血液等體液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)鮑曼不動(dòng)桿菌

關(guān)于血液等體液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)鮑曼不動(dòng)桿菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬┱莆昭獦?biāo)本的采集方法、檢驗(yàn)程序（二）掌握鮑曼不動(dòng)桿菌的分離培養(yǎng)與鑒定。（三）熟悉鮑曼不動(dòng)桿菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。第2頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、實(shí)驗(yàn)器材和試劑器材：酒精燈、火柴、取菌環(huán)、載玻片、普通光學(xué)顯微鏡、血平板試劑：3%過(guò)氧化氫、氧化酶試劑、革蘭染色液、生理鹽水、生化管藥敏紙片：哌拉西林/他唑巴坦PIP/TA、替卡西林+克拉維酸TIC/CA、頭孢他啶CAZ、頭孢吡肟FEP、頭孢噻肟CTX、頭孢曲松CRO、阿米卡星AN、妥布霉素TM、美羅培南MPN、環(huán)丙沙星CIP第3頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）菌落觀察（二）革蘭染色法（三）氧化酶試驗(yàn)（四）接種生化管（五）菌種的綜合判斷第4頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、實(shí)驗(yàn)步驟1、標(biāo)本采集菌血癥患者病原菌是周期性出現(xiàn)在血液中，盡管臨床癥狀可能很嚴(yán)重，但患者血液中病原菌濃度水平相當(dāng)?shù)?，因此要求臨床多次采血液標(biāo)本進(jìn)行肉湯增菌培養(yǎng)，但24小時(shí)內(nèi)一般不超過(guò)3次。懷疑為菌血癥的患者，原則上應(yīng)在抗菌藥物使用前采取，對(duì)已開(kāi)始抗菌藥物治療的患者可在下次給藥前采取，標(biāo)本大多由肘靜脈采取，多部位采集血液標(biāo)本也可增加陽(yáng)性率。第5頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天標(biāo)本采集注意事項(xiàng)：

采血部位的皮膚消毒采用三步消毒法：即先用70%酒精擦拭皮膚，再用碘酒消毒，然后用70%酒精脫碘。采集的血液標(biāo)本應(yīng)分別注入硫酸鎂葡萄糖肉湯（需氧培養(yǎng)）和硫乙醇酸鈉肉湯（厭氧培養(yǎng)）培養(yǎng)瓶中。硫酸鎂葡萄糖肉湯中和多種抗生素，硫乙醇酸鈉肉湯含有硫乙醇酸鈉、葡萄糖等還原劑吸收其中的氧，為厭氧菌提供較低的氧化還原電位。血液與培養(yǎng)基的比例應(yīng)為1：5—1：10兒童嬰幼兒一般1-5ml成人一般10ml第6頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、常見(jiàn)致病菌檢驗(yàn)及報(bào)告方式（1）將血液細(xì)菌培養(yǎng)瓶置35度孵育，每日觀察一次，連續(xù)觀察至第七天。注意觀察血液細(xì)菌培養(yǎng)瓶的變化。（2）如懷疑血液細(xì)菌培養(yǎng)瓶中有細(xì)菌生長(zhǎng)，用無(wú)菌技術(shù)取瓶?jī)?nèi)液體進(jìn)行涂片，革蘭染色檢查。如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌，根據(jù)細(xì)菌的染色性及形態(tài)特征發(fā)出初步報(bào)告（電話通知主管醫(yī)生）。（3）根據(jù)涂片結(jié)果選擇相應(yīng)的抗菌藥物，直接從血培養(yǎng)瓶抽取適量液體做初步藥敏試驗(yàn)，并于18—24小時(shí)后報(bào)告初步藥敏結(jié)果。第7頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天（4）如有發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁、溶血、綠色色素、表面菌膜生長(zhǎng)、膠凍狀凝固或細(xì)胞層顆粒狀生長(zhǎng)，均為細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象。用無(wú)菌技術(shù)取瓶?jī)?nèi)液體接種固體培養(yǎng)基。包括需氧培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)及厭氧培養(yǎng)。第8頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天（5）對(duì)細(xì)菌菌落涂片、革蘭染色，觀察細(xì)菌形態(tài)及染色性。革蘭陰性桿菌：進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)并接種KIA培養(yǎng)基、O/F試驗(yàn)、生化鑒定、血清學(xué)鑒定、藥敏試驗(yàn)。革蘭陽(yáng)性球菌：葡萄串樣或散在存在，觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，初步判斷為葡萄球菌；觸酶陰性鏈狀或散在排列初步判斷為鏈球菌屬或腸球菌屬，作生化鑒定、血清學(xué)鑒定、藥敏試驗(yàn)。第9頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天血液標(biāo)本中常見(jiàn)的細(xì)菌革蘭陽(yáng)性球菌：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群、B群鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、厭氧鏈球菌、革蘭陽(yáng)性桿菌：產(chǎn)單核李斯特菌、炭疽芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌。革蘭陰性球菌：腦膜炎奈瑟菌、卡他布蘭漢菌。革蘭陰性桿菌：大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、氣單胞菌等。第10頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天（6）報(bào)告方式在增菌過(guò)程中培養(yǎng)瓶中懷疑有細(xì)菌生長(zhǎng)，經(jīng)涂片、革蘭染色證實(shí)，可報(bào)告“疑有XX細(xì)菌生長(zhǎng)”；經(jīng)分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)及血清學(xué)鑒定后，可報(bào)告“血液細(xì)菌培養(yǎng)X天，有XX細(xì)菌生長(zhǎng)”，并同時(shí)報(bào)告體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果；如果增菌培養(yǎng)至七天，培養(yǎng)瓶中仍無(wú)細(xì)菌生跡象，經(jīng)盲目傳代證實(shí)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，可報(bào)告“血液細(xì)菌培養(yǎng)七天，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。第11頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天注意事項(xiàng)1、一般應(yīng)在抗菌藥物使用前采集血液標(biāo)本，如果患者已用過(guò)抗菌藥物或情況不明時(shí)，應(yīng)使用硫酸鎂肉湯增菌液。2、對(duì)疑為波浪熱、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎的患者，培養(yǎng)瓶應(yīng)孵育至第四周，盲目接種后無(wú)菌生長(zhǎng)，方可報(bào)告陰性。第12頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天注意事項(xiàng)3、為了盡快發(fā)現(xiàn)病原菌，在7天的孵育期內(nèi)應(yīng)至少盲目接種兩次，第一次在標(biāo)本孵育12—18小時(shí)后。在以后的孵育期中應(yīng)每天觀察瓶?jī)?nèi)的變化，如有細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象，需及時(shí)接種和涂片染色觀察報(bào)告。7天孵育后仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)跡象，進(jìn)行盲目接種。每次接種羊血平板和巧克力瓊脂平板，分別進(jìn)行需氧和厭氧培養(yǎng)。革蘭染色提示真菌生長(zhǎng)，應(yīng)移種至沙氏平板，L型菌須轉(zhuǎn)種高滲平板。第13頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天注意事項(xiàng)4、血液細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)是診斷菌血癥和敗血癥的病原學(xué)依據(jù)，但血液標(biāo)本在采集、接種、運(yùn)送過(guò)程存在潛在污染的可能，尤其在靜脈穿刺術(shù)中，因此皮膚消毒應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)程操作。5、一般菌血癥由一種細(xì)菌引起，但約5%-10%的菌血癥患者是多菌性菌血癥。第14頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天自動(dòng)血培養(yǎng)儀原理：自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)是檢測(cè)細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)時(shí)所釋放的二氧化碳來(lái)作為血液中有無(wú)細(xì)菌的指標(biāo)。檢測(cè)技術(shù)有放射標(biāo)記、顏色變化（CO2感受器）、熒光技術(shù)和壓力檢測(cè)等。自動(dòng)血培養(yǎng)儀集培養(yǎng)、震蕩和檢測(cè)一體化。接種血液標(biāo)本后，血培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)、震蕩的同時(shí)，由檢測(cè)系統(tǒng)自動(dòng)連續(xù)監(jiān)測(cè)瓶中CO2的產(chǎn)生情況，所測(cè)得信號(hào)傳送至電腦分析，繪制出每個(gè)瓶中微生物的生長(zhǎng)曲線。一旦出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，電腦自動(dòng)報(bào)警，指示陽(yáng)性瓶的位置。第15頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天血培養(yǎng)瓶厭氧瓶成人需氧瓶小兒需氧瓶第16頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天全自動(dòng)血培養(yǎng)儀第17頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天自動(dòng)血培養(yǎng)儀特點(diǎn)自動(dòng)血培養(yǎng)儀除了適用血培養(yǎng)外，還可以用于其他無(wú)菌部位標(biāo)本如腦脊液、胸腹水、和關(guān)節(jié)液等的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)的檢測(cè)。自動(dòng)血培養(yǎng)儀與手工系統(tǒng)相比，提高了陽(yáng)性檢出率，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，能節(jié)省人力，縮短檢驗(yàn)周期，一般培養(yǎng)5天。但儀器、設(shè)備和消耗品的成本較高。第18頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天鮑曼不動(dòng)桿菌鮑曼不動(dòng)桿菌（Acinetobacterbaumannii）為非發(fā)酵革蘭陰性桿菌，廣泛存在于自然界，屬于條件致病菌。主要引起呼吸道感染，也可引發(fā)菌血癥、泌尿系感染、繼發(fā)性腦膜炎、手術(shù)部位感染、呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎等。是醫(yī)院感染的重要病原菌。近年來(lái)的感染在增多，且其耐藥性日益嚴(yán)重，對(duì)危重患者及ICU中的患者威脅很大。第19頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天

鮑曼不動(dòng)桿菌在醫(yī)院感染中占第四位成為僅次于銅綠假單胞菌的又一個(gè)非發(fā)酵菌，位居第二。在某些地方不動(dòng)桿菌的感染甚至已超過(guò)了銅綠假單胞菌。隨著廣譜抗菌藥物的廣泛使用，多重耐藥不動(dòng)桿菌日趨增多，耐藥株對(duì)目前使用的所有抗菌藥物均可耐藥，且很容易通過(guò)交叉感染在醫(yī)院內(nèi)爆發(fā)流行。

第20頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天步驟和方法1、形態(tài)觀察革蘭陰性、球狀或球桿菌，常成雙排列。2、菌落觀察在血平板上形成圓形、凸起光滑、邊緣整齊、不透明、灰白色、有粘性的菌落。菌落較小，在麥康凱上生長(zhǎng)良好，形成無(wú)色或淡粉紅色菌落。第21頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天步驟和方法3、生化反應(yīng)（1）氧化酶、觸酶試驗(yàn):氧化酶陰性、觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性（2）其他生化反應(yīng)：不發(fā)酵糖類，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，動(dòng)力陰性第22頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天藥物敏感試驗(yàn)

對(duì)于不動(dòng)桿菌屬，首選抗菌藥物為頭孢他啶、哌拉西林、替卡西林、次選阿米卡星、亞胺培南、環(huán)丙沙星。鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)全部氨基青霉素，第一代、第二代頭孢菌素和第一代喹諾酮類抗生素天然耐藥。目前治療多選用β-內(nèi)酰胺類藥物+氨基糖苷類聯(lián)合用藥第23頁(yè),共25頁(yè)，2024年2月25日，星期天藥敏紙片抑菌圈直徑頭孢他啶CAZ

≤1415-17≥18頭孢吡肟FEP≤1415-17≥18頭孢噻肟CTX

≤1415-22≥23頭孢曲松CRO

≤1314-20≥21美洛培南MPN≤1314-15≥16妥布霉素TM

≤1213-14≥15阿米卡星AN≤1415-16