生物技術(shù)與實(shí)踐-2022年高考生物備考系列（必備知識清單+思維導(dǎo)圖）

專題10生物技術(shù)與實(shí)踐

［、知識梳理

一教材必背及必會知識

1、果酒制作(P2)

(1)酵母菌是兼性厭氧微生物。

酵母菌進(jìn)行有氧呼吸的反應(yīng)式如下：CfiHl20fi+6H20+602-6C02+12H20；

酵母菌進(jìn)行無氧呼吸的反應(yīng)式如下：C(iHl206f2CA0H+2C0,。

(2)20°C左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在18?25℃。

2、果醋制作(P3-P4)

(1)醋酸菌是一種好氧細(xì)菌。醋酸生成反應(yīng)式是C2H5OH+O2-CH3C00H+H20O

(2)醋酸菌的最適生長溫度為30?35°C。

(3)為防止發(fā)酵液被污染，發(fā)酵瓶要清洗干凈，用體積分?jǐn)?shù)為7096的酒精消毒。

(4)果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重格酸鉀來檢驗(yàn)。在酸性條件下，重銘酸鉀與酒精

反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。

3、多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，其中起主要作用的是毛霉。毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶可

以將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以將脂肪水解成甘油和脂肪酸。

(P6)

4、鹵湯中的酒可以選用料酒、黃酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在12%左右。(P7)

5、腐乳制作的實(shí)驗(yàn)流程示意圖(P7)

讓豆腐長出毛霉一加鹽腌制一加鹵湯裝瓶~密封腌制

6、測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反

應(yīng)后，與NT-蔡基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玖瑰紅色染料。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的

標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行目測比較，可以大致估算出亞硝酸鹽的含量。（P10）

7、在泡菜的腌制過程中，要注意控制腌制的時間、溫度和食鹽的用量。溫度過高、食鹽用量

過、低腌制時間過短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。（P11）

8、微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。（P14）

9、雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氮源（提供

氮元素的物質(zhì)）和無機(jī)鹽。（P14）

10、在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)

物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培

養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌時需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無

氧的條件。（P15）

11、消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽他

和抱子）。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱子。（P15）

12、實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法

（1）消毒方法：日常生活中經(jīng)常用到煮沸消毒法。在100℃煮沸5?6min可以殺死微生物

細(xì)胞和一部分芽抱。對于一些不耐高溫的液體，如牛奶，則使用巴氏消毒法，在70?75℃煮

30min或在80℃煮15min,可以殺死牛奶中的微生物，并且使牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞。此外，

人們也常使用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用酒精擦拭雙手、用消氯氣毒水源等。（P15）

（2）滅菌方法：灼燒滅菌是將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，直接

在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌。止匕外，在接種過程中，試管口或瓶

口等容易被污染的部位，也可以通過火焰灼燒來滅菌。干熱滅菌是將滅菌物品放入干熱滅菌箱

內(nèi)，在160?170C加熱1?2h可達(dá)到滅菌的目的。能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻

璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。高壓蒸汽滅菌是將滅菌物品放

置在盛有適量水的高壓蒸汽鍋內(nèi)。把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣徹底排除后，將

鍋密閉，繼續(xù)加熱使鍋內(nèi)的氣壓逐步上升，溫度也隨之升到100C以上。為達(dá)到良好的滅菌效

果，一般在壓力為lOOkPa,溫度為121c的條件下，維持15?30min。（P16）

（3）除了以上方法外，實(shí)驗(yàn)室里還用紫外線或化學(xué)藥物進(jìn)行消毒。例如，接種室、接種箱或

超凈工作臺在使用前，可以用紫外線照射30min,以殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射

前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果。（P16）

13、本實(shí)驗(yàn)用牛肉膏蛋白膝固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分成制備培養(yǎng)基和純化大

腸桿菌兩個階段進(jìn)行。（P16）

14、制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基的過程：（1）計(jì)算；（2）稱量；（3）溶化；（4）滅菌;

（5）倒平板。倒平板的具體操作正確順序是：dacb（用下圖字母表示）。（P17）

15、微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法是通過接

種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。

稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊

脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成

單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。（P18-（P19））

16、對于頻繁使用的菌種，我們可以采用臨時保藏的方法。首先，將菌種接種到試管的固體

斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管放入4c的冰箱中保藏。以后每

3?6個月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。但是，這種方法保存的

時間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的

方法，在3mL的甘油瓶中，裝入1mL后甘油滅菌。將1疝培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移至甘油瓶中，與甘

油充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱中保存。（P14）

17、在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培

養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。（P22）

18、稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生

長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品

中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。值得

注意的是，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，

平板上觀察到的只是一個菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。除了上

述的活菌計(jì)數(shù)法外，顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法。（P22）

19、在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的胭酶將尿素分解成了氨。氨會使培養(yǎng)基的堿

性增強(qiáng)，pH升高。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基pH的變化來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。

在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將

變紅。（P26）

20、許多商品纖維素都是由天然纖維素制得的，如水溶性的竣甲基纖維素鈉（CMC-Na）、不溶于

水的微晶纖維素等。纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即G酶、&酶和

葡萄糖甘酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。（P27）

21、在剛果紅（CongoRed,簡稱CR）是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅

色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，

剛果紅一纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣,

我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。（P28）

22、在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培基之前，可以通過選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌

的濃度，以確保能夠能夠從樣品中分離到所需要的微生物。（P29）

23、常用的剛果紅染色法有兩種，一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種

是在倒平板時就加入剛果紅。方法一：在長出菌落的培養(yǎng)基上，覆蓋質(zhì)量濃度為Img/mL的CR

溶液，10?15min后，倒去CR溶液，加入物質(zhì)的量濃度為lmol/L的NaCl溶液，15min后倒

掉NaCl溶液，此時，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)透明圈。方法二：配制質(zhì)量濃度為

10mg/mL的CR溶液，滅菌后，按照每200mL培養(yǎng)基加入1mL的比例加入CR溶液，混勻后倒平

板。等培養(yǎng)基上長出菌落后，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)明顯的透明圈。（P29）

24、果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一種

高分子化合物。（P42）

25、果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層，使榨取果汁變得更容易，而果膠分

解成可溶性的半乳糖醛酸，也使得渾濁的果汁變得澄清。果膠酶并不特指某一種酶，而是分解

果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶等。（P42）

26、酶的活性是指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶的活性高低可以用在一定條件下，酶所催化

的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速度來表示。酶反應(yīng)速度用單位時間內(nèi)、單位體積中反應(yīng)物的減少量或

產(chǎn)物的增加量來表示。（P42）

27、溫度、pH和酶的抑制劑等條件會影響酶的活性。（P43）

28、加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉，目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶、淀

粉酶和纖維素酶。其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。（P46）

29、溫度、酸堿度和表面活性劑都會影響酶的活性。為了解決這個難題，科學(xué)家通過基因工程

生產(chǎn)出了能夠耐酸、耐堿、忍受表面活性劑和較高溫度的酶，并且通過特殊的化學(xué)物質(zhì)將酶層

層包裹，與洗衣粉的其他成分隔離。（P46）

30、固定化酶技術(shù)是指將酶固定在不溶于水的載體上，使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分

離。（P49）

31、固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù),

包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸

附法固定化，而細(xì)胞多采用包埋法固定化。（P50）

32、在缺水狀態(tài)下，微生物處于休眠狀態(tài)?；罨褪亲屘幱谛菝郀顟B(tài)的微生物重新恢復(fù)正常

的生活狀態(tài)。（P50）

33、注意，加熱時要用小火，或者間斷加熱，反復(fù)幾次，直到海藻酸鈉溶化為止。（P51）

34、將溶化好的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫，加入已活化的酵母細(xì)胞，進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，使其?/p>

合均勻，再轉(zhuǎn)移到注射器中。（P51）

35、以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的CaCL溶液中，觀察液滴在CaCL

溶液中形成凝膠珠的情形。（P51）

36、將固定好的酵母細(xì)胞（凝膠珠）用蒸儲水沖洗2~3次。（P51）

37、凝膠色譜法。（1）凝膠色譜法的原理根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。所

用的凝膠實(shí)際上就是些微小的多孔球體；（2）當(dāng)相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時，相對

分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長，移動速度較慢；而相對分子質(zhì)量

較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動，路程路程較短，移動速度較快。

（P64）

38、凝膠色譜法實(shí)驗(yàn)使用的緩沖液一般是磷酸緩沖液。（P65）

39、電泳的原理是利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀不同，

使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。（P65）

40、在測定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量時，通常使用SDS一聚丙烯酰胺電泳。（P66）

41、蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶凈電荷的多少和分子質(zhì)量的大小等因素。

（P66）

42、SDS能消除凈電荷對遷移率的影響，并且能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。SDS能與各種蛋白質(zhì)

形成蛋白質(zhì)一SDS復(fù)合物，由于SDS所帶的負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，

因此掩蓋了不同蛋白質(zhì)分子之間的電荷差別，是電泳遷移率完全取決于蛋白質(zhì)分子的大小。

（P66）

43、實(shí)驗(yàn)操作（P66-P67）

（1）樣品處理及粗分離（粗分離步驟）

血紅蛋白一共由四條肽鏈組成，包括兩條a—肽鏈和B—肽鏈。其中每條肽鏈環(huán)繞成一個

亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶一分子的氧或一分子二氧化碳。血紅蛋白因含有血紅素而呈紅

色。樣品的處理和粗分離的四個步驟分別是紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放。

分離血紅蛋白溶液以及透析可以除去樣品中分質(zhì)量較小的雜質(zhì)。

（2）SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳（純度鑒定步驟）

判斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)標(biāo)，需要進(jìn)行蛋白質(zhì)純度的鑒定，使用最多的是SDS一聚丙烯酰

胺凝膠電泳。

44、操作提示（P69-P70）

（1）洗滌次數(shù)過少，無法除去血漿蛋白；離心速度過高和時間過長會使白細(xì)胞等一同沉

淀，達(dá)不到分離效果。

（2）為了加速膨脹，可以將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，這樣做的目的是不但可

以節(jié)約時間，而且可以除去凝膠中可能帶有的微生物，排除凝膠內(nèi)的空氣。

（3）在裝填凝膠柱時，不得有氣泡存在，因?yàn)闅馀輹噥y洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，

降低分離效果。

45、植物芳香油的來源（P72）

（1）天然香料的主要來源是動物和植物，微生物中的真菌也可以產(chǎn)生芳香化合物。

（2）提取出的植物芳香油具有很強(qiáng)的揮發(fā)性，其組成也比較復(fù)雜，主要包括菇類化合物及

其衍生物。

46、植物芳香油的提取方法（P72）

（1）植物芳香油的提取方法有蒸儲、壓榨和萃取等。

（2）水蒸氣蒸儲法的原理是利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的植物芳香油攜帶出來，形成油水

混合物，冷卻后，混合物又會重新分出油層和水層。

（3）根據(jù)蒸僧過程中原料放置的位置，可以將水蒸氣蒸儲法劃分為水中蒸儲、水上蒸儲

和水氣蒸偏。其中，水中蒸儲的方法對于有些原料不適用，如柑橘和檸檬。這是因?yàn)樗?/p>

中蒸儲會導(dǎo)致原料焦糊和有效成分水解等問題。因此，柑橘、檸檬芳香油的制備通常使

用壓榨法。

（4）植物芳香油不僅揮發(fā)性強(qiáng)，而且易溶有機(jī)溶劑，如石油酸、酒精、乙醛和戊烷等。

不適于用水蒸氣蒸儲的原料，可以考慮使用萃取法。

（5）萃取法是將粉碎、干燥的植物原料用有機(jī)溶劑浸泡，使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中的

方法。芳香油溶解于有機(jī)溶劑后，只需蒸發(fā)出有機(jī)溶劑，就可以獲得純凈的植物芳香油

了。

47、玫瑰精油的提取(P73-P74)

(1)玫瑰精油是制作高級香水的主要成分，能使人產(chǎn)生愉悅感。實(shí)驗(yàn)室玫瑰精油的粗提

取，將玫瑰花瓣與清水的質(zhì)量按1：4,用水蒸氣蒸儲法進(jìn)行提取。玫瑰精油的化學(xué)性

質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，能隨水蒸氣一同蒸儲。

(2)水蒸氣蒸儲后，錐形瓶中將收集到乳白色的乳濁液，這是玫瑰精油與水的混合物。

這時只需要向乳化液中加入氯化鈉(NaCl),增加鹽的濃度，就會出現(xiàn)明顯的分層。然

后用分液漏斗將這兩層分開。分離的油層還會含有一定的水分，一般加入一些無水Na2S0,

吸水，放置過夜，再過濾除去固體硫酸鈉就要可以得到玫瑰油了。

48、橘皮精油的提取(P74-P75)

(1)從橘皮中提取的橘皮油，無色透明，具有誘人的橘香味，主要成分是檸檬烯。橘皮

精油主要貯藏在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸儲時會發(fā)生部水解，

使用水中蒸儲法又會發(fā)生原料焦糊的問題，所以一般采用壓榨法。

(2)新鮮的柑橘皮中含有大量的果蠟、果膠和水分，如果直接壓榨，出油率較低。為了

提高出油率，需要將柑橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡。為了使橘皮油易于與水分離，

還要分別加入相當(dāng)于橘皮質(zhì)量0.25%的NaHCO：，和5%的Na2s0.”并調(diào)節(jié)pH至7~8。

(3)橘皮壓榨液中含有橘皮精油和大量水分，還有一些糊狀殘?jiān)入s質(zhì)?？梢韵扔闷胀?/p>

布袋過濾除去固體物和殘?jiān)缓箅x心進(jìn)一步除去質(zhì)量較小的殘留固體物，再用分液漏

斗或吸管將上層的橘皮油分離出來。此時的橘皮油還含有少量的水和果蠟，需在5-10℃

下靜止5~7d,使雜質(zhì)沉淀，用吸管吸出上層澄清橘皮油，其余部分通過濾紙過濾，濾液

與吸出的上層橘油合并，成為最終的橘皮精油。

49、操作提示(P75)

(1)蒸儲時許多因素都會影響產(chǎn)品的品質(zhì)。例如，蒸儲溫度太高、時間太短，產(chǎn)品品質(zhì)

就比較差。如果要提高品質(zhì)，就需要延長蒸儲時間。

(2)橘皮在石灰水的浸泡時間為10h以上，橘皮要浸透，這樣壓榨時不會滑脫，出油率

高，并且壓榨液的粘稠度不會太高，過濾時不會堵塞篩眼。

50、胡蘿卜素的提取(P77)

(1)從胡蘿卜中提取的橘黃色物質(zhì)包括多種結(jié)構(gòu)類似物，統(tǒng)稱為胡蘿卜素。胡蘿卜素的

化學(xué)分子式中包含多個碳碳雙鍵，根據(jù)雙鍵的數(shù)目可以將胡蘿卜素劃分為a、8、丫三

類，B-胡蘿卜素是其中最主要的成分。一分子的B-胡蘿卜素在人或動物的小腸、肝臟

等器官被氧化成兩分子的維生素A。因此，胡蘿卜素可以用來治療因缺乏維生素A而引

起的各種疾病，如夜盲癥、幼兒生長發(fā)育不良、干皮癥等。

(2)胡蘿卜素是橘黃色結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于乙

酸等有機(jī)溶劑。

胡蘿卜等蔬菜是提取天然胡蘿卜素的原料，工業(yè)生產(chǎn)上，提取天然胡蘿卜素的方

法主要有三種，一是從植物提取，二是從大面積養(yǎng)殖的巖藻中獲得，三是利用微生物的

發(fā)酵生產(chǎn)。

51、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(P78)

(1)用做溶劑的有機(jī)溶劑分為水溶性和水不溶性兩種。乙醇和丙酮能夠與水混溶，是

水溶性有機(jī)溶劑；石油酸、乙酸乙酯、乙酸、苯、四氯化碳等不能與水混溶，稱為水不

溶性有機(jī)溶劑。

(2)萃取的效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和使用量，同時還受到原料顆粒大小、緊密

程度、含水量、萃取的溫度和時間等條件的影響。一般來說，原料顆粒小、萃取溫度高、

時間長，需要提取的物質(zhì)就能夠充分溶解，萃取效果就好。

(3)萃取過程應(yīng)該避免明火加熱，采用水浴加熱，這是因?yàn)橛袡C(jī)溶劑都是易燃物，直接

使用明火加熱容易引起燃燒、爆炸。為了防止加熱時有機(jī)溶劑揮發(fā)，還要在加熱瓶口安

裝回流冷凝裝置。萃取液的濃縮可直接使用蒸儲裝置，在濃縮之前，還要進(jìn)行過濾，除去

萃取液中的不溶物。

52、操作提示(P79)

將提取的胡蘿卜素粗品通過紙層析進(jìn)行鑒定，在18cmX30cm濾紙下端距離底邊2cm

處做一基線，在基線上取A、B、C、D四點(diǎn)，用最細(xì)的注射器針頭分別吸取4mL

溶解在石油酸中的標(biāo)準(zhǔn)樣品和提取樣品，在A、D和B、C點(diǎn)上點(diǎn)樣。點(diǎn)樣應(yīng)該快速細(xì)

致，在基線上形成直徑為2mm左右的圓點(diǎn)，每次點(diǎn)樣后，可用吹風(fēng)機(jī)將溶劑吹干，注意

保持濾紙干燥。等濾紙上的點(diǎn)樣液自然揮發(fā)干后，將濾紙卷成圓筒狀，置于裝有1cm

深的石油酸的密封玻璃瓶中。等各種色素完全分開后，取出濾紙，讓石油酸自然揮發(fā)后，

觀察標(biāo)準(zhǔn)樣品中位于展開劑前沿的胡蘿卜素層析帶。

易錯易混知識

1、醋酸菌屬于原核生物，異養(yǎng)需氧型代謝類型，不僅能利用葡萄糖合成醋酸，還能將酒精轉(zhuǎn)

化為醋酸。

2、在制作葡萄酒時，在發(fā)酵過程中，每隔12個小時左右要將瓶蓋擰松一次，其目的是補(bǔ)充氧

氣，以利于酵母菌的繁殖。

3、制作葡萄酒與醋酸時的控制溫度不相同，前者控制在30C~35C,后者的適宜溫度是20C

左右。

4、在葡萄酒自然發(fā)酵的過程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發(fā)酵過程中,

隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液，使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色。在缺氧呈酸性的發(fā)酵

液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。

5、當(dāng)氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時，醋酸菌將乙

醇直接變?yōu)榇姿帷?/p>

6、培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中都必須含有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽，有些微生物的培養(yǎng)基中還需

要加入特殊營養(yǎng)，如維生素等。

7、牛肉膏與蛋白陳不僅能為微生物提供碳源、氮源、無機(jī)鹽，還能為微生物提供維生素。

8、消毒與滅菌的本質(zhì)是相同的，但滅菌能殺死所有的微生物包括芽抱與抱子，消毒的條件則

相對溫和，只能殺滅部分微生物，一般不能殺死芽抱與抱子。

9、平板培養(yǎng)基配制的基本流程為：

計(jì)算稱量一溶化（包括瓊脂）一調(diào)節(jié)PH-倒平板f滅菌->（冷卻后）倒置平板。

10、微生物計(jì)數(shù)時，如果單位體積菌液內(nèi)微生物的數(shù)量過大，計(jì)數(shù)前必須進(jìn)行稀釋。一般將菌

液稀釋接種后可能在培養(yǎng)基的平板上形成10T00個左右的菌落，比較適宜，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比

較準(zhǔn)確可信。

11、一個由KH2P04、Na2HP04、H20、NH4HC03配制的培養(yǎng)基中含有4種營養(yǎng)物質(zhì)。

12、培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌

時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至堿性，培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH

調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件

13、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：①對實(shí)驗(yàn)操作的空

間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等

器具進(jìn)行滅菌。③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。④實(shí)

驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術(shù)還能有效避免操作者

自身被微生物感染。

14、消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生

物（包括芽抱和抱子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體）,

還有化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。

15、滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽胞和抱子。滅菌方法

有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅

菌法；②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；③培養(yǎng)基、無菌水

等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅

菌法，所用器械是紫外燈。

16、平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止培養(yǎng)基表面的水分過度地?fù)]發(fā)，

又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺

在皿蓋與皿底之間的部位，空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好

不要用這個平板培養(yǎng)微生物。

17、微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法是通過接種環(huán)在

瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃

線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。稀釋涂布

平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基

的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。

18、用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從

而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。這兩種接種方法都可用于微生物的分離

純化和計(jì)數(shù)。

19、平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接

種環(huán)，并打開棉塞。③將試管口通過火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑤

將試管通過火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸

入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)皿。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，

從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域