熒光PCR檢測原理_第1頁
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關(guān)于熒光PCR檢測原理一、熒光信號的檢測第2頁,共17頁，2024年2月25日，星期天

熒光標(biāo)記信號的產(chǎn)生

熒光標(biāo)記基團在某波長的激發(fā)光刺激下，產(chǎn)生一個更長波長的發(fā)射光第3頁,共17頁，2024年2月25日，星期天FRET？

某熒光標(biāo)記基團在激發(fā)光刺激下生成某波長的發(fā)射光，當(dāng)另一屏蔽基團與其距離合適時，原發(fā)射光將會被屏蔽基團所吸收，并轉(zhuǎn)化為其他波長的發(fā)射光或熱能，稱之為FRET。第4頁,共17頁，2024年2月25日，星期天熒光信號熒光染料SYBRgreen——特異性結(jié)合雙鏈，釋放熒光信號特異性熒光探針Taqman雙熒光標(biāo)記探針molecularBeacon熒光標(biāo)記探針熒光標(biāo)記雜交雙探針第5頁,共17頁，2024年2月25日，星期天Taqman特異性熒光雙標(biāo)記探針Taqman5’→3’外切酶活性第6頁,共17頁，2024年2月25日，星期天Molecular

beacon第7頁,共17頁，2024年2月25日，星期天熒光標(biāo)記雜交雙探針第8頁,共17頁，2024年2月25日，星期天二、典型的熒光PCR擴增曲線陽性標(biāo)本擴增曲線陰性標(biāo)本擴增曲線第9頁,共17頁，2024年2月25日，星期天Bio-radiCycler擴增曲線第10頁,共17頁，2024年2月25日，星期天PE-5700擴增曲線第11頁,共17頁，2024年2月25日，星期天PE-7700擴增曲線第12頁,共17頁，2024年2月25日，星期天RocheLightCycler擴增曲線第13頁,共17頁，2024年2月25日，星期天三、Ct值樣本擴增曲線與閾值線交叉點的循環(huán)數(shù)Ct值第14頁,共17頁，2024年2月25日，星期天四、熒光PCR定量的原理第15頁,共17頁，2024年2月25日，星期天Unknown未知樣本拷貝數(shù)的確定第16頁,共17頁，2024年

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