白細胞計數(shù)和分類

關(guān)于白細胞計數(shù)和分類實驗一、白細胞計數(shù)

1.原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞，在血細胞計數(shù)池內(nèi)計數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細胞總數(shù)，換算成每升血液中白細胞數(shù)。2.試劑器材白細胞稀釋液：冰乙酸2.0ml

10g/L亞甲藍3滴加蒸餾水至100ml第2頁,共26頁，2024年2月25日，星期天器材

改良牛鮑血細胞計數(shù)板及專用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學顯微鏡。第3頁,共26頁，2024年2月25日，星期天第4頁,共26頁，2024年2月25日，星期天第5頁,共26頁，2024年2月25日，星期天毛細血管采血標準操作程序

操作步驟：1采血部位成人以左手無名指內(nèi)側(cè)為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。2輕輕按摩采血部位。 3用棉簽蘸消毒液消毒局部皮膚、待干。第6頁,共26頁，2024年2月25日，星期天4緊捏刺血部位，使其自然充血。5用無菌刺針穿刺取血，動作應迅速，深度2～3mm，稍加擠壓以血液流出為宜。6用干棉球擦去第一滴血。7按需要依次采血。8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。第7頁,共26頁，2024年2月25日，星期天

微量吸管的使用1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；2拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排出適量空氣；3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；4用干棉球順吸管向下拭盡管外余血（保證血量準確），輕觸吸管下口吸去多余血量，使管內(nèi)抗凝血正處所需刻度；5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻；6拔出微量吸管棄入污物桶。第8頁,共26頁，2024年2月25日，星期天3.操作步驟（1）加稀釋液用移液管向小試管內(nèi)加入0.38ml白細胞稀釋液。（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計數(shù)板及蓋片（動作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。（4）充計數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細胞懸液，充入計數(shù)池內(nèi)。靜置2-3min，使細胞沉于計數(shù)池底面。（5）調(diào)試顯微鏡將計數(shù)板放置載物臺上，選擇（4×

）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10×），調(diào)節(jié)光亮

。（6）計數(shù)低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)，壓線細胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。第9頁,共26頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果計算白細胞總數(shù)=4大格白細胞數(shù)（N）

/4×10×20×106

=N÷20×109/L用△.△×109/L（小數(shù)點后一位）表示第10頁,共26頁，2024年2月25日，星期天5細胞計數(shù)原則大方格四邊壓線細胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下，弓形移動第11頁,共26頁，2024年2月25日，星期天實驗報告內(nèi)容原理試劑器材操作步驟實驗結(jié)果討論第12頁,共26頁，2024年2月25日，星期天診斷學實驗二

白細胞分類第13頁,共26頁，2024年2月25日，星期天1.分類原理：白細胞分類計數(shù)是將血液制備成涂片，瑞氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細胞的形態(tài)特征進行分類計數(shù)。通常分類100個白細胞，計算得出各種白細胞所占百分比第14頁,共26頁，2024年2月25日，星期天2.瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負電的酸性伊紅（E-）離子。細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分的化學性質(zhì)不同，對染料的親和力也不一樣，故可呈不同的著色特點。第15頁,共26頁，2024年2月25日，星期天3.器材光學顯微鏡推片，載玻片[試劑]Wright染液

Wright1.0g

甲醇600ml磷酸鹽緩沖液（PH6.4～6.8）香柏油[標本來源]EDTA-K2抗凝全血第16頁,共26頁，2024年2月25日，星期天第17頁,共26頁，2024年2月25日，星期天3．白細胞分類：細胞分布均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類計數(shù)。分類時要有秩序的連續(xù)進行，避免主觀選擇視野。通常分類計數(shù)100個白細胞，計算并報告各種白細胞所占比例。

結(jié)果記錄方式：Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正第18頁,共26頁，2024年2月25日，星期天中性粒細胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圓形，胞漿染粉紅色，核形一葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見，染成深紫紅色，胞漿中有許多細小均勻紫紅色顆粒。各類成熟白細胞的形態(tài)學：

第19頁,共26頁，2024年2月25日，星期天嗜酸性粒細胞（Eo）：較中性粒細胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質(zhì)粗糙染深紫紅色，胞漿內(nèi)充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時呈桔紅色，有折光性。

第20頁,共26頁，2024年2月25日，星期天嗜堿性粒細胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時呈蘭黑色。于光學顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；核呈淡紫紅色?？床磺澹蕳U狀或分葉狀。第21頁,共26頁，2024年2月25日，星期天淋巴細胞（Ly）：胞體呈圓形，在成人血涂片中以小淋巴細胞為多見，核大呈深紫色致密而濃染，胞漿量極少；大淋巴細胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍色，可見少量嗜苯胺藍顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細胞一側(cè)，染色較深。

第22頁,共26頁，2024年2月25日，星期天

單核細胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上為12～20μm，胞體圓形、橢圓形或不規(guī)則形；核形多種多樣，最重要的特點是染色質(zhì)較細致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡胞漿較多，淡蘭色，含大量細小塵土樣顆粒。第23頁,共26頁，2024年2月25日，星期天正常成人外周血白細胞分類參考值：Ne50%～70%Ly20%～40%Mo3%～8%Eo0