離子交換法提取溶菌酶

崗位演練離子交換法提取溶菌酶1任務(wù)四人干擾素α2b的離子交換層析查閱資料，熟悉溶菌酶等電點(diǎn)和溶解性等性質(zhì)。查閱設(shè)計(jì)《離子交換法提取溶菌酶操作記錄》，在任務(wù)實(shí)施過(guò)程中同步填寫(xiě)。以雞蛋蛋清為原材料，利用離子交換層析法等，制得溶菌酶粗品。設(shè)計(jì)實(shí)操設(shè)計(jì)（一）任務(wù)描述2（二）實(shí)訓(xùn)材料1.材料、試劑新鮮市售雞蛋、精密pH試紙、紗布。層析介質(zhì)（724樹(shù)脂）、洗滌液（磷酸緩沖液：Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，pH6.5，0.15mol/L）、洗脫液（10%硫酸銨溶液）、濃鹽酸、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉。

2.儀器設(shè)備恒溫水浴鍋、干燥器、抽濾設(shè)備、磁力攪拌裝置。3生產(chǎn)前準(zhǔn)備預(yù)處理離子交換樹(shù)脂預(yù)處理雞蛋清吸附固液分離疏水洗滌除雜洗脫鹽析12345678（三）實(shí)訓(xùn)操作清場(chǎng)94步驟一

配制試劑（1）配制7mol/L鹽酸。（2）配制2mol/L氫氧化鈉。（3）磷酸緩沖液（pH6.5，0.15mol/L）：分別配制0.15mol/L的Na2HPO4母液和NaH2PO4母液，再按體積比31.5∶68.5取Na2HPO4母液和NaH2PO4母液，混合，調(diào)節(jié)pH至6.5。（三）實(shí)訓(xùn)操作5步驟二

預(yù)處理離子交換樹(shù)脂1.浸泡清洗

大體積蒸餾水浸泡新購(gòu)的724樹(shù)脂，反復(fù)漂洗，浮選法除去細(xì)小顆粒。傾倒除水，用80%～90%乙醇浸泡2h，傾倒去乙醇，除去樹(shù)脂中的醇溶性雜質(zhì)。加入45℃蒸餾水保溫浸泡，恒溫2h，然后用蒸餾水多次漂洗，除去水溶性雜質(zhì)。2.轉(zhuǎn)型

用樹(shù)脂4倍體積的7mol/L，鹽酸溶液浸泡2h，然后傾倒去鹽酸，用蒸餾水漂洗至中性，傾倒去水。再用4倍體積的2mol/1氫氧化鈉溶液浸泡2h，然后傾倒去堿液，用蒸餾水漂洗至中性，傾倒去水。3.浸泡平衡

用樹(shù)脂4倍體積磷酸緩沖液浸泡24h，平衡樹(shù)脂，浸泡待用。使用前傾倒法除去緩沖液。（三）實(shí)訓(xùn)操作6步驟三

預(yù)處理雞蛋清（1）在雞蛋頂端敲一個(gè)小洞，使蛋清全部流出，裝于量筒稱量體積。置容器中測(cè)定蛋清的pH，如果pH低于8則重新選擇雞蛋取蛋清。（2）用玻璃棒將蛋清輕輕攪動(dòng)，使蛋清液黏稠均勻。攪拌過(guò)程中注意不能起泡，攪拌不宜過(guò)快，防止蛋白變性影響溶菌酶的提取率。（3）用雙層紗布過(guò)濾除去蛋清液中的臍帶塊或蛋殼等雜質(zhì)。（三）實(shí)訓(xùn)操作7步驟四

吸附

將處理過(guò)的蛋清液轉(zhuǎn)移至燒杯中，冷至5℃，然后按照蛋清：樹(shù)脂=10∶1的質(zhì)量比邊攪拌邊加入724離子交換樹(shù)脂，置于0～5℃攪拌吸附5h。然后將樹(shù)脂和蛋清液的混合物在0～5℃繼續(xù)過(guò)夜吸附。（三）實(shí)訓(xùn)操作8步驟五

固液分離

過(guò)濾樹(shù)脂和蛋清液混合物，收集下層固體樹(shù)脂。步驟六

洗滌除雜

用蒸餾水反復(fù)漂洗樹(shù)脂，至樹(shù)脂無(wú)白沫且洗滌液澄清為止。向樹(shù)脂中加入磷酸緩沖液，攪拌洗滌15min，過(guò)濾除去液體收集樹(shù)脂。按同樣方法再處理兩次。步驟七

洗脫

抽濾除去樹(shù)脂的水分，加入30mL10%硫酸銨溶液洗脫溶菌酶，攪拌洗脫30min，過(guò)濾得到洗脫液。同法洗脫處理3次，合并3次的洗脫液，即為含溶菌酶的洗脫液。（三）實(shí)訓(xùn)操作9步驟八

鹽析

測(cè)定洗脫液的總體積，每100mL洗脫液中緩慢加入硫酸銨粉末32g，邊加邊攪拌，使硫酸銨含量達(dá)到40%。攪拌均勻后置于4～10℃過(guò)夜?？梢?jiàn)白色沉淀生成，4℃，10000r/min離心20min，棄上清，沉淀干燥后即制得含有硫酸銨的溶菌酶粗品。稱量質(zhì)量。（三）實(shí)訓(xùn)操作步驟九

清場(chǎng)

檢查、整理各項(xiàng)記錄。規(guī)范地存放生產(chǎn)用試劑，清洗器具，維護(hù)設(shè)備，處置廢物和廢液，清潔、消毒工作臺(tái)和潔凈室。最后，填寫(xiě)清場(chǎng)合格證。10（四）任務(wù)分析與總結(jié)1.簡(jiǎn)述溶酶體的概念。請(qǐng)根據(jù)溶菌酶性質(zhì)和離子交換操作中溶液的pH判斷，724樹(shù)脂是陰離子交換樹(shù)脂還是陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。2.簡(jiǎn)述離子交換洗脫的方法和方式。計(jì)算10%硫酸銨溶液的物質(zhì)的量濃度，分析該溶液為什么能將溶菌酶洗脫下來(lái)。3.小組討論：離子交換層析法的操作步驟及要點(diǎn)，選取代表匯報(bào)討論結(jié)果。4.選擇題。請(qǐng)歸類總結(jié)新型多糖基離子交換劑的類型。為弱堿性陰離子交換劑的是（

），為強(qiáng)堿性陰離子交換劑的是（

），為弱酸性陽(yáng)離子交換劑的是（

），為強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換