考點30 微生物的利用-2022年高考生物一輪復(fù)習(xí)考點（浙江專用）

考點30微生物的利用

【重要考向】

一、培養(yǎng)基及其制備方法分析

二、無菌技術(shù)的操作

三、大腸桿菌的純化方法及過程分析

四、選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析

五、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

培養(yǎng)基及其制備方法分析

培養(yǎng)基

（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。

（2）營養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。此外，還需要滿足微生物生長對

出、氧氣以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的耍求。

（3）種類：按照物理性質(zhì)可分為液隹培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基的配制原則

（1）目的要明確：配制時應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。

（2）營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。

（3）pH要適宜：細菌為6.5?7.5,放線菌為7.5?8.5,真菌為5.0?6.0,培養(yǎng)不同微生

物所需pH不同。

微生物對主要營養(yǎng)物質(zhì)的需求特點

不同種類的微生物代謝特點不同，因此對培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的需求也不同。

（1）自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機鹽，碳源可來自大氣中的CO2,氮源可由

含氮無機鹽提供。

（2）異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供，氮源

也主要是由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。

【典例】

1.下列有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)與分離實驗的操作，合理的是（

A.用無菌水配制LB培養(yǎng)基

B.培養(yǎng)基的pH值應(yīng)調(diào)至中性偏堿

C.應(yīng)加入飼養(yǎng)層細胞以支持生長

D.通常在培養(yǎng)基中加入抗生素來消滅雜菌

【答案】B

【分析】

培養(yǎng)大腸桿菌常用LB培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的成分為蛋白陳、酵母膏、NaCI,加蒸儲水溶解，調(diào)

節(jié)pH值至中性偏堿.

【詳解】

A、配制LB培養(yǎng)基應(yīng)用蒸儲水，A錯誤；

B、因為大腸桿菌適宜在中性偏堿的環(huán)境中生存，故培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基，pH值應(yīng)調(diào)至中

性偏堿，B正確；

C、大腸桿菌可直接利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)生長，不需要飼養(yǎng)層細胞，C錯誤：

D、在培養(yǎng)基中加入抗生素會殺死細菌，大腸桿菌也會被殺死，D錯誤。

故選B?

2.培養(yǎng)基是指供給微生物、植物或動物細胞（或組織）生長繁殖的，由不同物質(zhì)組合配制

而成的營養(yǎng)基質(zhì)。針對下表中的三組培養(yǎng)基，下列敘述錯誤的是（）

組別培養(yǎng)基成分

a蛋白陳、酵母提取物、甘露醇、水

b葡萄糖、尿素、NaCI、K2Hpe>4、酚紅、瓊脂糖

c礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、甘氨酸、水、瓊脂

A.a組培養(yǎng)基可用于醋化醋桿菌的擴大培養(yǎng)，該培養(yǎng)過程需用到磁力攪拌器和搖床

B.b組培養(yǎng)基可用于分離含胭酶的微生物，該實驗中需用全營養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基作對照

C.c組培養(yǎng)基可用于誘導(dǎo)植物愈傷組織再分化，添加的植物生長調(diào)節(jié)劑需事先過濾滅菌

D.上述培養(yǎng)基不僅要為相應(yīng)的細胞提供營養(yǎng)物質(zhì)還要為其生存和繁殖提供適宜的環(huán)境

【答案】C

【分析】

L培養(yǎng)基一般含有水、碳源、氮源、無機鹽等。

2.常用的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。

3.常用的滅菌方法：干熱滅菌法、灼燒滅菌法、高壓蒸汽滅菌法。

4.篩選目的微生物時應(yīng)該使用只有目的微生物能夠生存，而其他微生物不能生存的選擇培養(yǎng)

基。選擇培養(yǎng)基是指通過培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要

的種類在這種培養(yǎng)基上是不能生存的。

5.從土壤中分離以尿素為氮源的細菌的實驗流程：土壤取樣3樣品的稀釋少將稀釋液涂布到

以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上好挑選能生長的菌落1鑒定。

6.分解尿素的細菌的鑒定細菌合成的麻酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強.在以尿

素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅。

【詳解】

A、a組培養(yǎng)基可用于醋化醋桿菌的擴大培養(yǎng)，磁力攪拌器和搖床都是擴大菌落與其所需要

的營養(yǎng)物質(zhì)的接觸面積，利于菌落的培養(yǎng)，A正確；

B、b組培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，含版酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，其它微生物在

該培養(yǎng)基上因缺乏氮源而不能生長，可用于分離含胭醐的微生物，該實驗中需用全營養(yǎng)LB

固體培養(yǎng)基作對照，通過對照可以判斷選擇培養(yǎng)基的選擇作用，B正確；

C、c組培養(yǎng)基可以用來誘導(dǎo)植物愈傷組織再分化，添加的植物生長調(diào)節(jié)劑不能過濾滅菌，

易被分解，C錯誤；

D、上述培養(yǎng)基不僅要為相應(yīng)的細胞提供營養(yǎng)物質(zhì)，還要為其生存和繁殖提供適宜的環(huán)境，

D正確。

故選C.

3.下列有關(guān)分解尿素的細菌，說法正確的是（）

A.尿素固體培養(yǎng)基的平板中只有少量肉眼可見的菌體

B.篩選分解尿素的細菌時，培養(yǎng)基中唯一的營養(yǎng)物質(zhì)是尿素

C.加有酚紅的尿素培養(yǎng)基，兼有選擇與鑒別目標(biāo)菌種的功能

D.胭酶需要經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的加工后才具有生物學(xué)活性

【答案】C

【分析】

培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無機鹽、碳源、氮源等。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚

紅指示劑，培養(yǎng)某種細菌后，若PH升高，指示劑將變紅；胭酶能夠?qū)⒛蛩胤纸獬砂焙虲02。

【詳解】

A、尿素固體培養(yǎng)基的平板中會形成一些肉眼可見的菌落，A錯誤；

B、篩選分解尿素的細菌時，尿素是唯一氮源，但不是培養(yǎng)基中唯一的營養(yǎng)物質(zhì)，B錯誤；

C、在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細菌后，如果pH升高指示

劑將變紅，可以初步鑒定該種細菌能夠分解尿素，所以加有酚紅的尿素培養(yǎng)基，兼有選擇與

鑒別目標(biāo)菌種的功能，C正確；

D、胭能是細菌合成分泌的，不需要經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的加工就具有生物學(xué)活性，D錯

誤。

故選C。

4.下列關(guān)于多種培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是（）

A.用于"菊花組織培養(yǎng)”的發(fā)芽培養(yǎng)基與生根培養(yǎng)基濃度有差異

B.尿素固體培養(yǎng)基是將尿素涂布到固體平面培養(yǎng)基上制成的

C.醋化醋桿菌擴大培養(yǎng)液中甘露醇的主要作用是提供碳源

D.LB培養(yǎng)基中的蛋白陳和牛肉膏既作碳源，又作氮源

【答案】B

【分析】

1.植物組織培養(yǎng)程序植物組織培養(yǎng)的一般程序是：

⑴配制含有適當(dāng)營養(yǎng)物質(zhì)和植物生長調(diào)節(jié)劑的含0.7%~1%瓊脂的培養(yǎng)基，倒在滅菌試管中

凝固成半固體；

（2）從消毒的根、莖或葉上切取一些小組織塊；

⑶將組織塊放在固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，獲得愈傷組織；

⑷以適當(dāng)配比的營養(yǎng)物質(zhì)和生長調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)愈傷組織，直到再生出新植株。

通過調(diào)節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)和生長調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)配比，可以從這種愈傷組織誘導(dǎo)出芽和根的頂端分生

組織，并可由此再生出新的植株。

2.在100mL三角瓶中配制好25ml尿素固體培養(yǎng)基（0.025g葡萄糖,0.12g,NaCI,0.12gK2Hpe）4,

0.25mg酚紅和0.5g瓊脂糖，水15mL）加上封口膜后滅菌，待冷卻至60?時，加入通過G6

玻璃漏斗過濾（使之無菌）的10mL尿素溶液搖動、混合均勻后待用。

【詳解】

A、由分析可知，用于“菊花組織培養(yǎng)”的發(fā)芽培養(yǎng)基與生根培養(yǎng)基濃度有差異，A正確；

B、由分析可知，配制尿素固體培養(yǎng)基時，在對培養(yǎng)基滅菌后將經(jīng)過滅菌的尿素溶液倒入其

中，經(jīng)過混合均勻后，再進行倒平板操作，B錯誤；

C、醋化醋桿菌擴大培養(yǎng)液中甘露醇的主要作用是提供碳源，而且也可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透

壓，C正確；

D、由于蛋白陳和牛肉膏既含有碳元素，也含有氮元素，故LB培養(yǎng)基中的蛋白陳和牛肉膏

既作碳源，又作氮源，D正確。

故選Bo

5.培養(yǎng)微生物必須進行無菌操作。下列敘述正確的是（）

A.分離葡萄表面的微生物時，可用無菌水浸泡葡萄后涂布分離

B.玻璃刮刀從70%酒精取出，待酒精揮發(fā)后進行涂布操作

C.瓊脂糖加熱會被破壞，可用G6玻璃砂漏斗過濾除菌

D.G6玻璃砂漏斗使用前需用鹽酸浸泡法進行滅菌

【答案】A

【分析】

微生物培養(yǎng)時的無菌操作中滅菌方法的選擇：1、高壓蒸汽滅菌：通常用于培養(yǎng)基和許多器

具的滅菌。如果培養(yǎng)基中含葡萄糖，為避免其碳化，應(yīng)當(dāng)采用500g/cm2壓力（90團以上）高

壓蒸汽滅菌30min。若培養(yǎng)基中有不能加熱的物質(zhì)，如尿素等，則該培養(yǎng)基其他成分正常高

壓蒸汽滅菌，而尿素等過濾除菌后加入。2、干熱滅菌：用于玻璃器皿的滅菌。3、灼燒滅菌：

用于剪刀、鑲子、解剖刀、接種環(huán)等的滅菌。4、過濾除菌：常用玻璃砂芯抽濾除菌，用于

不能加熱的成分的滅菌。

【詳解】

A、分離葡萄表面的微生物時，可用無菌水浸泡葡萄后收集微生物并采用涂布分離法獲取單

-菌體，A正確；

B、將保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精燈火焰上，待刮刀上火焰熄滅后使用，B錯誤；

C、尿素加熱會分解所以只能用G6玻璃砂漏斗過濾除菌，而瓊脂糖常用高壓蒸汽滅菌，C錯

誤：

D、G6玻璃砂漏斗使用前需用高壓蒸汽滅菌法滅菌，使用后需用lmol/L的HCI浸泡，并抽濾

去酸，再用蒸儲水洗至洗出液呈中性，D錯誤。

故選A。

無菌技術(shù)的操作

無菌技術(shù)

（1）含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。

（2）關(guān)鍵：防止外來雜眉員的入侵。

（3）不同對象的無菌操子E方法（連線）

方法類型1對象

a冽燒滅菌\/I.接種針（環(huán)）

汗熱滅菌⑦消

d

>5</\X/n.培養(yǎng)皿

d）巴氏消毒，滅菌冬

3）紫外線///\\in.操作者的

uizw力?%//\衣著和手

G）化學(xué)藥物//\

（§）高壓蒸汽滅菌w.水源地

消毒和滅菌的辨析

項目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍

煮沸消毒法日常用品

較為溫和的僅殺死物體表面或

巴氏消毒法不耐高溫的液體

消毒物理或化學(xué)內(nèi)部的部分對人體

化學(xué)藥劑消用酒精擦拭雙手，用

方法有害的微生物

毒法氯氣消毒水源

灼燒滅菌法接種工具

殺死物體內(nèi)外所有

強烈的理化干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具

滅菌的微生物，包括芽

因素高壓蒸汽滅

狗和抱子培養(yǎng)基及容器的滅菌

菌法

【典例】

6.下列關(guān)于無菌操作的敘述，正確的是（）

A.外植體用次氯酸鈉消毒后接種到培養(yǎng)基中

B.動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)都需無菌操作

C.在超凈臺操作時需打開紫外燈和過濾風(fēng)

D.在制作果酒和果醋時必須進行無菌操作

【答案】B

【分析】

實驗室常用的滅菌方法：

（1）灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈

火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易

被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。

（2）干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬

用具等，可以采用這種方法滅菌。

（3）高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達到良好的滅

菌效果，一般在壓力為lOOkPa,溫度為121團的條件下，維持15?30min。

【詳解】

A、外植體用次氯酸鈉消毒后需要再用無菌水沖洗3~5次才能接種到培養(yǎng)基中，A錯誤；

B、動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)都需要無菌操作，防止雜菌污染，B正確；

C、在超凈臺操作時需關(guān)閉紫外燈，避免對外植體造成影響，同時也避免對操作者造成傷害，

且需要打開過濾風(fēng)，C錯誤；

D、在制作果酒和果醋時為了防止菌種受到傷害，不需要進行無菌操作，D錯誤。

故選B。

7.為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況，某小組同學(xué)進行了相關(guān)實驗，其中包括制備培養(yǎng)基、

滅菌、接種、培養(yǎng)及菌落觀察計數(shù)。下列敘述錯誤的是（）

A.LB培養(yǎng)基中的蛋白陳可為細菌提供碳源和氮源

B.配制好的培養(yǎng)基，分裝到錐形瓶，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌

C.培養(yǎng)接種無菌水的平板作為對照，可檢驗培養(yǎng)基的滅菌是否合格

D.若實驗組平板上出現(xiàn)形態(tài)和顏色不同的菌落，說明湖水遭受嚴(yán)重污染

【答案】D

【分析】

1、微生物的培養(yǎng)基一般都要含有水、碳源、氮源、無機鹽，如蛋白豚在培養(yǎng)基中主要作為

氮源，淀粉在培養(yǎng)基中主要作為碳源。

2、實驗室的滅菌方法一般有灼燒滅菌（適合于接種工具的滅菌）、干熱滅菌（適合于耐高溫

的、需要保持干燥的物品的滅菌）、高壓蒸汽滅菌（適合于培養(yǎng)基等物體的滅菌）。

【詳解】

A、LB培養(yǎng)基是細菌培養(yǎng)基，其中的蛋白陳可為細菌提供碳源、氮源和維生素，A正確；

B、配制好的培養(yǎng)基，分裝到錐形瓶，加上棉塞，包上牛皮紙，用皮筋勒緊，放入高壓蒸汽

滅菌鍋滅菌，B正確：

C、要使該實驗所得結(jié)果可靠，需要在平板上接種無菌水作為對照進行實驗，可檢驗培養(yǎng)基

的滅菌是否合格，若有菌落產(chǎn)生，則說明滅菌不合格，C正確；

D、若實驗組平板上出現(xiàn)形態(tài)和顏色不同的菌落，說明湖水中存在不同種類的微生物，但不

能判斷是否遭受嚴(yán)重污染，D錯誤。

故選D。

8.下列關(guān)于無菌操作的敘述，正確的是（）

A.制備培養(yǎng)基時，滅菌后需調(diào)節(jié)pH

B.加入培養(yǎng)基中的指示劑不需要滅菌

C.在超凈臺操作時需打開紫外燈和過濾風(fēng)

D.對動物培養(yǎng)基中的血清進行過濾除菌

【答案】D

【分析】

1,常用的滅菌方法：干熱滅菌法、灼燒滅菌法、高壓蒸汽滅菌法。

2、具體操作:

（1）對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。

（2）將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌。

（3）為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行。

（4）實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。

【詳解】

A、制備培養(yǎng)基時，先調(diào)節(jié)pH再滅菌，A錯誤；

B、指示劑可能混有微生物，故加入培養(yǎng)基前需要滅菌，B錯誤；

C、在超凈臺操作前需要打開紫外燈，但在超凈臺操作時不能打開紫外燈，C錯誤；

D、避免滅菌的強烈的理化手段破壞培養(yǎng)液中血清等物質(zhì)的活性，所以對動物培養(yǎng)基中的血

清進行過濾除菌，D正確。

故選D?

9.下列關(guān)于實驗材料及用法的敘述，正確的是（）

A.提取菠菜葉光合色素時，需加入少許二氧化硅、碳酸鈣和50%乙醇

B.觀察花生子葉細胞的脂肪顆粒時，需用50%乙醇洗去多余的蘇丹包染液

C.涂布法分離細菌時，要將保存在50%乙醇中的玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒

D.植物組培中，外植體可先后放入90%乙醇、5%次氯酸鈉和無菌水中消毒

【答案】B

【分析】

1、綠葉中的色素溶于有機溶劑而不溶于水；

2、玻璃刮刀要放在盛有70%乙醇中；

3、鏡檢花生子葉細胞的脂肪顆粒時，需用50%乙醉，洗去多余的染料。

【詳解】

A、提取菠菜葉光合色素時，需加入少許二氧化硅、碳酸鈣和95%乙醇，而不是50%的乙醇，

A錯誤；

B、觀察花生子葉細胞的脂肪顆粒時，需用50%乙醉洗去多余的蘇丹回染液，蘇丹回染液能使

細胞中的油脂呈橙黃色，B正確；

C、涂布法分離細菌時，要將保存在70%乙醇中的玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒，而不是

50%乙醇，C錯誤；

D、植物組培中，外植體可先后放入體積分?jǐn)?shù)為70%乙醵、體積分?jǐn)?shù)為20%次氯酸鈉和無菌

水中消毒，D錯誤。

故選Bo

10.溶血性尿毒癥綜合征（HUS）是一類急性血管內(nèi)溶血（即紅細胞破裂）性貧血伴腎功能

衰竭的綜合征，表現(xiàn)為微血管病性溶血性貧血、血小板減少和急性腎衰竭三聯(lián)征，引起該病

的病因尚不明確，細菌中的大腸桿菌、痢疾桿菌的感染、系統(tǒng)性紅斑狼瘡都可引起該病的發(fā)

生。下列關(guān)于此病的說法錯誤的是（）

A.HUS患兒血漿中會含有血紅蛋白

B.大腸桿菌可能會引發(fā)HUS,該病原體在實驗室培養(yǎng)時需用到活的動物細胞

C.HUS的特征之一為急性腎衰竭，可能會導(dǎo)致患者細胞外液滲透壓改變

D.HUS患者發(fā)生腎衰竭后，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)會被破壞，患者的正常生存會受到影響

【答案】B

【分析】

HUS患者體內(nèi)血漿中因紅細胞破裂會出現(xiàn)血紅蛋白；急性腎衰竭使腎小球濾過率下降，引起

氮質(zhì)廢物體內(nèi)儲留，水、電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂，患者內(nèi)環(huán)境被破壞。

【詳解】

A、HUS患者會出現(xiàn)血管內(nèi)溶血，表現(xiàn)為紅細胞破裂，紅細胞破裂后內(nèi)含的血紅蛋白會進入

血漿中，A正確；

B、使人患出血性腸炎的大腸桿菌具有細胞結(jié)構(gòu)，能獨立生存，培養(yǎng)時無需用活的動物細胞，

B錯誤；

C、HUS的特征之一為急性腎衰竭，急性腎衰竭可能會引發(fā)少尿或無尿，內(nèi)環(huán)境中多余的水

分和無機鹽無法通過尿液正常排出到體外，細胞外液滲透壓會發(fā)生改變，C正確；

D、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)是機體進行正常生命活動的必要條件，需要多系統(tǒng)的共同調(diào)節(jié)，若發(fā)生腎

哀竭，機體水鹽平衡調(diào)節(jié)功能會被破壞，進而造成內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)被破壞，D正確。

故選Bo

大腸桿菌的純化方法及過程分析

大腸桿菌的純化培養(yǎng)

（1）制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基

①操作步驟

[gg-^[W]->1倒平板I

②倒平板的方法及注意事項

a.請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：丙T乙T甲T丁。

b.甲、乙、丙中的滅菌方法是灼燒滅菌。

C.丁中的操作需要等待平板冷卻凝固才能進行。

（2）純化大腸桿菌的方法

①純化培養(yǎng)原理:想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個細菌繁殖而來的肉眼可見的菌落,

即可獲得較純的菌種。

②純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟是接種。

③常用的微生物接種方法有兩種

a.平板劃線法：是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集

的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

b.稀釋涂布平板法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌

液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。

系列稀釋操作（如圖所示）：

涂布平板操作（如圖所示）:

4^2"^/

取少量菌液（不yn

超過0.1mL）,滴爪―"

加到培養(yǎng)基表面⑷&用涂布器將菌

將涂布器浸液均勻地涂布

在盛有酒精將沾有少最酒精在培養(yǎng)基表面

的燒杯中的涂布器在火焰涂布時可轉(zhuǎn)動

上引燃,待酒精燃培養(yǎng)皿,使菌

盡后,冷卻8~10s液涂布均勻

（3）菌種的保存方法

①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。

②對于需要長期保存的菌種，可以采用苴螳邀的方法。

兩種純化細菌方法的比較

項目優(yōu)點缺點適用范圍

可以觀察菌落特征，

平板劃線法不能計數(shù)適用于好氧菌

對混合菌進行分離

吸收量較少，較

可以計數(shù)，可以觀察麻煩，平板不干適用于厭氧菌和兼性

稀釋涂布平板法

菌落特征燥效果不好，容厭氧菌

易蔓延

【典例】

11.研究人員將1個含14N-DNA的大腸桿菌轉(zhuǎn)移到以15NH4a為唯一氮源的培養(yǎng)液中，培

養(yǎng)24h后提取子代大腸桿菌的DNA。將DNA解開雙螺旋，變成單鏈；然后進行密度梯度離

心，試管中出現(xiàn)兩種條帶（如圖）。下列說法錯誤的是（）

密度低

條帶1-條帶l=j

條帶2?

密度高1

01/87/8

DNA單璉的含量

A.由結(jié)果可推知DNA在24h內(nèi)連續(xù)分裂3次

B.解開DNA雙螺旋的實質(zhì)是破壞核甘酸之間的氫鍵

C.根據(jù)條帶的數(shù)目和位置可以確定DNA的復(fù)制方式為全保留復(fù)制

D.若直接將子代DNA進行密度梯度離心能得到中帶和重帶

【答案】C

【分析】

DNA的復(fù)制是半保留復(fù)制，即以親代DNA分子的每條鏈為模板，合成相應(yīng)的子鏈，子鏈與

對應(yīng)的母鏈形成新的DNA分子，這樣一個DNA分子經(jīng)復(fù)制形成兩個子代DNA分子，且每個

子代DNA分子都含有一條母鏈。根據(jù)題意和圖示分析可知：將DNA被"N標(biāo)記的大腸桿菌

移到15|\|培養(yǎng)基中培養(yǎng)，因合成DNA的原料中含15N,所以新合成的DNA鏈均含15火根據(jù)

半保留復(fù)制的特點，第一代的2個DNA分子都應(yīng)一條鏈含15N,一條鏈含“N。

【詳解】

A、由于i&N單鏈：15N單鏈=1：7,說明DNA復(fù)制了3次，可推知該細菌的細胞周期大約為

24+3=8h,A正確；

B、DNA復(fù)制的第一步是在解旋前的作用下使兩條雙鏈打開，連接兩條鏈的化學(xué)鍵是氫鍵,

所以解開DNA雙螺旋的實質(zhì)是破壞核甘酸之間的氫鍵，B正確；

C、由于DNA經(jīng)過熱變性后解開了雙螺旋，變成單鏈，所以根據(jù)條帶的數(shù)目和位置只能判斷

DNA單鏈的標(biāo)記情況，但無法判斷DNA的復(fù)制方式，C錯誤；

D、經(jīng)過分析可知，DNA復(fù)制3次，有2個DNA鏈?zhǔn)丘Ш?N,在中帶；有6個DNA鏈都

是15N的，在重帶，D正確。

故選C。

12.下列關(guān)于大腸桿菌的純化實驗的有關(guān)敘述中，正確的是（）

A.使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，在操作過程中不再滅菌

B.打開含菌種的試管，需通過火焰滅菌，取出菌種后，需馬上塞上棉塞

C.將沾有菌種的接種環(huán)通過酒精燈火焰后迅速仰入平板內(nèi)，劃線即可

D.最后將平板倒置，放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

【答案】D

【分析】

平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分

散到培養(yǎng)基表面，其操作步驟是：①將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒宜至燒紅；②在酒精燈

火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞：③將菌種試管口通過火焰達到消

滅試管口雜菌的目的；④將冷卻的接種環(huán)伸入到菌液中取出一環(huán)菌種；⑤將菌種試管口再

次通過火焰后塞上棉塞；⑥將皿蓋打開一條縫隙，把接種環(huán)仰入平板內(nèi)劃3?5條平行線,

蓋上皿蓋，不要劃破培養(yǎng)基；⑦灼燒接種環(huán)，冷卻后從第一區(qū)劃線末端開始向第二區(qū)域內(nèi)

劃線。重復(fù)上述過程，完成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線，注意不要將第五區(qū)的劃線與第一區(qū)劃線

相連；⑧將平板倒置放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

【詳解】

A、平板劃線過程中，接種環(huán)在每次劃線之前和之后均需要灼燒滅菌，A錯誤；

B、打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后還需通過火焰滅菌，再塞上棉塞，B錯

誤；

C、將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，連續(xù)劃三至五條平行線，然后蓋上培養(yǎng)皿蓋，注

意不要劃破培養(yǎng)基，C錯誤；

D、劃線操作結(jié)束后，將平板倒置，放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，D正確。

故選D。

13.下列關(guān)于微生物培養(yǎng)基的敘述正確的是（）

A.在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入伊紅-美藍染液可以鑒別纖維素分解菌

B.酚紅指示劑可以用來鑒別大腸桿菌

C.在無氮培養(yǎng)基中可以篩選自養(yǎng)微生物

D.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中可以分離出分解尿素的細菌

【答案】D

【分析】

1、分離微生物的一般步驟是：樣品取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。

2、配制培養(yǎng)基時可根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求，加入某些物質(zhì)或除去某些

營養(yǎng)物質(zhì)抑制其他微生物的生長，也可以根據(jù)某些微生物對一些物理、化學(xué)因素的抗性，在

培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，從而篩選出待定的微生物，這種培養(yǎng)基叫做選擇培養(yǎng)基。

【詳解】

A、剛果紅染液可以與纖維素反應(yīng)呈紅色，纖維素分解菌能夠?qū)⒗w維素分解而出現(xiàn)無色的透

明圈，說明該細菌能分解纖維素，A錯誤；

B、伊紅美藍指示劑能夠?qū)Ｒ昏b別大腸桿菌菌落，其菌落呈藍紫色或黑色且具有金屬光澤，

B錯誤：

C、無氮培養(yǎng)基可篩選出能自身固氮的微生物，如圓褐固氮菌，C錯誤；

D、將一定稀釋度的樣品接種在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，并在適宜的條件下培養(yǎng)，分

解尿素的微生物能在該培養(yǎng)基上生長繁殖，而不能利用尿素的微生物則不能生長繁殖，故在

以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中可以分離出分解尿素的細菌，D正確。

故選D。

14.椰毒假單胞菌是一種耐溫性極強的細菌，對人體的肝、腎等器官會造成較大危害，下列

相關(guān)敘述正確的是（）

A.可通過在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得椰毒假單胞菌的單菌落

B.利用豆芽汁配制的天然培養(yǎng)基是培養(yǎng)椰毒假單胞菌最適宜的培養(yǎng)基

C.培養(yǎng)椰毒假單胞菌時可將接種好的培養(yǎng)皿倒置于4團冰箱中

D.利用涂布分離法測定椰毒假單胞菌的密度較實際值低

【答案】D

【分析】

涂布分離法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單

個菌落。

【詳解】

A、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)無法獲得椰毒假單胞菌的單菌落，A錯誤；

B、利用豆芽汁配制的天然培養(yǎng)基是培養(yǎng)霉菌最理想的培養(yǎng)基，椰毒假單胞菌屬于細菌，B

錯誤；

C、培養(yǎng)椰毒假單胞菌時可將接種好的培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中,4回冰箱常用于菌種保存，

C錯誤；

D、當(dāng)兩個或兩個以上的細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落，故利用涂布分離法測

定椰毒假單胞菌的密度時，所得數(shù)據(jù)較實際值低，D正確。

故選D?

15.培養(yǎng)不同類型的細胞需要不同的培養(yǎng)基，下列敘述錯誤的是（)

A.細菌培養(yǎng)基通常加入氯化鈉以維持一定的滲透壓

B.MS培養(yǎng)基可以先配置成高濃度的母液，用時再稀釋

C.動物細胞培養(yǎng)基中通常加入血清、激素等以提高細胞克隆形成率

D.各種培養(yǎng)基在使用前都需要經(jīng)過高壓蒸汽滅菌處理

【答案】D

【分析】

1、微生物培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成:①各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮

源和無機鹽；②不同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。

2、動物細胞培養(yǎng)的條件：（1）無菌無毒的環(huán)境，可以進行滅菌處理和加入一定量的抗生素，

定期更換培養(yǎng)液，避免代謝產(chǎn)物的積累乂2）營養(yǎng)條件:添加糖、氨基酸、促生長因子、無機

鹽和微量元素等，除外一般還需要添加血清、血漿等；（3）溫度和pH值；（4）氣體環(huán)境:95%的

空氣和5%的二氧化碳。

【詳解】

A、細菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基中要加入一定量的氯化鈉，以維持一定的滲透壓，A正確；

B、在配制MS培養(yǎng)基時，常先配成高濃度的母液后用時稀釋，這樣在配制培養(yǎng)基時可以減

小加入微量物質(zhì)時出現(xiàn)的誤差，B正確；

C、為了提高動物成纖維細胞克隆形成率，可以選擇適宜的培養(yǎng)基、添加牛血清、以滋養(yǎng)細

胞支持生長等措施，C正確；

D、有些培養(yǎng)基（不耐溫的）只需要進行消毒處理，以避免破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)，D錯

誤。

故選D。

@選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析

選擇培養(yǎng)基的制作方法

（1）在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗性，

在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物，促進所需要的微生物生長，如培

養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，

從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時可抑制細菌、放線菌的生長，從

而分離得到酵母菌和霉菌。

（2）通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可分離自

生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存：培養(yǎng)基中若缺乏有機碳源

則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機物生存。

（3）利用培養(yǎng)基的特定化學(xué)成分分離特定微生物：如當(dāng)石油是唯一碳源時，可抑制不能利

用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，從而分離出能消除石油污染

的微生物。

（4）通過某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時

易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因

酶失活而無法生存。

【典例】

16.植物基因工程可以改造農(nóng)作物性狀，使農(nóng)作物變得更加高產(chǎn)。如圖是培育良種水稻的有

關(guān)原理和步驟，有關(guān)敘述錯誤的是（）

抗除草劑基因

轉(zhuǎn)基因植株

抗蟲基因

A.圖中表達載體中的T-DNA插入外源基因后將失去作用

B.圖中②過程需要在無菌環(huán)境下用Ca2+處理土壤農(nóng)桿菌

C.需要用除草劑檢測轉(zhuǎn)基因植株是否具有抗除草劑性狀

D.該過程需要用到固體和液體培養(yǎng)基

【答案】A

【分析】

1、基因表達載體包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動子和終止子。標(biāo)記基因的作用是為了鑒別

受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。

2、將目的基因?qū)胛⑸矬w內(nèi)，常采用的方法是用一定濃度CaCL溶液處理微生物，提高細

胞攝取外源治理DNA的能力，該方法為感受態(tài)細胞法。

3、圖中①代表構(gòu)建基因表達載體，②代表將含有目的基因的Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，③代表

用農(nóng)桿菌侵染植物愈傷組織細胞，④代表再分化，⑤代表植物生長發(fā)育為植株的過程。

【詳解】

A、T-DNA可將T-DNA之間的DNA序列轉(zhuǎn)移并整合至受體細胞的染色體DNA上，使目的基

因能夠穩(wěn)定遺傳，故T-DNA插入外源基因后不會失去作用，A錯誤；

B、用Ca2+處理農(nóng)桿菌，使農(nóng)桿菌處于感受態(tài)，利于農(nóng)桿菌吸收目的基因完成轉(zhuǎn)化過程，故

圖中②將載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌過程需要在無菌環(huán)境卜用Ca2+處理土壤農(nóng)桿菌，B正確；

C、為從個體水平上檢測圖中植株是否具有抗除草劑性狀，可采用的方法是用相應(yīng)除草劑噴

灑待測植株，C正確；

D、篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌時用的是固體培養(yǎng)基，擴大培養(yǎng)時應(yīng)該用液體培養(yǎng)基，故該過

程需要用到固體和液體培養(yǎng)基，D正確。

故選Ao

17.將甲、乙、丙和丁四種細菌分別接種到A、B、C、D四種培養(yǎng)液中，經(jīng)培養(yǎng)后分別測得

它們繁殖一代所需的時間，結(jié)果如下表所示：

繁殖一代所需時間（分鐘）

培養(yǎng)液組別培養(yǎng)液成分

甲乙丙T

葡萄糖、、、—

ANaCIP04%MgSO443100—

葡萄糖、、3

NaCIPO4\MgSOc8

B2840

種氨基酸

葡萄糖、、

NaCIP0?\MgSO4>19

C252580—

種氨基酸

3

DNaCLMgSOcN03\PO4"———80

注：一表示細菌沒有生長

下列相關(guān)分析正確的是（）

A.甲乙相比，均能生長在A培養(yǎng)基，且乙增長較快

B.甲、乙、丙和丁四種細菌，丁代謝類型與藍細菌相似

C.四種培養(yǎng)基均需要通過121團高壓蒸汽滅菌15min

D.氨基酸是甲、乙、丙、丁四種細菌生長的限制條件

【答案】B

【分析】

分析表格可知，在A培養(yǎng)液中，可以生長的細菌是甲、乙，其中甲繁殖一代所需時間短，

繁殖較快：比較A、B、C、D四種培養(yǎng)基，其中D培養(yǎng)基無有機碳源，在上面能生長繁殖的

細菌丁屬于自養(yǎng)菌。分析表格可知，細菌的生長繁殖與氨基酸種類有關(guān)的只有細菌丙，所以

氨基酸是丙細菌生長繁殖的限制因素。

【詳解】

A、由以上分析可知，甲乙相比，均能生長在A培養(yǎng)基，且甲增長較快，A錯誤；

B、甲、乙、丙和丁四種細菌，丁在沒有葡萄糖和氨基酸的培養(yǎng)基中生長，屬于自養(yǎng)型細菌，

代謝類型與藍細菌相似，B正確；

C、培養(yǎng)基中有葡萄糖，為防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2壓力（90S以上）滅菌30min,

C錯誤；

D、由以上分析可知，氨基酸是丙細菌生長的限制條件，D錯誤。

故選Bo

18.為了篩選能產(chǎn)生阿拉伯膠（一種多糖）降解酶的菌株SM0L應(yīng)選用以下表中哪種培養(yǎng)

基（）

（單位：g/L）

阿拉伯膠

培養(yǎng)基阿拉伯膠牛肉膏

NaNO3MgSO4KCIFeSO4

酶

甲25--310.50.01

乙2510-6--10.50.01

丙--3310.50.01

T25-3-10.50.01

A.甲B.乙C.丙D.T

【答案】D

【分析】

從混合樣品中獲得某種微生物的方法通常有兩種：第一種是可利用該分離對象對某一營養(yǎng)物

質(zhì)有，，嗜好，，的原理，專門在培養(yǎng)基中加入或不加該營養(yǎng)物質(zhì)，從而使它成為一種選擇培養(yǎng)基;

或根據(jù)分離對象對pH、溫度和氧氣濃度的喜好，改變培養(yǎng)環(huán)境的理化性質(zhì)，使環(huán)境條件最

適宜該微生物的生存，從而達到分離的目的。

【詳解】

A、根據(jù)題意可知，需要"篩選能產(chǎn)生阿拉伯膠（一種多糖）降解酶的菌株SM01”,需要以阿

拉伯膠作為唯一碳源，甲中牛肉膏也屬于碳源，因此排除甲培養(yǎng)基，A不符合題意；

B、由于該菌株能夠產(chǎn)生阿拉伯膠的降解酶，因此培養(yǎng)基中不能添加阿拉伯膠酶，故排除乙

培養(yǎng)基，B不符合題意；

C、丙培養(yǎng)基無阿拉伯膠做碳源，選擇牛肉膏做碳源，C不符合題意；

D、丁培養(yǎng)基以阿拉伯膠作為唯一碳源符合要求，即利用培養(yǎng)基丁培養(yǎng)基可以篩選該菌株，

D符合題意。

故選D。

19.在實驗"分離以尿素為氮源的微生物”的無菌操作中，敘述錯誤的是（）

A.對土樣進行梯度稀釋過程需在無菌條件下進行

B.加入尿素后的培養(yǎng)基需用G6玻璃砂漏斗滅菌

C.接種時需使用無菌玻璃刮刀在酒精燈火焰旁涂布

D.涂布菌液后的固體平板需要倒置在恒溫箱培養(yǎng)

【答案】B

【分析】

稀釋涂布平板法回①常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目;②統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)

目低;③樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目，通常選用菌落數(shù)在30?300、

適用于計數(shù)的平板進行計數(shù)，菌落太少或太多都會使計數(shù)準(zhǔn)確性變差。

【詳解】

A、對土樣進行梯度稀釋過程需使用無菌水在無菌條件下進行，防止雜菌污染干擾，A正確；

B、尿素加熱會分解，因此配制好的尿素固體培養(yǎng)基加上封口膜后用高壓蒸汽滅菌方法滅菌，

冷卻后加入用G6玻璃紗漏斗過濾尿素溶液，B錯誤；

C、接種時必須保證無菌操作，故接種時需使用無菌玻璃刮刀在酒精燈火焰旁涂布，C正確；

D、當(dāng)水蒸氣累積到一定的程度會聚成水滴，倒流到培養(yǎng)中的細菌中，沖散菌體，不利于培

養(yǎng)觀察，D正確。

故選Bo

20.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，錯誤的是()

A.噬菌體可在豆芽汁培養(yǎng)基中不斷增殖

B.厭氧環(huán)境下，泡菜汁中乳酸菌產(chǎn)生乳酸抑制其他菌生長

C.稀釋涂布培養(yǎng)可將菌體分散在固體培養(yǎng)基平面，以獲得單菌落

D.在添加酚紅指示劑的尿素固體培養(yǎng)基中，有服酶的細菌菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶

【答案】A

【分析】

1、稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后

可形成單個菌落。

2、細菌合成的胭酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強。在以尿素為唯一氮源的培

養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。

【詳解】

A、噬菌體是病毒，必須寄生在活細胞內(nèi)，因而無法在豆芽汁的培養(yǎng)基中繁殖，A錯誤；

B、乳酸是乳酸菌的代謝產(chǎn)物，呈酸性，能夠抑制其他微生物的生長，B正確；

C、單菌落的分離，可以采用稀釋涂布法和平板劃線法，C正確；

D、胭酶能夠催化尿素分解成氨，氨是堿性的，能夠使酚紅指示劑變紅，因而會在含胭酶的

菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，D正確。

故選A。

培養(yǎng)基及其制備方法分析

土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

(1)分離原理：土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成胭酶,這種物質(zhì)在

把尿素分解成無機物的過程中起到催化作用。

(2)統(tǒng)計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。

(3)實驗流程：土壤取樣T樣品的稀釋T微生物的培養(yǎng)與觀察T細菌的計數(shù)。

稀釋涂布平板法計數(shù)微生物的注意問題

用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)在30?300的平板進行計數(shù)。解題時易出

現(xiàn)以下誤解：

(1)只得到1個菌落數(shù)在30~300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復(fù)原則，

易受到偶發(fā)因素的影響。

(2)得到3個或3個以上菌落數(shù)在30?300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況：

①不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240,雖然菌落數(shù)

均在“30?300”之間，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新實

驗找出原因。

②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。

可見，并不是只要得到3個“菌落數(shù)在30?300的平板”即可，而應(yīng)該是涂布的同一

稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30?300的平板”且無較大差異，說明實驗操作合格,

才能按照計算公式進行計算。

【典例】

21.如圖是利用劃線分離法在培養(yǎng)基上獲得微生物單菌落實驗操作，下列敘述錯誤的是()

A.該接種過程一般需灼燒接種環(huán)5次

B.劃線結(jié)束可看到劃線末端出現(xiàn)不連續(xù)單菌落

C.如果培養(yǎng)的是尿素分解菌，可加入酚紅指示劑鑒定

D.該接種方法常用來純化該種微生物但不能準(zhǔn)確計數(shù)

【答案】B

【分析】

(1)劃線分離大腸桿菌：在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán)，將搖床上培養(yǎng)12h的菌液打開，接

種環(huán)部分深入到菌液中。然后，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線。接種環(huán)只在菌液中蘸菌液

一次，劃線后蓋好培養(yǎng)皿。最后，將培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面)，放在37回恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12~

24h后，可看到在劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個菌落，表明菌已被分離。

(2)在細菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細菌合成的胭酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的pH

升高，酚紅指示劑將變紅。

【詳解】

A、為了防止雜菌污染，每一次的劃線之前和劃線操作結(jié)束后都需要將接種環(huán)灼燒滅菌，圖

示中共有4個劃線區(qū)域，因此該接種過程一般需灼燒接種環(huán)5次，A正確；

B、劃線結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置放在一定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一定時間后，可看到劃線

末端出現(xiàn)不連續(xù)單菌落，B錯誤；

C、若培養(yǎng)的是尿素分解菌，因該菌合成的胭酶可將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的pH升

高，酚紅指示劑將變紅，所以可加入酚紅指示劑來鑒定，C正確：

D、該接種方法（劃線分離法）不易分離出單個菌落，不能準(zhǔn)確計數(shù)培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，

D正確。

故選B.

22.為篩選能分泌胭酶的細菌，所配制的培養(yǎng)基中不能含有的成分是（）

A.尿素B.甘露醵C.葡萄糖D.瓊脂

【答案】D

【分析】

土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)：

（1）實驗室中目的菌株的篩選：

①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度。pH等），同時抑制或阻

止其他微生物生長。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合

成胭酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏服酶的微生物由于不能分解尿素，缺

乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物;

②方法：能合成胭酶的細菌才能分解尿素。配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的

細菌就是能分解尿素的細菌。

（2）分解尿素的細菌的鑒定：細菌合成的版酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強。

在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌

能夠分解尿素。

【詳解】

A、由分析可知，為篩選能分泌胭酶的細菌，所配制的培養(yǎng)基中需要加入尿素作為唯一氮源，

A不符合題意；

BC、甘露醇、葡萄糖都可以作為碳源，且甘露醇還能維持細胞的形態(tài)，BC不符合題意；

D、因為瓊脂含有一定量的含氮化合物，故不能加入瓊脂，但需要加入瓊脂糖，D符合題意。

故選Do

23.在"分離以尿素為氮源的微生物”實驗中，下列敘述正確的是（）

A.若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置未接種的LB培養(yǎng)基作對照

B.在尿素培養(yǎng)基上長出的菌落一定是尿素分解菌

C.尿素可以作細菌的碳源和氮源

D.如指示劑變紅就能準(zhǔn)確地認定該菌能分解尿素

【答案】D

【分析】

1、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成胭酶的微生物

才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏胭酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生

長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。

2、方法：能合成服酶的細菌才能分解尿素。配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的

細菌就是能分解尿素的細菌。

【詳解】

A、若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置接種了的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基作對照,

若牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基培養(yǎng)基上的菌落種類數(shù)目多于選擇培養(yǎng)基上的菌落類型，則說明起到

了選擇作用，A錯誤；

B、以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上長出的不都是尿素分解菌，也有可能是自生固氮菌，B錯

誤；

C、分離分解尿素的細菌用的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，除含碳源、氮源、水、無機鹽外，還

應(yīng)含有瓊脂，其中尿素可以作細菌的氮源，C錯誤；

D、尿素分解菌可以產(chǎn)生胭酶將尿素分解分解為氨，使pH升高，培養(yǎng)基中進入酚紅指示劑

后，氨可以使指示劑呈紅色，據(jù)此可以用酚紅指示劑鑒別尿素分解菌，如指示劑變紅就能準(zhǔn)

確地認定該菌能分解尿素，D正確。

故選D。

24.下列關(guān)于"分離以尿素為氮源的微生物”實驗的敘述，錯誤的是（）

A.土樣應(yīng)從有哺乳動物排泄物的地方取

B.在尿素固體培養(yǎng)基上生長的細菌，都是以尿素為氮源的

C.將實驗組和對照組平板倒置，37回恒溫培養(yǎng)24-48h

D.取IO1105的土壤稀釋液0.1ml,分別涂布于尿素固體培養(yǎng)基上

【答案】B

【分析】

"分離土壤中以尿素為氮源的微生物”實驗的原理：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，能分解

尿素的微生物能以尿素為氮源生.長，其他不能利用尿素的微生物由于缺乏氮源無法生長。選

擇培養(yǎng)基是否起到選擇作用，要有對照，對照組是全營養(yǎng)的培養(yǎng)基。

【詳解】

A、哺乳動物排泄物中含有尿素，故土樣應(yīng)從有哺乳動物排泄物的地方取，A正確；

B、在尿素固體培養(yǎng)基上生長的細菌，不一定都是以尿素為氮源的，可能利用空氣中的氮氣，

B錯誤：

C、將實驗組和對照組平板倒置，37回恒溫培養(yǎng)24~48h,C正確；

D、測定土壤中分解尿素的細菌總數(shù)，利用稀釋涂布平板法，即取IO，、105倍的土壤稀釋液

各0.1mL,分別涂布于尿素固體培養(yǎng)基上，D正確。

故選Bo

25.下列關(guān)于生物技術(shù)實踐的敘述，正確的是（）

A.用糯米釀酒，先由酒曲中的黑根霉或黑曲霉中的淀粉能完成糖化

B.植物組織培養(yǎng)時，菊花莖段在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)可以得到叢狀苗

C.在分離以尿素為氮源的微生物時，有麻酶的細菌菌落周圍會出現(xiàn)透明圈

D.測定樣品中亞硝酸鹽含量時，將水放入比色杯中，直接測其0D值，作為空白對照

【答案】A

【分析】

1、進行酒精發(fā)酵前要對糯米進行糖化，此時應(yīng)在有氧、較高溫度進行，該過程主要在酒曲

中的黑曲霉、黑根霉分泌產(chǎn)生的淀粉酶作用下進行。

2、分解尿素的細菌的鑒定細菌合成的胭酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強。在

以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示