微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素

一、微生物概念及分類1、概念：是指自然界中那些形態(tài)微小、結(jié)構(gòu)簡單，通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看清楚生物。第1節(jié)微生物試驗(yàn)培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第1頁生物分類動(dòng)物界：植物界：真菌界：原生生物：原核生物：病毒大型真菌、霉菌酵母菌細(xì)菌、放線菌、支原體、藍(lán)藻、衣原體變形蟲、草履蟲DNA型病毒、RNA型病毒真核生物原核生物非細(xì)胞生物細(xì)胞生物微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第2頁小資料：乳酸菌每小時(shí)產(chǎn)生乳酸能到達(dá)本身重量成千上萬倍；大腸桿菌每小時(shí)分解糖是本身重量兩千倍，每20分鐘可分裂一次，如保持這一速度，則兩天即可超出地球重量。微生物代謝為何如此旺盛呢？微生物表面積和體積比很大，約是同等重量成年人30萬倍，使它們能快速與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第3頁二、微生物培養(yǎng)：1）概念：按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)不一樣需要，配制出供其生長繁殖營養(yǎng)基質(zhì)。1、培養(yǎng)基：2）營養(yǎng)成份：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第4頁概念分類作用為微生物生長和繁殖提供所需碳元素營養(yǎng)物質(zhì)無機(jī)碳源：二氧化碳、碳酸氫鈉；有機(jī)碳源：葡萄糖、脂肪酸、石油等葡萄糖是最主要碳源合成微生物細(xì)胞物質(zhì)和代謝產(chǎn)物，有些碳源是異養(yǎng)微生物主要能源碳源：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第5頁概念分類作用為微生物生長和繁殖提供所需氮元素營養(yǎng)物質(zhì)無機(jī)氮源：N2、NH3銨鹽、硝酸鹽；有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等銨鹽、硝酸鹽是最主要氮源。合成蛋白質(zhì)、核酸和含氮代謝產(chǎn)物氮源：溫度、PH、滲透壓、O2及特殊營養(yǎng)物質(zhì)等。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第6頁1、科學(xué)家們用脈胞霉（一個(gè)真菌）為材料，進(jìn)行科學(xué)研究，用基本培養(yǎng)基來培養(yǎng)脈胞霉?；九囵B(yǎng)基中所含營養(yǎng)要素普通包含：

_______________________________2、酵母菌可用于食品工業(yè)廢水處理，廢水中淀粉或廢糖可與為酵母菌生長提供________類營養(yǎng)物質(zhì)。3、用乳酸菌制酸奶，加入蔗糖是作為______類營養(yǎng)物質(zhì)加入到牛奶中。4、硝化細(xì)菌碳源、氮源、能源依次為__________________________________。碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源碳源CO2、NH3、NH3氧化釋放化學(xué)能微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第7頁微生物所需營養(yǎng)要素碳源氮源水無機(jī)鹽無機(jī)碳源：CO2等—自養(yǎng)型有機(jī)碳源：葡萄糖等—異養(yǎng)型N2：固氮菌（根瘤菌等）NH3：硝化細(xì)菌其它：銨鹽、硝酸鹽、尿素、蛋白胨特殊營養(yǎng)物質(zhì)（維生素、氨基酸和堿基等）、PH、溫度、氧氣等微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第8頁3）培養(yǎng)基種類物理性質(zhì)培養(yǎng)基特點(diǎn)作用固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基加大量瓊脂加少許瓊脂不加瓊脂用于微生物分離和計(jì)數(shù)觀察微生物運(yùn)動(dòng)和判定菌種用于工業(yè)生產(chǎn)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第9頁3）培養(yǎng)基種類化學(xué)成份培養(yǎng)基特點(diǎn)作用合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基化學(xué)成份、含量已知含有天然物質(zhì)，化學(xué)成份、含量未知用于微生物分類和判定用于工業(yè)生產(chǎn)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第10頁3）培養(yǎng)基種類用途培養(yǎng)基成份原理作用實(shí)例選擇培養(yǎng)基判別培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基+某種物質(zhì)基本培養(yǎng)基+指示劑或化學(xué)物質(zhì)抑制不需要；促進(jìn)需要微生物生長發(fā)生特定顏色反應(yīng)等，證實(shí)微生物存在分離菌種判別菌種青霉素選擇出霉菌和酵母菌伊紅-美藍(lán)遇大腸桿菌落呈深紫色帶金屬光澤微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第11頁選擇培養(yǎng)基1）不加碳源培養(yǎng)基

分離自養(yǎng)型微生物2）不加氮源培養(yǎng)基

分離固氮菌3）加入青霉素培養(yǎng)基

分離酵母菌、霉菌等真菌4）加入高濃度食鹽培養(yǎng)基

分離金黃色葡萄球菌微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第12頁練習(xí)：（10全國）某細(xì)菌固體培養(yǎng)基組成成份是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸餾水，其中凝固劑是＿＿＿＿＿，碳源是＿＿＿＿＿＿，氮源是＿＿＿＿＿。已知只有能合成脲酶細(xì)菌才能在該培養(yǎng)基上生長，故該培養(yǎng)基屬于＿＿＿＿培養(yǎng)基。按照化學(xué)成份分類，該培養(yǎng)基屬于＿＿＿培養(yǎng)基。從同化作用類型上看，用該培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌屬于＿＿＿＿。葡萄糖尿素瓊脂選擇合成異養(yǎng)型微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第13頁思索：自然界中微生物是混雜生活在一起，怎樣分離出某種微生物（如純化大腸桿菌）？2、試驗(yàn)操作——大腸桿菌純化培養(yǎng)1）制備培養(yǎng)基：計(jì)算稱量溶化調(diào)PH值滅菌倒平板？微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第14頁無菌技術(shù)1、獲取純化培養(yǎng)物關(guān)鍵是預(yù)防外來雜菌入侵。2、無菌辦法：1)對試驗(yàn)操作空間、操作者衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；對將培養(yǎng)用器皿、接種工具和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌2)試驗(yàn)操作時(shí)已滅菌材料等應(yīng)防止與周圍物品接觸；試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；接種工具等應(yīng)在酒精等火焰上灼燒后使用微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第15頁1)概念：用溫和物理方法和化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害微生物（不包含芽孢和孢子）消毒與滅菌消毒：2)慣用消毒方法：

煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min；巴氏消毒法:70-75℃下煮30min或80℃下煮15min；化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源；紫外線消毒等微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第16頁滅菌1)概念：用強(qiáng)烈物理方法和化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部全部微生物（包含芽孢和孢子）微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第17頁灼燒滅菌干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.2)滅菌方法：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第18頁無菌技術(shù)1、取得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵是？

預(yù)防外來雜菌入侵2、消毒與滅菌區(qū)分？

消毒是殺死部分對人體有害微生物；滅菌是殺死全部微生物。3、對培養(yǎng)基滅菌方法是_______________，對接種針滅菌方法是_________，對玻璃器皿滅菌方法是________，對試驗(yàn)操作者手用酒精_______處理，試驗(yàn)操作結(jié)束需不需要滅菌？_________高壓蒸汽滅菌法灼燒滅菌干熱滅菌消毒需要微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第19頁

倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右時(shí)倒平板。平板倒置原因：預(yù)防培養(yǎng)基冷卻產(chǎn)生水滴滴落培養(yǎng)基上，造成污染。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第20頁2、試驗(yàn)操作——大腸桿菌純化培養(yǎng)1）制備培養(yǎng)基：計(jì)算稱量溶化調(diào)PH值滅菌倒平板標(biāo)準(zhǔn)：目標(biāo)明確、營養(yǎng)協(xié)調(diào)、PH值適宜微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第21頁2）純化大腸桿菌：微生物接種方法平板劃線法稀釋涂布平板法微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第22頁平板劃線法：經(jīng)過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線操作，將聚集菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，能夠分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來細(xì)胞群體，即得到單一菌落。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第23頁平板劃線法微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第24頁微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第25頁稀釋涂布平板法：

將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不一樣稀釋梯度菌液分別涂布在固體培養(yǎng)基表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高菌液里，聚集在一起微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，進(jìn)而形成單個(gè)菌落。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第26頁系列稀釋操作123456(1)將分別盛有9mL水試管滅菌并編號(hào)。(2)用移液管吸收1mL培養(yǎng)菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。(3)從101倍稀釋試管中吸收1mL稀釋液，注入第三支試管中，重復(fù)步驟2，直至到第六支試管。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第27頁微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第28頁10-110-410-510-6微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第29頁平板劃線法稀釋涂布平板法相同點(diǎn)：分散出單細(xì)菌形成單菌落來分離菌種不一樣點(diǎn)：分別經(jīng)過劃線和稀釋分散出單細(xì)菌，稀釋涂布平板法除分離菌種外還能夠?qū)ξ⑸镉?jì)數(shù)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第30頁三、微生物分離和計(jì)數(shù)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第31頁思索：怎樣尋找和分離某種微生物？實(shí)例1：啟示：尋找目標(biāo)菌種時(shí)要依據(jù)它對生存環(huán)境要求，到對應(yīng)環(huán)境中去尋找。多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一個(gè)在體外將少許DNA大量復(fù)制技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）DNA聚合酶。假如讓你尋找這種耐高溫酶，你會(huì)去哪找？微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第32頁啟示：分離菌種要人為提供有利于目標(biāo)菌株生長條件(包含營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其它微生物生長，即用選擇培養(yǎng)基來分離菌種。原因：因?yàn)闊崛獪囟?0～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物，只有耐熱菌被篩選出來。思索：為何耐熱菌能從熱泉中被篩選出來？（一）分離微生物原理：選擇培養(yǎng)基分離微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第33頁1、活菌計(jì)數(shù)法（經(jīng)過統(tǒng)計(jì)菌落估算活菌數(shù)）原理：在稀釋度足夠高時(shí)，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成，即一個(gè)菌落代表原先一個(gè)單細(xì)胞。慣用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用稀釋液體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。（二）微生物計(jì)數(shù)方法：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第34頁注意事項(xiàng)①統(tǒng)計(jì)菌落往往比活菌實(shí)際數(shù)目低。原因是___________________________________________________________________________。②為了確保結(jié)果準(zhǔn)確，普通選擇菌落數(shù)在30——300平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。(細(xì)菌：稀釋度104-106；放線菌：稀釋度103-105；霉菌：稀釋度102-104)③為使結(jié)果靠近真實(shí)值可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連著一起時(shí)，平板上觀察到菌落只有一個(gè)。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第35頁2、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物數(shù)量。不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運(yùn)動(dòng)細(xì)菌計(jì)數(shù)；需要相對高細(xì)菌濃度；個(gè)體小細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察缺點(diǎn)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第36頁1、土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)（三）實(shí)例：課題背景1）尿素利用尿素是一個(gè)主要農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2）細(xì)菌利用尿素原因土壤中細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)脲酶+H2O+CO2NH3微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第37頁3）常見分解尿素微生物芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，一些真菌和放線菌也能分解尿素。4）課題目標(biāo)①從土壤中分離出能夠分解尿素細(xì)菌②統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中終究含有多少這么細(xì)菌微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第38頁15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：①從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第39頁②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖氮源：尿素培養(yǎng)基唯一氮源為尿素，只有能合成脲酶微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶微生物因?yàn)椴荒芊纸饽蛩兀狈Φ炊荒苌L發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素微生物。4)培養(yǎng)基選擇分解尿素微生物原理微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第40頁試驗(yàn)詳細(xì)操作

㈠.土壤取樣

從肥沃、濕潤土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好信封中?！羧⊥翗佑眯¤F鏟和盛土樣信封在使用前都要滅菌。㈡.制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源選擇培養(yǎng)基。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第41頁◆應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤哼^程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行◆分離不一樣微生物采取不一樣稀釋度原因：不一樣微生物在土壤中含量不一樣目標(biāo)：確保取得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)平板[三]樣品稀釋微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第42頁㈣.取樣涂布◆假如得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30——300平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，假如同一稀釋倍數(shù)三個(gè)重復(fù)菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不準(zhǔn)確，需要重新試驗(yàn)。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第43頁實(shí)例2：在做分解尿素細(xì)菌篩選與統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目標(biāo)試驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對應(yīng)106倍稀釋培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，不過其它同學(xué)在一樣稀釋度下只選擇出大約50個(gè)菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不一樣⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其它含氮物質(zhì))微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第44頁小結(jié)：經(jīng)過這個(gè)事例能夠看出，試驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照設(shè)置是必不可少。方案一：由其它同學(xué)用與A同學(xué)相同土樣進(jìn)行試驗(yàn)方案二：將A同學(xué)配制培養(yǎng)基在不加土樣(或加等量無菌水)情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證實(shí)培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測：假如結(jié)果與A同學(xué)一致，則證實(shí)A無誤；假如結(jié)果不一樣，則證實(shí)A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基配制有問題。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第45頁設(shè)置對照：設(shè)置對照主要目標(biāo)是排除試驗(yàn)組中非測試原因?qū)υ囼?yàn)結(jié)果影響，提升試驗(yàn)結(jié)果可信度。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第46頁

纖維素分解菌篩選（教材P28）選擇___________環(huán)境，采集土樣制成樣品。將樣品接種在以_________為唯一碳源選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，目標(biāo)是增加纖維素分解菌濃度。采取___________________法,將樣品接種到含有剛果紅固體培養(yǎng)基上，挑選產(chǎn)生_______菌落來篩選纖維素分解菌。纖維素豐富纖維素稀釋涂布平板透明圈2、分解纖維素微生物分離：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第47頁試驗(yàn)操作土壤取樣梯度稀釋將樣品涂布到判別纖維素分解菌培養(yǎng)基上（含剛果紅）挑選產(chǎn)生透明圈菌落選擇培養(yǎng)(液體培養(yǎng)基)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第48頁微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第49頁篩選并增大菌種濃度稀釋菌種微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第50頁㈤.微生物培養(yǎng)與觀察在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)統(tǒng)計(jì)作為結(jié)果，以預(yù)防因培養(yǎng)時(shí)間不足而造成遺漏菌落數(shù)目。培養(yǎng)不一樣微生物往往需要不一樣培養(yǎng)溫度。細(xì)菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃溫度下培養(yǎng)3～4d。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第51頁微生物培養(yǎng)與觀察微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第52頁三.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1.經(jīng)過對照試驗(yàn)，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其它氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素微生物。2.提醒：選擇每個(gè)平板上長有30—300個(gè)菌落稀釋倍計(jì)算每克樣品菌數(shù)最適當(dāng)。同一稀釋倍數(shù)三個(gè)重復(fù)菌落數(shù)不能相差懸殊，如相差較大，表示試驗(yàn)不準(zhǔn)確。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第53頁2、微生物分離原理：人為提供有利于目標(biāo)菌株生長條件(包含營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其它微生物生長。（用選擇培養(yǎng)基）微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第54頁（二）純化大腸桿菌1、將準(zhǔn)備培養(yǎng)菌種放到培養(yǎng)基中過程叫做__________。2、微生物接種最慣用方法是____________和_________________3、能夠取得單一菌落接種方法有____________和_________________4、能夠測定樣品中活菌數(shù)接種方法是_______________平板劃線法稀釋涂布平板法接種平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第55頁生物細(xì)胞生物動(dòng)物植物真菌原生生物非細(xì)胞生物真核生物原核生物細(xì)菌放線菌支原體衣原體藍(lán)藻病毒微生物————酵母菌、霉菌、蘑菇微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第56頁微生物試驗(yàn)室培養(yǎng)

一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）培養(yǎng)基1、配制培養(yǎng)基基本標(biāo)準(zhǔn)（確定培養(yǎng)基配方依據(jù)）__________________________2、多數(shù)培養(yǎng)基都含有_____________________等四類營養(yǎng)物質(zhì)，少數(shù)微生物還需要加入特殊營養(yǎng)物質(zhì)即—_________.3、最慣用碳源是____________；蛋白胨或牛肉膏能夠?yàn)榧?xì)菌提供___________類營養(yǎng)物質(zhì)4、微生物培養(yǎng)條件主要包含

_____________________________依據(jù)微生物營養(yǎng)需要配制水、無機(jī)鹽、碳源、氮源生長因子葡萄糖氮源和碳源溫度、PH、滲透壓、O2等筆記微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第57頁

例題：下列圖為某同學(xué)依據(jù)雜交瘤技術(shù)方法，設(shè)計(jì)生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌試驗(yàn)方案B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

1、該試驗(yàn)方案目標(biāo)是

__________________________2、A是從小鼠脾臟中取得

_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______3、取A細(xì)胞前，必須給小鼠

______________4、圖中B為_________過程，慣用____________作為誘導(dǎo)劑，制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體注射抗原

細(xì)胞融合滅活病毒微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第58頁

例題：下列圖為某同學(xué)依據(jù)雜交瘤技術(shù)方法，設(shè)計(jì)生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌試驗(yàn)方案B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

5、雜交瘤細(xì)胞繼承___________遺傳特征，既能__________,又能

_____________。6、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包含_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個(gè)階段。7、單克隆抗體特點(diǎn)是

__________________________8、將單克隆抗體與抗癌藥品相結(jié)合，制成___________

雙親細(xì)胞無限增殖分泌特異性抗體原代傳代特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備生物導(dǎo)彈微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第59頁5、選擇培養(yǎng)基（筆記）選擇培養(yǎng)基篩選、分離細(xì)胞加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽金黃色葡萄球菌無氮培養(yǎng)基固氮菌無碳培養(yǎng)基自養(yǎng)型細(xì)菌依標(biāo)識(shí)基因，加入某種等抗生素導(dǎo)入了重組DNA受體細(xì)胞加入次黃嘌呤、氨基嘌呤等雜交瘤細(xì)胞微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第60頁培養(yǎng)基成份含量NH4Cl4.6gK2HPO42.0gMgSO41.6g瓊脂15g蒸餾水1000ml乳糖5.0g微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第61頁培養(yǎng)基成份含量K2HPO42.0gMgSO41.6g瓊脂15g蒸餾水1000ml乳糖5.0gNH4Cl4.6g蛋白胨10.0g微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第62頁培養(yǎng)基成份含量K2HPO42.0gMgSO41.6g瓊脂15g蒸餾水1000ml乳糖5.0gNH4Cl4.6g微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第63頁培養(yǎng)基成份含量K2HPO42.0gMgSO41.6g瓊脂15g蒸餾水1000ml乳糖5.0gNH4Cl4.6g蛋白胨10.0g微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第64頁培養(yǎng)基成份含量K2HPO42.0gMgSO41.6g瓊脂15g蒸餾水1000ml乳糖5.0gNH4Cl4.6g微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第65頁微生物分離：科赫平板劃線法自然界中微生物都是混雜生活在一起，給研究和應(yīng)用帶來了很大困難。19世紀(jì)后期，德國細(xì)菌學(xué)家科赫創(chuàng)造了固體培養(yǎng)基，尤其是用瓊脂做凝固劑固體培養(yǎng)基，成功處理這一問題，科赫將微生物樣品稀釋后，用針尖沾取少許稀釋菌液在固體培養(yǎng)基上連續(xù)劃線，因?yàn)槲⑸镌诠腆w培養(yǎng)基上生長部位固定，很快就會(huì)在培養(yǎng)基表面長出各種菌落，科赫推斷相同菌落來自同一個(gè)種，于是挑選某一個(gè)菌落微生物，經(jīng)過幾次相同培養(yǎng)過程后，就得到了純種。應(yīng)用固體培養(yǎng)基，科赫分離出了炭疽芽孢桿菌、霍亂弧菌、結(jié)核桿菌等。1905年科赫因結(jié)核桿菌研究結(jié)果而獲諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng)。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第66頁微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第67頁單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見、含有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是判定菌種主要依據(jù)。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第68頁摸底考試復(fù)習(xí)安排閱讀筆記復(fù)習(xí)學(xué)案（重點(diǎn)是自己不會(huì)、做錯(cuò)習(xí)題）作業(yè)《高考總復(fù)習(xí)-學(xué)生用書-生物》P151—161

要求：填寫基礎(chǔ)知識(shí)、例題、考點(diǎn)訓(xùn)練《高考總復(fù)習(xí)-學(xué)生卷-生物》P107—112；P114—116（去掉12、13、19、23、25、30）微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第69頁1）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基物質(zhì)牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至100mL

稱量

按百分比稱取各種物質(zhì)，注意事項(xiàng)：牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要快速，稱后及時(shí)蓋上瓶蓋。計(jì)算微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第70頁溶化：先將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加少許水，加熱至牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。加入蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪拌使之溶解，再加入瓊脂，攪拌，待溶解后，加自來水定溶至100mL。滅菌：將配制好培養(yǎng)基放到錐形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮紙），連同培養(yǎng)皿（3～5套，用幾層報(bào)紙包好）一起放到高壓鍋內(nèi)滅菌。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第71頁2、制備培養(yǎng)基操作排序①溶化（使各種原料、瓊脂等加熱溶化）②滅菌③調(diào)PH值④計(jì)算（各成份用量）⑤稱量⑥倒平板(培養(yǎng)基冷卻至50℃,倒入培養(yǎng)皿)

正確操作次序：___________________④⑤①③②⑥微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素第72頁為何分離不一樣微生物要采取不一樣稀釋度