染色體組型分析

遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)之——

染色體組型分析

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆杖旧w組型分析的各種數(shù)據(jù)指標(biāo)學(xué)習(xí)染色體組型分析的根本方法實(shí)驗(yàn)原理定義：染色體組型又稱核型，是指將動(dòng)物、植物、真菌等的某一個(gè)體或某一分類群〔亞種、種、屬等〕的體細(xì)胞內(nèi)的整套染色體，按它們相對(duì)恒定的特征排列起來(lái)的圖像。核型模式圖是指將一個(gè)染色體組的全部染色體逐個(gè)按其特征繪制下來(lái)，再按長(zhǎng)短、形態(tài)等特征排列起來(lái)的圖像。開(kāi)展歷史染色體的特征數(shù)目〔2n=？〕長(zhǎng)度〔絕對(duì)長(zhǎng)度、相對(duì)長(zhǎng)度〕著絲粒位置〔M\SM\ST\T〕隨體與次溢痕的數(shù)目、大小和位置帶型分析各類常用實(shí)驗(yàn)生物和人細(xì)胞DNA含量與染色體數(shù)目物

種染色體數(shù)目DNA含量（bp）MS2λ噬菌體T4枯草桿菌大腸桿菌啤酒酵母果蠅海膽蛙小雞小鼠玉米人111113485226784020463×1035×1045×1052×1064.2×1061.4×1071.4×1081.6×1094.5×1092.1×1094.7×1093×1093.2×109染色體超螺旋染色體的大小燈刷染色體〔光鏡觀察〕染色體觀察及核型分析應(yīng)用意義染色體組型分析——染色體水平上的表型可確定物種的特征，確定種屬親緣關(guān)系分析生物物種的變異和進(jìn)化過(guò)程識(shí)別單條染色體、基因定位臨床應(yīng)用〔染色體疾病、產(chǎn)前診斷〕人類23對(duì)染色體組型分析實(shí)驗(yàn)方法染色體數(shù)目確定染色體形態(tài)特征：長(zhǎng)度：絕對(duì)、相對(duì)相對(duì)長(zhǎng)度=每條染色體的長(zhǎng)度/全套染色體長(zhǎng)度臂比=長(zhǎng)臂/短臂著絲點(diǎn)指數(shù)=短臂/〔長(zhǎng)+短臂〕隨體的有無(wú)分組排隊(duì)原那么著絲粒類型相同，相對(duì)長(zhǎng)度相近的分一組同一組的按染色體長(zhǎng)短順序配對(duì)排列各指數(shù)相同的染色體配為一對(duì)可根據(jù)隨體的有無(wú)進(jìn)行配對(duì)將染色體按長(zhǎng)短排隊(duì)，短臂向上實(shí)驗(yàn)用品毫米尺、剪刀、膠水、計(jì)算器、白紙人染色體放大照片染色體編號(hào)(人X染色體)記述一特定帶時(shí)，需要寫(xiě)明4個(gè)內(nèi)容：染色體號(hào)，長(zhǎng)短臂，區(qū)的號(hào)序和帶的號(hào)序。這些內(nèi)容按順序?qū)?，不用間隔或加標(biāo)點(diǎn)。如果某一帶被再細(xì)分，在原帶號(hào)數(shù)后加一小數(shù)點(diǎn)，編號(hào)原那么仍按從著絲粒往臂端序貫編號(hào)。如1p31.2代表一號(hào)染色體短臂3區(qū)1帶第2亞帶核型描述首先列出染色體總數(shù)，然后是性染色體組成，接著列出異常的染色體數(shù)目或形態(tài)。以下統(tǒng)一的命名符號(hào)：A-G染色體組的名稱1-22染色體編號(hào)X,Y性染色體del缺失der結(jié)構(gòu)重排的染色體dup重復(fù)inv倒位t易位+/-在染色體符號(hào)前表示染色體增加或減少，在染色體符號(hào)后表示染色體多出或缺少一局部實(shí)驗(yàn)步驟計(jì)數(shù)，沿邊緣剪下染色體，編號(hào)初步目測(cè)配對(duì)，分組測(cè)量長(zhǎng)度，計(jì)算相對(duì)長(zhǎng)度、著絲粒指數(shù)、臂比，相同的染色體間配對(duì)將配對(duì)好的染色體排列并粘貼在紙上，每一組下面畫(huà)一橫線，在兩端注明起止號(hào)，并在橫線下的中部寫(xiě)明A-G組號(hào)，染色體從大到小編為1-22號(hào)，性染色體單獨(dú)列為一組思考題請(qǐng)描述核型：45，XY,der(14;21)(q21;q14)47，XY,+21開(kāi)展歷史FISH的根本原理熒光原位雜交〔FISH〕FISH具有其不可比較的優(yōu)點(diǎn)：1.操作簡(jiǎn)便，探針標(biāo)記后穩(wěn)定，一次標(biāo)記后可使用二年。2.方法敏感，能迅速得到結(jié)果。3.在同一標(biāo)本上，可同時(shí)幾種不同探針。4.不僅可用于分裂細(xì)胞染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)變化的研究，而且還可用于靜止期細(xì)胞的染色體數(shù)量及基因改變的研究。FISH選用的標(biāo)本可以是分裂期細(xì)胞染色體也可以是間期細(xì)胞。間期細(xì)胞可以是冰凍切片，也可以是細(xì)胞滴片或印片。生物素〔Biotin〕地高辛〔digoxigenin〕,dinitrophenyl(DNP)，aminoacetylfluorene(AAF)均可用于探針標(biāo)記。直接標(biāo)記和間接標(biāo)記用生物素或地高辛標(biāo)記稱為間接標(biāo)記,雜交后需要通過(guò)免疫熒光抗體檢測(cè)方能看到熒光信號(hào),因而步驟較多,操作麻煩,其優(yōu)點(diǎn)是在信號(hào)較弱或較小時(shí)可經(jīng)抗原抗體反響擴(kuò)大直接用熒光素標(biāo)記DNA的方法稱為直接標(biāo)記.由于直接標(biāo)記的探針雜交后可馬上觀察到熒光信號(hào),省去了煩瑣的免疫熒光反響,不再需要購(gòu)置熒光抗體,也由于近年來(lái)熒光素的亮度和抗淬滅性的不斷改進(jìn)和提高,直接標(biāo)記的熒光探針越來(lái)越成為首選,并采用多種不同顏色的熒光,方便在同一標(biāo)本上同時(shí)檢測(cè)多種異常.其熒光強(qiáng)度和信號(hào)大小都易于在普通熒光顯微鏡下觀察,使FISH過(guò)程變得簡(jiǎn)便而易于操作.探針標(biāo)記染色體著絲粒熒光染色體端粒熒光多色信號(hào)采集常規(guī)的熒光顯微鏡的熒光顯微鏡的照像，彩色膠片不易屢次曝光，限制了這種聯(lián)合標(biāo)記探針的應(yīng)用，使用CCD照像系統(tǒng)，先分別屢次攝取灰色的影像關(guān)儲(chǔ)存在計(jì)算機(jī)內(nèi)，而后冠以人為的顏色，運(yùn)用軟件系統(tǒng)融合各次得到的影像，最終形成一個(gè)復(fù)合的多顏色的圖像。多色熒光原位雜交〔M-FISH〕多色熒光染色體顯帶〔Rx-FISH〕比較基因組雜交〔CGH〕CGH不需要制備患者的染色體標(biāo)本,只需采用腫瘤患者的基因組DNA和正常人的基因組DNA作為探針，與正常人的中期染色體分裂相進(jìn)行雜交。比較兩種探針?biāo)鶚?biāo)的熒光信號(hào)的強(qiáng)度比率來(lái)判斷腫瘤患者的DNA是否存在缺失、增加或復(fù)制。因而CGH最適合于檢測(cè)實(shí)體瘤,淋巴瘤等不易得到高質(zhì)量染色體標(biāo)本的疾病.CGH另一無(wú)法替代的優(yōu)點(diǎn)是,它可在一次雜交中檢測(cè)整個(gè)基因遺傳物質(zhì)的增加或減少,但精度有限,對(duì)微小的擴(kuò)增或缺失檢測(cè)不出,僅適用于對(duì)整個(gè)基因組進(jìn)行篩查.CGH也無(wú)法發(fā)現(xiàn)平衡染色體易位.FISH的臨床運(yùn)用在細(xì)胞遺傳學(xué)檢查中，重復(fù)序列的探針應(yīng)用最多，它們是α衛(wèi)星DNA、β衛(wèi)星DNA和經(jīng)典衛(wèi)星DNA探針。α衛(wèi)星DNA探針主要檢測(cè)人染色體的著絲粒。β衛(wèi)星DNA位于頂端著絲粒染色體及染色體的異染色質(zhì)周?chē)?。?jīng)典衛(wèi)星DNA有著AATGG短片段，位于染色體1、9、15、16和Y染色體長(zhǎng)臂異染色質(zhì)周?chē)?，后兩處探針除了可用于染色體數(shù)目檢查外，還可用于上述部位精細(xì)改變的檢查。FISH的臨床運(yùn)用白血病檢測(cè)中常用