221動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)新-1

2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)1那么動物細胞工程常用的技術(shù)手段呢？植物組織培養(yǎng),

植物體細胞雜交

回憶：植物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？

動物細胞培養(yǎng)、動物細胞核移植、動物細胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等其中動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)那么動物細胞工程常用的技術(shù)手段呢？植物組織培養(yǎng),植物2

從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。原理：細胞增殖動物細胞培養(yǎng)目的：獲得細胞或細胞產(chǎn)物

原理：細胞增殖動物細胞培養(yǎng)目的：獲得細胞或細胞3動物細胞培養(yǎng)的條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（無菌處理、添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、促生長因子、動物血清、血漿等。）3、溫度和PH溫度為36.5+0.5度；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)作用作用動物細胞培養(yǎng)的條件：1、無菌、無毒的環(huán)境補充合成培養(yǎng)基中缺乏4

注意關(guān)鍵詞:

細胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)閱讀課本44—46頁內(nèi)容注意關(guān)鍵詞:閱讀課本44—46頁內(nèi)容51、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？如何分散？2、動物細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？3、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？4、如果此時細胞數(shù)量并未達到人們的需求，應該怎樣辦？5、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？6、歸納動物細胞培養(yǎng)的過程？討論1、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞討論6動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸液10代細胞50代細胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細胞加培養(yǎng)液稀釋（分解彈性纖維）原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過程：細胞株細胞系動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細胞網(wǎng)絡起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸液10代細胞50代細胞傳72、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？1、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？4、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？主要成分：糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、促生長因子和動物血清等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細胞分化程度低，分裂能力強成塊組織中的細胞，彼此接觸抑制了細胞的生長和增殖；使細胞與培養(yǎng)液充分接觸不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體練一練2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材8（1）生產(chǎn)有重要價值的生物制品：如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（2）動物細胞是基因工程技術(shù)中常用的受體細胞。（3）用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據(jù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應用：（1）生產(chǎn)有重要價值的生物制品：如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗9細胞的全能性細胞株、細胞系植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細胞或細胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目試一試細胞的全能性細胞株、細胞系植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細胞或細胞10動物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？動物細胞培養(yǎng)的概念？動物細胞培養(yǎng)的過程？動物細胞培養(yǎng)的條件？動物細胞培養(yǎng)的應用？動物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？11

動物細胞特點分化潛能變窄：隨著細胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄，這是指整體細胞而言。細胞核仍具有全能性：細胞核，它含有保持物種遺傳性所需的全套基因，而且并沒有因細胞分化而丟失基因，因此高度分化細胞的細胞核仍具有全能性看一看

動物細胞特點看一看12

根據(jù)動物細胞核仍具有全能性的特點,怎樣將動物細胞的全能性表達?

想一想利用動物體細胞核移植技術(shù)想一想利用動物體細胞核移植技術(shù)13卵細胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細胞細胞質(zhì)細胞核細胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵細胞細胞拆合技術(shù)妊娠多莉羊的培育過程無性生殖卵細胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細胞細胞質(zhì)細胞核細胞核141.名詞解釋：細胞貼壁、接觸抑制、原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)2.動物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？其中哪項是其它技術(shù)手段的基礎(chǔ)？3.簡述動物細胞培養(yǎng)的取材部位是什么？理由是什么？所需的酶是什么？

4.目前使用或冷凍的細胞通常為幾代以內(nèi)的細胞？原因是？5.動物細胞培養(yǎng)的過程中如何創(chuàng)造無菌、無毒的環(huán)境？動物細胞培養(yǎng)基中應加入的天然成分是？其作用是什么？氣體環(huán)境是？作用分別是什么？1.名詞解釋：細胞貼壁、接觸抑制、156.為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？如何分散？7.動物細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？8.培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？9.如果此時細胞數(shù)量并未達到人們的需求，應該怎樣辦？10.人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？11.歸納動物細胞培養(yǎng)的過程？6.為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞16

例題：上海某醫(yī)院病理室為確診一患者的腫瘤是良性還是惡性，切取了一小塊腫瘤組織進行培養(yǎng)。請回答下列問題：

（1）培養(yǎng)之前，腫瘤組織必須先用

等處理成單個細胞。

（2）若開始培養(yǎng)時取一滴培養(yǎng)液觀察有100個腫瘤細胞，經(jīng)24h培養(yǎng)后，取一滴稀釋50倍后再取一滴(設(shè)三次的“一滴”等量)觀察，發(fā)現(xiàn)有32個腫瘤細胞，此腫瘤的細胞周期約為

h。

（3）與正常細胞相比，在光學顯微鏡下可見明顯增多的

細胞器是

。

（4）如果通過電子設(shè)備和其他生化手段已經(jīng)初步判斷是惡性的可能性很小，在腫瘤組織進行培養(yǎng)了60代后，發(fā)現(xiàn)有惡性腫瘤細胞存在，那么你能否判斷該腫瘤組織是惡性腫瘤嗎？。

說明理由：

。

（5）某科研單位研制出一種新型藥物X，據(jù)說對此類腫瘤有較好的療效，請你設(shè)計一個方案加以驗證。寫出你所設(shè)計的實驗步驟：

a．

；

b．

；

c．

。

胰蛋白酶

6

線粒體不能

因為細胞傳代培養(yǎng)超過10－50代后，部分細胞會在細胞培養(yǎng)過程中獲得不死性而發(fā)生癌變。將相同的培養(yǎng)液分為相等的兩份，一份加入藥物X，另一份不加將等數(shù)量的腫瘤細胞置于兩份培養(yǎng)基中放在相同且適宜條件下培養(yǎng)，定期取樣觀察腫瘤細胞數(shù)目變化情況

例題：上海某醫(yī)院病理室為確診一患者的腫瘤是良性還是惡性，切17將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物核移植胚胎細胞核移植體細胞核移植(易恢復其全能性)(難恢復其全能性)記一記

動物體細胞核移植：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵18供體細胞（供核）細胞培養(yǎng)體細胞卵巢卵母細胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無核卵母細胞顯微操作注入細胞融合重組細胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛核移植過程（顯微操作法）（電刺激）物理或化學方法供體細胞（供核）細胞培養(yǎng)體細胞卵巢卵母細胞去核無核卵19供體細胞（供核）細胞培養(yǎng)體細胞卵巢卵母細胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無核卵母細胞注入細胞融合重組細胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細胞作受體細胞的原因是:細胞大,易操作,含有促使細胞核全能性表達的物質(zhì)和營養(yǎng)3.嚴格來說新個體有卵巢母細胞的細胞質(zhì)所以有兩個親本的性狀核移植過程供體細胞（供核）細胞培養(yǎng)體細胞卵巢卵母細胞（MⅡ中期：供質(zhì)）20思考題１、在進行體細胞核移植之前，為何要去掉受體卵母細胞的核？為使核移植動物的遺傳物質(zhì)幾乎全部來自有利用價值的動物提供的細胞。２、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細胞，為什么？10代以內(nèi)的細胞一般保持正常二倍體的核型，未突變3、細胞核移植生產(chǎn)的克隆動物是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？為什么？不是，克隆動物絕大部分DNA來自供體細胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來自受體卵母細胞思考題１、在進行體細胞核移植之前，為何要去掉受體卵母細胞的核21分子水平：PCR技術(shù)進行DNA擴增細胞水平：動物細胞培養(yǎng)個體水平：營養(yǎng)生殖（扦插、嫁接）植物組織培養(yǎng)動物個體的克?。w細胞核移植和胚胎移植）哪些生物技術(shù)屬于“克隆”？克隆概念：是指從一個共同的祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一