病毒感染的診斷與防治p

病毒感染的診斷與防治p病毒感染的診斷與防治p第1頁(yè)第一節(jié)立克次體

對(duì)人致病立克次體有五個(gè)屬立克次體屬、柯克斯體屬、東方體屬、埃立克體屬和巴通體屬。

病毒感染的診斷與防治p第2頁(yè)共同特點(diǎn)①大多是人畜共患病原體，引發(fā)人類發(fā)燒和出疹性疾?。虎谝怨?jié)肢動(dòng)物為傳輸媒介或?yàn)閮?chǔ)存宿主；③大小介于細(xì)菌與病毒之間，光鏡下呈多形態(tài)性，主要為微，桿狀或球桿狀，革蘭陰性；④除了少數(shù)外全是專性活細(xì)胞內(nèi)寄生；⑤菌體內(nèi)同時(shí)含有DNA和RNA兩類核酸；⑥以二分裂方式進(jìn)行繁殖；⑦反抗生素敏感。病毒感染的診斷與防治p第3頁(yè)一、斑疹傷寒立克次體

(一)臨床意義

1．普氏立克次體是流行性斑疹傷寒(又稱虱傳斑疹傷寒)病原體。病人是惟一傳染源，體虱是主要傳輸媒介，而非儲(chǔ)存宿主。傳輸方式為虱-人-虱，體虱僅是傳染媒介。病毒感染的診斷與防治p第4頁(yè)莫氏立克次體地方性斑疹傷寒(又稱鼠型斑疹傷寒)病原體。嚙齒類動(dòng)物是主§宿主，傳輸媒介是鼠蚤或鼠虱。鼠蚤叮咬人體時(shí)，常排糞于皮膚上，斑疹傷寒立克次體從抓破傷口進(jìn)入人體。若有些人虱寄生，可經(jīng)過(guò)人虱為傳輸媒介，繼發(fā)性地在人群中傳輸。病毒感染的診斷與防治p第5頁(yè)致病物質(zhì)有兩種，其一是內(nèi)毒素，主要成份為脂多糖(LPS)；其二為磷脂酶A,能損傷宿主細(xì)胞膜及溶解胞內(nèi)吞噬體膜，以利于病原體穿入宿主細(xì)胞并在其中生長(zhǎng)。普氏和莫氏立克次體所致斑疹傷寒癥狀相同，以高熱、頭痛、全身皮疹為主要特征。伴有神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等癥狀和實(shí)質(zhì)性器官損傷。病毒感染的診斷與防治p第6頁(yè)(二)微生物特征1.比細(xì)菌小，呈多形態(tài)性，在感染細(xì)胞內(nèi)聚集成團(tuán),分布在胞質(zhì)內(nèi),Gimenez法染色后呈紅色，外表含有微莢膜結(jié)構(gòu)。2.必須在真核細(xì)胞內(nèi)才能生長(zhǎng)繁殖，培養(yǎng)時(shí)需要C02。通常采取5-9日齡雞胚作卵黃囊接種，于32℃-35℃孵育4～13d內(nèi)死亡，雞胚死亡時(shí)間與接種劑量大小呈直接相關(guān)。普氏和莫氏立克次體能在各種單層細(xì)胞上生長(zhǎng)繁殖。豚鼠可作立克次體初代分離。病毒感染的診斷與防治p第7頁(yè)3.有群特異性和種特異性兩種抗原。大個(gè)別立克次體與普通變形桿菌X菌株菌體耐熱多糖抗原有共同抗原性，故可用這些菌株代替立克次體抗原進(jìn)行凝集反應(yīng)去檢測(cè)抗體，這種交叉凝集試驗(yàn)被稱為外斐反應(yīng)，可供輔助診療。病毒感染的診斷與防治p第8頁(yè)

外斐反應(yīng)

立克次體病變形桿菌OX19變形桿菌OX2變形桿菌OXk流行性斑疹傷寒+++++-地方性斑疹傷寒+++++-斑點(diǎn)熱++++/++/++++-恙蟲病--++++腺熱--++病毒感染的診斷與防治p第9頁(yè)(三)微生物檢驗(yàn)

1.標(biāo)本采集(1)病人血液標(biāo)本：發(fā)燒期都有立克次體血癥，在急性期較易檢出立克次體。爭(zhēng)取在用抗生素前采血，馬上床側(cè)接種。(2)活檢或尸檢材料：肺、肝、脾、淋巴結(jié)、心瓣膜等標(biāo)本。病毒感染的診斷與防治p第10頁(yè)2.標(biāo)本直接檢驗(yàn)

(1)免疫熒光檢測(cè)用于臟器檢驗(yàn)。制備標(biāo)本片薄而均勻，組織結(jié)構(gòu)清楚，固定后用熒光抗體染色,常見(jiàn)脾、肺及心瓣膜中有立克次體，也可在肝、腎及皮疹活檢組織中檢出。(2)核酸檢測(cè)PCR敏感性高，所需樣品量只需ELISA試驗(yàn)1／5。以編碼17kD蛋白基因和編碼普氏和莫氏立克次體169kD蛋白基因作為擴(kuò)增靶區(qū)。病毒感染的診斷與防治p第11頁(yè)引物R17-1、-2在65℃條件下能擴(kuò)增普氏和莫氏立克次體DNA。在瓊脂凝膠上產(chǎn)生一條340bp核酸帶；引物R169-1、-2僅能擴(kuò)增普氏立克次體DNA，產(chǎn)生一條432bp核酸帶。兩種引物同時(shí)使用，擴(kuò)增后普氏可產(chǎn)生340bp和432bp兩條帶，而莫氏只產(chǎn)生340bp一條帶。該法敏感性可達(dá)0．05ngDNA水平，重復(fù)性好，操作方便，對(duì)兩型立克次體早期、判別診療以及自然生態(tài)宿主調(diào)查研究含有較大價(jià)值。病毒感染的診斷與防治p第12頁(yè)3．分離培養(yǎng)(1)動(dòng)物接種選取健康雄性豚鼠接種方便觀察陰囊腫脹現(xiàn)象。每日測(cè)體溫，至40℃發(fā)燒時(shí)采血或臟器懸液、接種雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)以分離立克次體；感染莫氏立克次體豚鼠在發(fā)燒1—2日內(nèi)出現(xiàn)陰囊紅腫，解剖可見(jiàn)腹股溝淋巴結(jié)腫大、充血、脾大2-3倍，有腹水；有陰囊反應(yīng)者，睪丸有小出血點(diǎn)，鞘膜充血并有漿液性滲出物等。鞘膜涂片可查到立克次體。病毒感染的診斷與防治p第13頁(yè)(2)判定用免疫熒光法判定感染動(dòng)物臟器、雞胚卵黃囊、細(xì)胞培養(yǎng)物中特異性抗原以已知抗原測(cè)定動(dòng)物恢復(fù)期血清中對(duì)應(yīng)抗體。必要時(shí)用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、微量凝集試驗(yàn)等，作群和種判定。病毒感染的診斷與防治p第14頁(yè)(3)分離株繁殖及保留①雞胚卵黃囊培養(yǎng)收獲卵黃囊，經(jīng)涂片染色鏡檢,含立克次體較多而又未發(fā)覺(jué)細(xì)菌卵黃囊膜，或?qū)⑵渥鞒蛇m當(dāng)濃度懸液置-70℃冰箱保留，或冰凍干燥保藏；②細(xì)胞培養(yǎng)：選雞胚、成纖維、人羊膜、HeLa等細(xì)胞，接種培養(yǎng)、判定后將立克次體大量繁殖感染細(xì)胞置-70℃儲(chǔ)存。病毒感染的診斷與防治p第15頁(yè)4．抗體檢測(cè)立克次體病常見(jiàn)血清學(xué)診療方法除外斐反應(yīng)、間接免疫熒光(IFA)試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)外，還有補(bǔ)體結(jié)合(CF)試驗(yàn)、微量凝集(MA)試驗(yàn)、間接血凝(IHA)試驗(yàn)、膠乳凝集(LA)試驗(yàn)等。病毒感染的診斷與防治p第16頁(yè)(1)外斐反應(yīng)除Q熱、立克次體痘及羅沙利馬體感染為陰性外，其它為陽(yáng)性。患者OX凝集素上升較晚，在病程2周左右方出現(xiàn)陽(yáng)性，病程中雙份血清試驗(yàn)，若效價(jià)有4倍增加，方有診療意義。病毒感染的診斷與防治p第17頁(yè)有些病例在病程中效價(jià)不見(jiàn)上升，約15％經(jīng)疫苗接種后感染斑疹傷寒病例。有些輕癥斑疹傷寒或一些發(fā)病嚴(yán)重者，其它血清學(xué)試驗(yàn)陽(yáng)性，但外斐反應(yīng)可為陰性。斑點(diǎn)熱病人外斐反應(yīng)效價(jià)通常為OX19高于OX2，但也有OX2較高者。若僅出現(xiàn)OX2陽(yáng)性，則對(duì)診療斑點(diǎn)熱有特殊意義。病毒感染的診斷與防治p第18頁(yè)(2)IFA試驗(yàn)為現(xiàn)在診療立克次體病常見(jiàn)方法。用已知立克次體抗原(感染雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)懸液)制片，以低稀釋度病人血清初篩，有呈經(jīng)典立克次體形態(tài)明亮熒光顆粒者，判為陽(yáng)性。再將病程早期及晚期血清分別作雙倍或4倍稀釋以測(cè)效價(jià)，如呈4—8倍增加者可明確診療。病毒感染的診斷與防治p第19頁(yè)(3)ELISA檢測(cè)IgM抗體對(duì)早期診療有價(jià)值。立克次體抗原吸附于載體。泛影葡胺梯度離心純化抗原為優(yōu)，檢出血清抗體效價(jià)高，紙上ELISA測(cè)定抗體，方法簡(jiǎn)便。將感染卵黃囊懸液加于玻片(經(jīng)氯仿·甲醇洗凈)上，涼干、固定，加稀釋血清于抗原點(diǎn)上，每張玻片上包含陽(yáng)性和陰性對(duì)照，加酶標(biāo)兔抗人IgM/G于抗原·血清點(diǎn)作用后，將浸透新鮮配制底物無(wú)灰濾紙覆蓋在玻片上約4-6min，可見(jiàn)濾紙條上陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)位置顯紫棕色，取下濾紙條(即終止反應(yīng))，觀察是否顯色，與對(duì)照比較判定結(jié)果。此法簡(jiǎn)便，并可保留試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。病毒感染的診斷與防治p第20頁(yè)(4)CF試驗(yàn)

CF試驗(yàn)原來(lái)是立克次體病血清學(xué)診療經(jīng)典試驗(yàn)，即使敏感性不如IFA和ELISA，但非常特異。普通在立克次體病發(fā)病一周內(nèi)，血清中即有CF抗體出現(xiàn)，以后逐步上升，至第3周達(dá)最高峰，然后逐步降至較低效價(jià)，并可保持幾年不消失，但也有在病后幾周即轉(zhuǎn)陰性者。病人恢復(fù)期血清與斑疹傷寒群及斑點(diǎn)熱群立克次體可溶性抗原試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果，只能說(shuō)明該群立克次體感染。病毒感染的診斷與防治p第21頁(yè)三、恙蟲病立克次體

又名東方立克次體是恙蟲病病原體，由恙螨叮咬侵入人體，對(duì)人體致病性很強(qiáng)，釋放毒素樣物質(zhì)是主要致病原因，引發(fā)發(fā)燒皮疹全身中毒癥狀，以及全身淋巴結(jié)腫大及各組織器官血管炎病變。蟲咬處潰瘍形成黑色焦痂，周圍有紅暈等為其特征。為自然疫源性疾病。病毒感染的診斷與防治p第22頁(yè)(一)微生物特征1．含有多形性，但以短桿狀為常見(jiàn)。G-,姬姆薩染色呈紫紅色,Gimenez染色呈暗紅色，背景為綠色。能夠判別恙蟲病立克次體和其它立克次體。分布在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，密集于細(xì)胞核旁。細(xì)胞內(nèi)寄生。病毒感染的診斷與防治p第23頁(yè)2．培養(yǎng)特征(1)動(dòng)物接種：小鼠最敏感，刮取腹膜上粘液涂片檢驗(yàn)，可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量立克次體，尤以腹膜上皮細(xì)胞內(nèi)多見(jiàn)，常密集于細(xì)胞核旁。病毒感染的診斷與防治p第24頁(yè)(2)細(xì)胞培養(yǎng)：恙蟲病立克次體能夠在各種細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)、繁殖，多采取Vero、L929細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞感染需要適宜溫度和吸附時(shí)間，通常以37℃吸附1h，培養(yǎng)32℃為宜，繁殖遲緩，用Vero細(xì)胞培養(yǎng)8—9d，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，在細(xì)胞核旁高度密集，但不侵入細(xì)胞核。病毒感染的診斷與防治p第25頁(yè)3．抗原成份恙蟲病立克次體含有耐熱性多糖抗原和特異性抗原。恙蟲病立克次體和變形桿菌OXk株有共同抗原成份，在Weil-Felex反應(yīng)中，血清與OX，抗原發(fā)生凝集而不與OX19、OX2發(fā)生凝集。病毒感染的診斷與防治p第26頁(yè)(二)微生物檢驗(yàn)

(1)抗原檢測(cè)：ELISA間接法是檢測(cè)標(biāo)本特異性抗原或抗體最常見(jiàn)方法。(2)PCR：可檢出20ng恙蟲病立克次體DNA；套式PCR法可檢出200pg，是當(dāng)前最為快速、特異、敏感試驗(yàn)室診療方法，可用于急性期患者早期診療。依據(jù)56KD蛋白抗原基因或58KD蛋白抗原基因序列選擇引物，進(jìn)行目標(biāo)DNA擴(kuò)增，然后用1．5％瓊脂糖電泳法檢出特異性DNA帶。病毒感染的診斷與防治p第27頁(yè)(3)分離培養(yǎng)接種小鼠分離病原。將標(biāo)本接種腹腔O．5ml，普通多在7～18天死亡，感染小鼠有顯著癥狀，瀕死前解剖，可見(jiàn)皮下淋巴結(jié)腫大充血，脾腫大，有粘稠腹腔滲出液，以Giemsa染色鏡檢，在靠近細(xì)胞核旁邊可見(jiàn)成堆排列立克次體。也可接種Vero細(xì)胞、L929細(xì)胞進(jìn)行立克次體分離培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)10—15天，取細(xì)胞涂片，Giemsa染色鏡檢。病毒感染的診斷與防治p第28頁(yè)(4)抗體檢測(cè)外斐試驗(yàn)：臨床血清學(xué)診療方法，血清抗體OXk效價(jià)達(dá)l：160以上有意義，病程中雙份或多份血清試驗(yàn)，若效價(jià)有4倍增高，有診療意義。因?yàn)橥忪吃囼?yàn)特異性、敏感性低，輕易造成誤診或漏診，不應(yīng)作為恙蟲病診療方法。病毒感染的診斷與防治p第29頁(yè)免疫熒光試驗(yàn)：快速敏感特異，可分別檢測(cè)患者血清中抗恙蟲病立克次體lgG、IgM抗體，效價(jià)在1：80以上有診療意義。雙份血清有4倍或以上增加能夠確診。病毒感染的診斷與防治p第30頁(yè)四、貝納柯克斯體

又稱Q熱立克次體，是引發(fā)Q熱(疑問(wèn)熱，指最初不明病因發(fā)燒)病原體。傳染源主要是受染牛、羊等家畜，以蜱為傳輸媒介，對(duì)人感染力尤其強(qiáng)，經(jīng)過(guò)接觸、呼吸道、消化道等路徑使人及動(dòng)物發(fā)生感染。Q熱除有發(fā)燒、頭痛及肌肉痛外，以出現(xiàn)肺炎和肝炎為其臨床特征。慢性Q熱主要表現(xiàn)為心內(nèi)膜炎。病毒感染的診斷與防治p第31頁(yè)（一）微生物特征

1.形態(tài)與結(jié)構(gòu)個(gè)體較小，多為短桿狀，常排列成對(duì)，Gimenez法染色呈紅色，背景呈綠色，用Giemsa法染色呈紫紅色。有莢膜，在雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)均可有芽胞形成。2.基因組與抗原成份基因組分子量為大腸桿菌1／3；編碼代謝酶、表面抗原與毒力因子相關(guān)基因。有兩相抗原，Ⅰ相為光滑型LPS，Ⅱ相為粗糙型短鏈LPS。病毒感染的診斷與防治p第32頁(yè)3．培養(yǎng)特點(diǎn)雞胚是培養(yǎng)極好宿主。普通經(jīng)培養(yǎng)10—12d，1g卵黃囊膜常可取得約1000μg純凈立克次體能在各種人和動(dòng)物原代或傳代細(xì)胞內(nèi)繁殖。普通不引發(fā)顯著細(xì)胞病變。病毒感染的診斷與防治p第33頁(yè)4．抵抗力貝納柯克斯體抵抗力強(qiáng)，70℃-90℃加熱30—60min尚難殺死。1%福爾馬林作用二十四小時(shí)也不能完全滅活。對(duì)氯霉素和四環(huán)素類抗生素敏感。病毒感染的診斷與防治p第34頁(yè)(二)微生物檢驗(yàn)(1)標(biāo)本直接抗原檢測(cè)：免疫熒光法進(jìn)行檢測(cè)。(2)標(biāo)本直接核酸檢驗(yàn)：按16SrRNA非保守區(qū)序列合成寡核苷酸探針，能檢出5pgrRNA，如將非保守區(qū)特異性擴(kuò)增，其敏感性可達(dá)檢出1—10個(gè)貝納柯克斯體水平。用貝納柯克斯休質(zhì)粒DNA片段制備探針，不但能快速檢出病原體，且能判別含QpHI或QpRS質(zhì)粒分離株，與呼吸道感染病原體DNA無(wú)交叉反應(yīng)。試驗(yàn)僅需8—12h即可得到結(jié)果。病毒感染的診斷與防治p第35頁(yè)3．分離培養(yǎng)病原體分離只是在該地域還未證實(shí)有Q熱存在，病情尤其嚴(yán)重有必要。將標(biāo)本接種于豚鼠或培養(yǎng)細(xì)胞，觀察其發(fā)病是否或生長(zhǎng)情況，經(jīng)形態(tài)學(xué)、血清免疫學(xué)等判定后作出結(jié)論。病毒感染的診斷與防治p第36頁(yè)4．抗體檢測(cè)

用間接免疫熒光試驗(yàn)、ELISA和CF試驗(yàn)。CF試驗(yàn)中抗原相選擇對(duì)結(jié)果影響極大，對(duì)現(xiàn)癥診療主要看Ⅱ相抗體逐步上升，若Ⅰ相抗體保持較高水平，則往往說(shuō)明慢性感染或隱性感染。病毒感染的診斷與防治p第37頁(yè)五、埃立克體(一)臨床意義為埃立克體病病原體。1.人腺熱埃立克體病可能由蜱傳輸，也可能因?yàn)閿z食生魚引發(fā)。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱頭痛、淋巴細(xì)胞數(shù)增加，并出現(xiàn)非典型淋巴細(xì)胞。。2.人單核細(xì)胞埃立克體(HME)病，主要侵染人單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。傳輸媒介為蜱。病毒感染的診斷與防治p第38頁(yè)3．人粒細(xì)胞埃立克體(HGE)病主要侵犯人粒細(xì)胞。硬蜱是傳輸媒介。也是萊姆病病原體攜帶和傳輸者，故與萊姆病相重合。病毒感染的診斷與防治p第39頁(yè)（二）微生物特征1．為G-小球菌，呈多形性，Romanows染色呈蘭色和紫色。吞噬細(xì)胞以內(nèi)吞方式將埃立克體攝入胞內(nèi)，在胞質(zhì)內(nèi)以二分裂方式繁殖，形成包涵體。稱為桑椹體。病毒感染的診斷與防治p第40頁(yè)2．基因組埃立克體16SrRNA基因極保守，但5’端50—100堿基為高變區(qū)，適合設(shè)計(jì)PCR引物或核酸雜交探針。人粒細(xì)胞埃立克體外膜蛋白44kDa蛋白被克隆，可用作探針。3．抗原成份在埃立克體屬內(nèi)各種埃立克體均可有血清學(xué)交叉反應(yīng)。病毒感染的診斷與防治p第41頁(yè)(三)微生物檢驗(yàn)1.標(biāo)本直接顯微鏡檢驗(yàn)采集病人外周血制備血片，經(jīng)Giemsa或Wright染色，在光鏡下發(fā)覺(jué)粒細(xì)胞及單核細(xì)胞質(zhì)或血小板內(nèi)有圓形、深紫色桑椹體，可作為急性期埃立克體病一個(gè)簡(jiǎn)便和有效輔助診療方法。病毒感染的診斷與防治p第42頁(yè)2.核酸檢測(cè)

PCR是最有效埃立克體病病原學(xué)診療方法，可用于埃立克體病早期診療。大約80％-87％HME和43％-75％HGE患者血標(biāo)本被PCR檢測(cè)為陽(yáng)性。特異性幾乎為100％，主要依賴引物特異性?？捎?6SrRNA基因設(shè)計(jì)引物或做基因探針。有極高敏感性，感染后數(shù)天就可檢出陽(yáng)性結(jié)果。病毒感染的診斷與防治p第43頁(yè)3.細(xì)胞培養(yǎng)查菲埃立克體可用犬巨噬細(xì)胞系(DH82)，腺熱埃立克體用小鼠巨噬細(xì)胞系(P388D1)，人粒細(xì)胞埃立克體則用人粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系(HL-60)作它們體外培養(yǎng)宿主細(xì)胞。將3ml抗凝血白細(xì)胞層，接種細(xì)胞單層，置37℃5％C02孵育箱中培養(yǎng)，每隔3-4天換一次細(xì)胞維持液，并刮少許細(xì)胞涂片，用Giemsa染色，在光鏡下檢驗(yàn)埃立克體包涵體。病毒感染的診斷與防治p第44頁(yè)4.小鼠接種

從蜱體內(nèi)分離埃立克體讓蜱叮咬小鼠和吸血?；?qū)⒉∪嘶騽?dòng)物抗凝血白細(xì)胞注入小鼠腹腔。觀察小鼠發(fā)病。定時(shí)采小鼠血作涂片染色、IFA、PCR等證實(shí)小鼠被埃立克體感染，用腹腔液涂片染色鏡檢包涵體。病毒感染的診斷與防治p第45頁(yè)5.抗體檢測(cè)

(1)間接免疫熒光(1FA)：將感染血清作倍比稀釋，加入抗原孔內(nèi)，置濕盒37℃孵育lh；玻片沖洗后，用Evans藍(lán)作背景染色，然后每孔加一滴固定液，加蓋玻片，在熒光顯微鏡下檢驗(yàn)感染細(xì)胞內(nèi)帶熒光包涵體，通常血清中抗體滴度1：20為陽(yáng)性。若獲雙份血清效價(jià)增高4倍以上即可明確診療。病毒感染的診斷與防治p第46頁(yè)(2)免疫印跡采取免疫印跡檢測(cè)埃立克體病患者血清中抗埃立克體主要抗原組分抗體，可以改進(jìn)血清學(xué)檢測(cè)特異性。經(jīng)免疫印跡分析發(fā)覺(jué)HME患者血清中含有抗查菲埃立克體44kDa抗原組分IgG抗體。但不能用于埃立克體病早期診療。病毒感染的診斷與防治p第47頁(yè)六、漢賽巴通體

引發(fā)桿菌性血管瘤—桿菌性紫癜(BAP)和貓抓病(CSD)病原體。常在免疫缺點(diǎn)病毒(HIV)感染者發(fā)生，也感染有免疫潛能人群，與接觸貓相關(guān)。為G-營(yíng)養(yǎng)要求苛刻需氧桿菌，為兼性胞內(nèi)寄生菌。病毒感染的診斷與防治p第48頁(yè)貓抓病有與貓接觸史，抓咬部位形成丘疹膿皰，繼而出現(xiàn)淋巴結(jié)腫大，約10％病例有肉芽腫性結(jié)膜炎、骨質(zhì)溶解、肺炎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害等。病毒感染的診斷與防治p第49頁(yè)桿菌性血管瘤-桿菌性紫癜常在免疫低下者發(fā)生。與貓抓傷咬傷相關(guān)，主要表現(xiàn)為皮膚損害和內(nèi)臟發(fā)生紫癜。在病變處能發(fā)覺(jué)桿菌狀小體。開(kāi)始皮膚出現(xiàn)紅丘疹，偶有潰瘍。皮下出現(xiàn)肉色結(jié)節(jié)。桿菌性血管瘤可發(fā)生在任何實(shí)質(zhì)性器官，極難與分枝桿菌和真菌感染或惡性腫瘤判別。病毒感染的診斷與防治p第50頁(yè)(一)微生物特征1．為G-彎曲桿狀小體，常呈多形性；初分離有菌毛，發(fā)覺(jué)有噬菌體。2．培養(yǎng)特征營(yíng)養(yǎng)要求苛刻需氧桿菌，用含新鮮血瓊脂或腦心浸液于35℃5％C02環(huán)境下培養(yǎng)2—5周才長(zhǎng)出灰色凸起并嵌入瓊脂內(nèi)菌落。病毒感染的診斷與防治p第51頁(yè)3．基因組約為kb。已經(jīng)測(cè)序基因有16SrRNA和gltA基因序列包含1293核苷酸，始于ATG起始密碼子，終于兩TAA終止密碼子。病毒感染的診斷與防治p第52頁(yè)(二)微生物檢驗(yàn)

1.標(biāo)本染色直接檢驗(yàn)活檢病理標(biāo)本和淋巴結(jié)活檢用Warthin-Starry染色能查見(jiàn)多形性菌體。2.核酸檢測(cè)依16SrRNA或gltA基因設(shè)計(jì)引物，對(duì)臨床標(biāo)本作PCR，其擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)序列測(cè)定或用特異性DNA探針判定，可直接作出病原診療。病毒感染的診斷與防治p第53頁(yè)3.分離培養(yǎng)可將血液標(biāo)本先經(jīng)溶血和離心處理，待長(zhǎng)出菌落后作生化反應(yīng)，分析其細(xì)胞脂肪酸和16SrRNA序列等加以判定。于培養(yǎng)1周仍不見(jiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4周。病毒感染的診斷與防治p第54頁(yè)4.抗體檢測(cè)(1)IFA：雙份血清滴度呈4倍增加為陽(yáng)性；單份血清滴度最少達(dá)1：64方可考慮診療。(2)ELISA：用17KD重組體抗原作ELISA檢測(cè)人血清抗體IgG，有利于診療。(3)免疫印跡試驗(yàn)：可顯示48．5kDa蛋白質(zhì)組分，而非巴通體感染病人血清則不能與此蛋白組分反應(yīng)，以此作為確證試驗(yàn)。病毒感染的診斷與防治p第55頁(yè)第二節(jié)衣原體

是一類專性細(xì)胞內(nèi)寄生、有獨(dú)特發(fā)育周期、能經(jīng)過(guò)細(xì)菌濾器原核細(xì)胞型微生物。歸屬于廣義細(xì)菌范圍。衣原體科包含沙眼衣原體、肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體等四種。病毒感染的診斷與防治p第56頁(yè)一、沙眼衣原體不但可致眼部感染，而且可引發(fā)生殖泌尿系統(tǒng)感染、性病淋巴肉芽腫以及其它器官疾病。多年沙眼衣原體感染率和危害性已超出淋球菌而居性傳輸疾病之首，因而日益受到醫(yī)學(xué)界重視。沙眼衣原體有沙眼生物變種、性病淋巴肉芽腫生物變種（LGV）和鼠生物變種等3個(gè)生物變種。病毒感染的診斷與防治p第57頁(yè)1．沙眼亞種(1)沙眼：經(jīng)過(guò)眼-手-眼路徑直接或間接親密接觸傳播。由A、B、Ba和C血清型引發(fā)。結(jié)膜引起局部炎癥。有濾泡增生。后期出現(xiàn)瘢痕及角膜血管翳，影響視力。病毒感染的診斷與防治p第58頁(yè)(2)包涵體結(jié)膜炎：由B、Ba、D、Da等血清型引發(fā)。嬰兒經(jīng)過(guò)產(chǎn)道感染，引發(fā)濾泡性結(jié)膜炎，不出現(xiàn)角膜血管翳。(3)泌尿生殖道感染：由D-K血清型引發(fā)。在性接觸傳輸引發(fā)非淋菌性泌尿生殖道感染（50％—60％）。易發(fā)展為連續(xù)感染或無(wú)癥狀攜帶者。病毒感染的診斷與防治p第59頁(yè)2.性病淋巴肉芽腫亞種，由L血清型引發(fā)性病淋巴肉芽腫。侵犯腹股溝淋巴結(jié)，引發(fā)化膿性淋巴結(jié)炎和慢性淋巴肉芽腫。3.鼠生物變種為鼠間傳輸，不侵犯人，與鼠肺炎相關(guān)。病毒感染的診斷與防治p第60頁(yè)微生物特征1．發(fā)育周期與形態(tài)染色衣原體含有特殊發(fā)育周期。①原體是細(xì)胞外存在形式，卵圓形，有胞壁和擬核,是發(fā)育成熟衣原體，含有高度感染性，能吸附于易感細(xì)胞特異受體，增大形成網(wǎng)狀體；②網(wǎng)狀體或稱始體，圓形，二分裂增殖為繁殖型，無(wú)感染性。于感染24h后濃縮形成原體，最終細(xì)胞破裂釋放原體，再感染其它細(xì)胞，每個(gè)發(fā)育周期約需48—72h。病毒感染的診斷與防治p第61頁(yè)抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，有屬、種、型等特異性抗原。(1)屬特異性抗原：為胞壁LPS，屬特異性補(bǔ)體結(jié)合抗原，應(yīng)用于血清學(xué)診療。(2)種特異性抗原：位于主要外膜蛋白（MOMP）上，可用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和中和試驗(yàn)檢測(cè)。(3)型特異性抗原：也位于MOMP上，用單克隆抗體作微量免疫熒光試驗(yàn)?zāi)茏R(shí)別沙眼體18個(gè)型別。病毒感染的診斷與防治p第62頁(yè)培養(yǎng)特征沙眼衣原體專性活細(xì)胞內(nèi)寄生，用6—8d齡雞胚卵黃囊及各種傳代細(xì)肋培養(yǎng)。普通培養(yǎng)48—72h后可在細(xì)胞內(nèi)查到包涵體及原體和始體顆粒。多年多采取細(xì)胞培養(yǎng)衣原體，常見(jiàn)細(xì)胞株為Hela-299和McCoy。病毒感染的診斷與防治p第63頁(yè)抵抗力沙眼衣原體感染材料在37℃條件下，經(jīng)48h左右即失去活力，56℃6min滅活。-70℃可保留數(shù)年，冷凍干燥可保留30年以上仍有活性。O.1％甲醛或O.5％石炭酸溶液24h殺死沙眼衣原體，2％來(lái)蘇僅需5min。紅霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素或青霉素對(duì)衣原體有抑制作用。病毒感染的診斷與防治p第64頁(yè)

沙眼和包涵體結(jié)膜炎病人，用拭子在結(jié)膜上穹窿涂擦或取結(jié)膜刮片。性病淋巴肉芽腫：采淋巴結(jié)膿汁，也可取直腸拭子或活檢材料送檢。用光學(xué)顯微鏡觀察包涵體有診療意義，尤其在眼結(jié)膜、尿道及子宮頸上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)覺(jué)經(jīng)典包涵體更有沙眼衣原體感染參考。病毒感染的診斷與防治p第65頁(yè)免疫學(xué)方法1)免疫熒光檢驗(yàn)：用熒光抗體檢測(cè)上皮細(xì)胞內(nèi)衣原體抗原。標(biāo)識(shí)抗衣原體LPS抗體，可與全部衣原體反應(yīng)；而抗MOMP抗體有種、型特異性?？稍?h內(nèi)即作出診療并可分型。2)酶免疫檢測(cè)：能在數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)出衣原體可溶性抗原，并適合用于同時(shí)檢測(cè)大量標(biāo)本。病毒感染的診斷與防治p第66頁(yè)核酸檢測(cè)1)核酸雜交：用125I標(biāo)識(shí)衣原體rDNA探針檢測(cè)宮頸標(biāo)本敏感性和特異性，與培養(yǎng)相比分別為82.8％和99.4％。2)PCR：含有高度敏感性和特異性。普通按沙眼衣原體7．5kb質(zhì)粒、MOMP序列及16SrRNA基因序列設(shè)計(jì)引物。病毒感染的診斷與防治p第67頁(yè)分離培養(yǎng)將標(biāo)本拭子，用含抗生素稀釋液制成10％-20％懸液。分離細(xì)胞有McCoy、HeLa-229細(xì)胞等。置5％CO2下培養(yǎng)。初代分離培養(yǎng)72-96h后傳代或盲傳。有癥狀病人90％標(biāo)本第1代即可見(jiàn)包涵體，而無(wú)癥狀病人需傳代后才得到陽(yáng)性。敏感性為80％-90％，特異性100％，是當(dāng)前確診最可靠方法，而且是評(píng)價(jià)試驗(yàn)室診療法標(biāo)準(zhǔn)。病毒感染的診斷與防治p第68頁(yè)雞胚培養(yǎng)有細(xì)菌污染臨床標(biāo)本加適當(dāng)抗生素(如鏈霉素、慶大霉素和制霉菌素等)肉湯，在室溫中作用lh后，接種3-4只孵育7天雞胚卵黃囊，35℃孵育，觀察至13天，收獲卵黃囊涂片，作Gimenez染色，鏡檢原體。病毒感染的診斷與防治p第69頁(yè)判定1.將細(xì)胞培養(yǎng)蓋片用Giemsa或碘染色鏡檢胞質(zhì)內(nèi)包涵體。Giemsa染色比碘染色敏感，可作為判別沙眼衣原體參考。2.可用型特異性熒光血清判定其型別。對(duì)于卵黃囊和小鼠分離材料可用免疫熒光法判定原體或補(bǔ)體結(jié)合抗原。病毒感染的診斷與防治p第70頁(yè)抗體檢測(cè)當(dāng)前檢測(cè)抗體血清學(xué)方法在常規(guī)臨床診療中價(jià)值很小。原因是不易取得雙份血清，而且性傳輸疾病高危人群多有慢性重復(fù)感染，原有抗體水平較高，因而限制了血清學(xué)方法診療價(jià)值。方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF)、微量免疫熒光試驗(yàn)(MIF)、酶免疫法等。其中CF敏感性和特異性較差，而MIF敏感性和特異性較高。病毒感染的診斷與防治p第71頁(yè)三、鸚鵡熱衣原體鸚鵡熱衣原體是鸚鵡熱病原體，主要引發(fā)禽畜感染，也可由動(dòng)物傳染到人，引發(fā)肺炎和毒血癥，亦有引發(fā)心內(nèi)膜炎報(bào)道。也有衣原體獨(dú)特生活周期，包涵體較致密，形態(tài)不一，碘染色陰性，是與沙眼衣原體判別關(guān)鍵點(diǎn)(沙眼衣原體含糖原，碘染色陽(yáng)性)。病毒感染的診斷與防治p第72頁(yè)抗原檢測(cè)1)免疫熒光檢驗(yàn)：以衣原體屬、種或型單克隆抗體與熒光素結(jié)合后中衣原體抗原存在，用微量免疫熒光法還可用于衣原體分型。2)酶免疫法(EIA)檢測(cè)：將衣原體單克隆抗體與酶結(jié)合，用于組織或細(xì)胞染色，槍測(cè)衣原體抗原。E1A法比免疫熒光法準(zhǔn)確性略高，且可防止主觀原因影響。病毒感染的診斷與防治p第73頁(yè)核酸檢測(cè)

1)核酸探針檢測(cè)法：將衣原體MOMP基因、特異LPS表位基因，及其它決定鸚鵡熱衣原體抗原基因片段做成探針，對(duì)衣原體DNA進(jìn)行斑點(diǎn)雜交或Southern印跡雜交試驗(yàn)，可準(zhǔn)確靈敏測(cè)出鸚鵡熱衣原體，也可用于種內(nèi)株系判別。2)PCR：檢測(cè)3種衣原體MOMP基因序列是簡(jiǎn)便、微量、快速、敏感檢測(cè)力法。病毒感染的診斷與防治p第74頁(yè)分離培養(yǎng)

(1)雞胚培養(yǎng)：鸚鵡熱衣原體分離常見(jiàn)雞胚卵黃囊接種與傳代，可取得滿意效果。(2)小鼠分離：選擇腹腔接種、顱內(nèi)接種和滴鼻接種進(jìn)行試驗(yàn)。最具特征性發(fā)覺(jué)小鼠嗜眠和麻痹，脹氣十二指腸上覆蓋一層薄粘性滲出物，全肺葉有實(shí)變。病毒感染的診斷與防治p第75頁(yè)(3)細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)PL細(xì)胞、BHK細(xì)胞、Vero細(xì)胞等，鸚鵡熱衣原體均能生長(zhǎng)。但直接用于臨床標(biāo)本分離培養(yǎng)效果不好，最好先接種雞胚卵黃囊，經(jīng)繁殖后再細(xì)胞培養(yǎng)輕易成功。病毒感染的診斷與防治p第76頁(yè)抗體檢測(cè)方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF)、間接血凝試驗(yàn)(IHA)和酶聯(lián)免疫吸附試(ELISA)等。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：主要用于鸚鵡熱和性病淋巴肉芽腫以及肺炎試驗(yàn)。CF抗體效價(jià)呈4倍增加者可作診療。一次CF抗體結(jié)果，需效價(jià)高于1：64才可能作臨床診療。病毒感染的診斷與防治p第77頁(yè)四、肺炎衣原體

肺炎衣原體是衣原體屬中一個(gè)新種，只有一個(gè)血清型，是一個(gè)主要呼吸道病原體。主要引發(fā)青少年急性呼吸道感染，可引發(fā)肺炎、支氣管炎、咽炎和鼻竇炎等。還可引發(fā)心包炎、心肌炎和心內(nèi)膜炎。肺炎衣原體性感染與急性心肌梗死和慢性冠心病關(guān)系，越來(lái)越引發(fā)大家注意。病毒感染的診斷與防治p第78頁(yè)微生物特征

1．有衣原體獨(dú)特生活周期，原體在電鏡下呈型梨形，并有清楚周漿間隙。2．全基因組測(cè)序已完成，與鸚鵡熱衣原體、沙眼衣原體DNA同源性≤10％，而不一樣來(lái)擗TWAR株都含有94％以上DNA同源性，其限制性內(nèi)切酶圖譜相同。其單克隆抗體與沙眼衣原體及鸚鵡熱衣原體無(wú)交叉反應(yīng)。3．用HEp-2和HL細(xì)胞系較易分離和傳代。病毒感染的診斷與防治p第79頁(yè)抗體檢測(cè)以微量免疫熒光試驗(yàn)(MIF)最為敏感，該試驗(yàn)陽(yáng)性者50％～70％可分離出TWAR，用此法檢測(cè)特異性IgM和IgG抗體，有利于區(qū)分近期感染和既往感染，也有利于區(qū)分原發(fā)感染和再感染，TWAR再感染相當(dāng)常見(jiàn)，尤其是老年人，再感染時(shí)普通不出現(xiàn)lgM和補(bǔ)體結(jié)合抗體。病毒感染的診斷與防治p第80頁(yè)概念衣原體是一類嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，有獨(dú)特發(fā)育周期，能經(jīng)過(guò)細(xì)菌濾器原核細(xì)胞型微生物.病毒感染的診斷與防治p第81頁(yè)共同特征

①革蘭陰性，圓形或橢圓形體；②含有細(xì)胞壁，其組成與革蘭陰性菌相同；③有獨(dú)特發(fā)育周期，行二分裂方式繁殖；④衣原體營(yíng)專性細(xì)胞內(nèi)寄生；⑤有核糖體和較復(fù)雜酶類，能進(jìn)行各種代謝。但缺乏供代謝所需能量起源⑥對(duì)各種抗生素敏感病毒感染的診斷與防治p第82頁(yè)四種衣原體性狀比較病毒感染的診斷與防治p第83頁(yè)第一節(jié)概述生物學(xué)性狀發(fā)育周期原體（elementarybody，EB）始體（initialbody）

網(wǎng)狀體（reticulatebody，RB）病毒感染的診斷與防治p第84頁(yè)原體（elementarybody,EB）始體（initialbody）[網(wǎng)狀體（reticulatebody,RB）]小而致密，直徑0.2~0.4

m，大而疏松，直徑0.5~1

m，球形、橢圓形或梨形，圓形或橢圓形有致密類核結(jié)構(gòu)，有胞壁，發(fā)育成熟體大電子致密度較低，無(wú)胞壁Giemsa紫色，Macchiavello紅色Macchiav