含量。生化蛋白質(zhì)測定專家講座第9頁標準曲線作用和繪制依據(jù)Lambert-Beer定律，A與C成正比配制一系列標準液C1、C2、C3

，在

max下，測對應A1、A2、A3……。AxCx生化蛋白質(zhì)測定專家講座第10頁判斷測定誤差，確定方法可靠性。大批樣品分析時，可省略屢次計算，直接取得樣品測定結(jié)果。

繪制曲線注意點：

1.橫軸與縱軸百分比

2.各坐標點應與原點連成一條直線

3.直線經(jīng)過盡可能多點，不在直線上點均勻分布在直線兩邊生化蛋白質(zhì)測定專家講座第11頁試驗步驟1234567

標準管測定管空白管試劑蛋白質(zhì)標準液（ml）0.20.40.60.81.0

蛋白質(zhì)測定液（ml）1.0

0.9%NaCL（ml）0.80.60.40.21.0

雙縮尿試劑（ml）4.04.0

4.0

4.0

4.04.0

4.0

37oC水溫育20分鐘，540nm比色，測定吸光值生化蛋白質(zhì)測定專家講座第12頁雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度1234567A試驗原始數(shù)據(jù)生化蛋白質(zhì)測定專家講座第13頁試驗結(jié)果計算

1.繪制標準曲線，從標準曲線上查出待測血清樣品蛋白質(zhì)濃度，并求出人血清樣品蛋白質(zhì)濃度

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