(高清版)GBT 43745-2024 飼料原料 發(fā)酵豆粕

飼料原料發(fā)酵豆粕2024-03-15發(fā)布2024-10-01實(shí)施國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所、湖北邦之德牧業(yè)科技有限公司。1飼料原料發(fā)酵豆粕述了相應(yīng)的試驗(yàn)方法。本文件適用于以豆粕為主要原料(≥95%),使用農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《飼料添加劑品種目錄》中批準(zhǔn)使用的微生物菌種進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，并經(jīng)干燥制成的蛋白質(zhì)飼料原料產(chǎn)品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB5009.228—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定GB/T6432飼料中粗蛋白的測(cè)定凱氏定氮法GB/T6434飼料中粗纖維的含量測(cè)定過(guò)濾法GB/T6435飼料中水分的測(cè)定GB/T6438飼料中粗灰分的測(cè)定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB/T8622飼料用大豆制品中尿素酶活性的測(cè)定GB10648飼料標(biāo)簽GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T14699.1飼料采樣GB/T18246飼料中氨基酸的測(cè)定GB/T18823飼料檢測(cè)結(jié)果判定的允許誤差GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備GB/T22492—2008大豆肽粉3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4技術(shù)要求4.1原料要求4.2外觀與性狀2應(yīng)符合表1的要求。一級(jí)二級(jí)粗蛋白質(zhì)/%≥45.0粗灰分/%≤酸溶蛋白(占粗蛋白質(zhì)比例)/%≥尿素酶/(U/g)≤水蘇糖/%≤β-伴大豆球蛋白/(mg/g)≤80.0揮發(fā)性鹽基氮(以N計(jì))/(mg/100g)≤80.0應(yīng)符合GB13078的要求。按GB/T14699.1的規(guī)定執(zhí)行。6試驗(yàn)方法6.1外觀與性狀檢驗(yàn)從抽取的樣品中，取適量倒在白紙或白瓷板上，在光線充足的條件下，觀察顏色和狀態(tài)，并聞其氣味。6.2粗蛋白質(zhì)按GB/T6432的規(guī)定執(zhí)行。6.3粗纖維3按GB/T6435的規(guī)定執(zhí)行。按GB/T22492—2008附錄B中B.4.1按GB/T18246的規(guī)定執(zhí)行。6.8尿素酶按GB/T8622的規(guī)定執(zhí)行。6.9水蘇糖按附錄A的規(guī)定執(zhí)行。按附錄B的規(guī)定執(zhí)行。6.11揮發(fā)性鹽基氮按GB5009.228—2016中第二法自動(dòng)凱氏定氮儀法執(zhí)行，在10.3步驟之前樣品需過(guò)濾或離心，取清液。6.12衛(wèi)生指標(biāo)按GB13078的規(guī)定執(zhí)行。7檢驗(yàn)規(guī)則以同一批原料、相同生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批，但每批產(chǎn)品不應(yīng)超過(guò)100t。7.3型式檢驗(yàn)型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為4.2～4.4規(guī)定的項(xiàng)目。在正常生產(chǎn)情況下，每半年至少進(jìn)行1次型式檢驗(yàn)。有下列情況之一，也應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a)新產(chǎn)品投產(chǎn)時(shí)；b)生產(chǎn)工藝、配方或主要原料來(lái)源有較大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)；c)產(chǎn)品停產(chǎn)3個(gè)月以上，恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；e)飼料行政管理部門(mén)提出檢驗(yàn)要求時(shí)。47.4判定規(guī)則7.4.1所檢驗(yàn)項(xiàng)目全部合格，判定該批次產(chǎn)品合格。7.4.2檢驗(yàn)結(jié)果中有任何指標(biāo)不符合本文件規(guī)定時(shí)，可自同批產(chǎn)品中重新加倍取樣進(jìn)行復(fù)檢。若復(fù)檢結(jié)果仍不符合本文件規(guī)定，則判定該批產(chǎn)品不合格。微生物指標(biāo)不應(yīng)復(fù)檢。7.4.3檢驗(yàn)結(jié)果判定的允許誤差按GB/T18823的規(guī)定執(zhí)行。7.4.4各項(xiàng)目指標(biāo)的極限數(shù)值判定按GB/T8170中修約值比較法執(zhí)行。按GB10648的規(guī)定執(zhí)行。8.3運(yùn)輸運(yùn)輸中防止包裝破損、日曬、雨淋，不應(yīng)與有毒有害物質(zhì)共運(yùn)。貯存時(shí)防止日曬、雨淋，不應(yīng)與有毒有害物質(zhì)混貯。8.5保質(zhì)期未開(kāi)啟包裝的產(chǎn)品，在規(guī)定的運(yùn)輸、貯存條件下，產(chǎn)品保質(zhì)期應(yīng)與標(biāo)簽中標(biāo)明的保質(zhì)期一致。5(規(guī)范性)發(fā)酵豆粕中水蘇糖含量測(cè)定方法A.1原理用水提取試樣中的水蘇糖，然后采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定其含量。A.2試劑或材料A.2.3三氯乙酸。A.2.4水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(10mg/mL):精確稱(chēng)取水蘇糖0.5000g,用水溶解并定容至50mL。臨用A.2.5水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：分別取水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(A.2.4)25μL、50μL、75μL、100μL、125μL、150μL,于HPLC進(jìn)樣瓶中，分別加水至1.00mL,制成質(zhì)量濃度分別為0.25mg/mL、0.50mg/mL、0.75mg/mL、1.00mA.3儀器設(shè)備A.3.3超聲波清洗儀。A.3.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于12000r/min。A.4樣品按GB/T20195制備樣品，粉碎過(guò)篩(孔徑0.25mm),備用。A.5試驗(yàn)步驟A.5.1試樣溶液的制備精確稱(chēng)取發(fā)酵豆粕樣品2g(精確至0.0001g),加20mL水，于超聲波清洗儀中，超聲提取15min,將浸提液于70℃水浴1h,加入0.5g三氯乙酸，混勻后，置冰浴中2h,在12000r/min條件下A.5.2色譜參考條件色譜參考條件如下：a)色譜柱：氨丙基鍵合固定相柱，柱長(zhǎng)250mm,內(nèi)徑4.1mm或其他可分析單糖和低聚糖的性能相當(dāng)?shù)纳V柱；c)流動(dòng)相：乙腈-水(75+25);6A.5.3測(cè)定在儀器最佳狀態(tài)下分別測(cè)定水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液(A.5.1)中的水蘇糖含量。試樣溶液重復(fù)測(cè)定2次。以色譜峰面積為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)試樣溶液色譜峰面積對(duì)照水蘇糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。A.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中水蘇糖的含量w表示為試樣中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%計(jì)，按式(A.1)計(jì)算：式中：p——標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試樣溶液中水蘇糖的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);V——試樣溶液的體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g);1000——換算系數(shù)。A.7精密度在重復(fù)性條件下，2次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不大于該算術(shù)平均值的2%。7(規(guī)范性)發(fā)酵豆粕中β-伴大豆球蛋白含量測(cè)定方法B.1方法原理采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法(ELISA法)。在酶標(biāo)板上預(yù)包被β-伴大豆球蛋白抗原，樣品中的β-伴大豆球蛋白和預(yù)包被的抗原競(jìng)爭(zhēng)β-伴大豆球蛋白抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底色液顯色，樣品吸光度值與其所含β-伴大豆球蛋白的含量呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣品中β-伴大豆球蛋白的含量。B.2試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?。B.2.2弗氏不完全佐劑。B.2.3包被緩沖液(0.05mol/L,pH9.6的碳酸緩沖液):準(zhǔn)確稱(chēng)取1.59g碳酸鈉(Na?CO?)和2.93g碳酸氫鈉(NaHCO?),將其混溶于1000mL蒸餾水中。B.2.4封閉液：用包被緩沖液配制5%的脫脂牛奶。B.2.530×濃縮樣品提取液：181.7gTris、73mL鹽酸(HCl)和21mLβ-巰基乙醇，定容至1000mL蒸餾水中。B.2.6樣品稀釋液：0.9%氯化鈉溶液。B.2.7抗體工作液：5.0g牛血清白蛋白(BSA)、1.0mLProclin-300、100mL0.2mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)、0.05g亮藍(lán)、β-伴大豆球蛋白抗體1mg。PBS100mL和0.5mg辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠抗體，定容至1000mL蒸餾水中。B.2.10顯色液A:40.0g磷酸氫二鈉(Na?HPO?·12H?O)、10.0g一水檸檬酸和0.5g過(guò)氧化氫脲，定容至1000mL。B.2.11顯色液B:2.0g一水合檸檬酸、150mL無(wú)水甲醇、0.55gTMB和100mLN,N-二甲基甲酰胺，定容至1000mL蒸餾水中。B.2.13標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：0μg/mL、0.2μg/mL、0.4μg/mL、1.6μg豆球蛋白。B.3儀器設(shè)備B.3.2離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。B.3.3分光光度計(jì)。按GB/T20195制備樣品，粉碎過(guò)篩(孔徑0.25mm),備用。8B.5實(shí)驗(yàn)步驟B.5.1.1抗原制備：將低溫脫脂未變性的大豆粉以1:10的料水質(zhì)量比分散于溫度為40℃~50℃、pH8.0～11.0[1mol/L氫氧化鈉(NaOH)調(diào)制]的水中，除去非可溶性成分；分散過(guò)程在機(jī)械攪拌或超聲波處理的條件下處理45min;調(diào)整溶液離子強(qiáng)度為0.05～1.0,pH5.0～6.0(35%HCl調(diào)制),在4000r/min～7000r/min離心，得到的上清液用酸調(diào)pH至4.0～5.0(35%HCl調(diào)制),然后在2只新西蘭白兔，采用6周免疫程序。兔子先適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。兔子免疫前先于一側(cè)耳緣抽取2mL靜脈血，4℃靜置過(guò)夜，取血清作陰性對(duì)照。對(duì)脊柱兩側(cè)進(jìn)行多點(diǎn)背部皮下注射(劑量為每只100μg免疫原);初次免疫后第15天，再用弗氏不完全佐劑抗原腹腔靜脈加強(qiáng)免疫1次，1周1次，共3次。免疫后的第25天和第38天取血，間接ELISA法測(cè)定抗體效價(jià)，Westernblot法觀察免疫反應(yīng)條帶，檢測(cè)免疫效果。效價(jià)達(dá)到要求后，用無(wú)佐劑抗原免疫1次，免疫第3天后頸動(dòng)脈采血收集血清，3000r/min離心20min。收獲的抗血清用甘油1:1稀釋?zhuān)谝?0℃保存。B.5.2預(yù)包被抗原酶標(biāo)板的制備液，37℃溫育1h,洗滌1次，然后拍干，放入自封袋中，于4℃干燥保存。B.5.3.1稱(chēng)樣：稱(chēng)取0.3000g樣品于50mL離心管中。B.5.3.2提取：裝有樣品的50mL離心管中再加入30mL1×樣品提取工作液，于25℃振蕩提取16h。B.5.3.3離心：振蕩后靜置2min,取上層液體于離心機(jī)中4000r/min離心5min。加600μL1×樣品稀釋工作液混勻，再取混合液100μL加900μL1×樣品稀釋工作液混勻),待測(cè)。B.5.4測(cè)定步驟B.5.4.1將所需試劑和酶標(biāo)板從4℃冰箱中取出，回溫至20℃~25℃,試劑使用前搖勻。B.5.4.2編號(hào)：將樣品和對(duì)照品對(duì)應(yīng)酶標(biāo)板微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和對(duì)照品做2孔平行，并記錄對(duì)照品孔和樣品孔所在的位置。25.6μg/mL)以及待測(cè)樣品各取50μL加至對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)板微孔中，再加入抗體工作液50μL/孔，輕輕振蕩混勻。蓋上蓋板膜，37℃避光反應(yīng)30min。B.5.4.6顯色：將等體積顯色液A與顯色液B混勻(顯色液現(xiàn)用現(xiàn)混，5min內(nèi)用完，混勻時(shí)請(qǐng)勿劇烈振蕩);每孔加入混合液100μL,蓋上蓋板膜，37℃,避光反應(yīng)15min。9B.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理B.6.1百分吸光率計(jì)算對(duì)照品或樣品的百分吸光率等于對(duì)照品或樣