降壓物質(zhì)檢查法

關(guān)于降壓物質(zhì)檢查法內(nèi)容提要基本概念和原理2010年版增修訂內(nèi)容檢查法歐洲藥典降壓物質(zhì)檢查法組胺類物質(zhì)檢查法第2頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天基本概念和原理

檢驗(yàn)?zāi)康慕M胺、緩激肽一類的物質(zhì)具有血管擴(kuò)張作用，超過(guò)一定劑量會(huì)使血壓快速降低，對(duì)人體產(chǎn)生危害。來(lái)自動(dòng)物或微生物發(fā)酵提取物及生產(chǎn)過(guò)程中有可能混入此類物質(zhì)的原料，應(yīng)建立降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)，如抗生素、氨基酸、多肽等。來(lái)自動(dòng)植物、微生物發(fā)酵提取物及生產(chǎn)過(guò)程中有可能混入組胺類或類組胺類物質(zhì)的注射劑(靜脈），應(yīng)建立降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)。如抗生素、中藥注射劑、氨基酸、多肽類等。第3頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天基本概念和原理降壓物質(zhì)檢查法定義：本法系比較組胺對(duì)照品（S）與供試品（T）引起麻醉貓血壓下降的程度，以判定供試品中所含降壓物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定本法原理是利用貓對(duì)組胺樣物質(zhì)具有較為敏感的作用，通過(guò)靜脈給予一定劑量的供試品，觀察對(duì)麻醉貓血壓的影響，以判定供試品中降壓物質(zhì)的限度是否符合要求。第4頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天2010年版增修訂情況歷史沿革1985年版藥典至現(xiàn)行藥典（2005年版）方法基本一致2005年版動(dòng)物去掉了狗（5kg以上）2010年版修訂第5頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天2010版與2005版區(qū)別2010版2005版1、經(jīng)驗(yàn)證保持活性符合要求的條件下

如無(wú)沉淀析出2、制備配制3、按品種項(xiàng)下規(guī)定的限值，且供試品溶液與對(duì)照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等的要求，制備適當(dāng)濃度的供試品溶液。按品種項(xiàng)下規(guī)定的限量，配成適當(dāng)濃度的供試品溶液。試驗(yàn)時(shí)，一般要求供試品溶液與對(duì)照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等第6頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天2010版與2005版區(qū)別4、一般為13.3～20.0kPa一般為13.3~16.0kPa5、每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行，且相鄰兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)盡量保持一致相鄰兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)一致（3~5分鐘），每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行6、則判定即認(rèn)為第7頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天

修訂背景1、強(qiáng)調(diào)對(duì)照品的降壓活性要符合要求2、強(qiáng)調(diào)貓的正常血壓范圍為13.3~20.0kPa3、強(qiáng)調(diào)每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行，而不強(qiáng)調(diào)要3~5分鐘之內(nèi)。

第8頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-材料1血壓記錄裝置：生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（多導(dǎo)生理記錄儀），相應(yīng)的傳感器，血壓計(jì)（定標(biāo)用）2動(dòng)脈插管（細(xì)的硬塑料管）、靜脈插管（10號(hào)或12號(hào)鈍針頭）、三通等連接裝置，可調(diào)定量加樣器，軟管（硅膠管或乳膠管）。31ml、2ml、5ml、10ml注射器（4號(hào)半針頭），玻璃容器：吸管、容量瓶等4相應(yīng)精度天平（對(duì)照品萬(wàn)分之一）、動(dòng)物天平（秤）5試劑：供試品、組胺對(duì)照品、肝素鈉（針劑或原料均可）、苯巴比妥鈉注射液、戊巴比妥鈉等麻醉劑，生理鹽水(氯化鈉注射液）6手術(shù)器械、保溫手術(shù)臺(tái)、固定貓用的繩具等第9頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-材料手術(shù)器械：剪毛剪、手術(shù)剪、眼科剪、止血鉗、手術(shù)刀、手術(shù)鑷、眼科鑷（直和彎）、氣管插管、動(dòng)脈夾、脫脂棉、紗布第10頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-對(duì)照品

對(duì)照品溶液的配制精密稱取磷酸組胺對(duì)照品適量，按組胺計(jì)算，加水溶解使成每1ml中含1.0mg的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，4～8℃貯存。經(jīng)驗(yàn)證保持活性符合要求的條件下

，可在3個(gè)月內(nèi)使用。對(duì)照品稀釋液的配制臨用前，精密量取組胺對(duì)照品溶液適量，用氯化鈉注射液配成每1ml中含組胺0.5ug的溶液。注：1對(duì)照品割開勿使玻璃屑調(diào)入

2折算×0.362，1mg磷酸組胺相當(dāng)于組胺

3貯存液用滅菌水配制，保存，使用時(shí)取出放置至室溫第11頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-供試品溶液

供試品溶液的配制按品種項(xiàng)下規(guī)定的劑量，配成適當(dāng)濃度的供試品溶液。試驗(yàn)時(shí)，一般要求供試品溶液與對(duì)照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等。注：供試品溶液與對(duì)招品溶液注入體積應(yīng)相等，一般為0.2ml/kg體重舉例：注射用阿齊霉素，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定注射量為2000u/kg，則應(yīng)配成10000u/ml，按0.2ml/kg注射，給藥量為2000u/kg供試品和對(duì)照品如體積相差過(guò)大，可通過(guò)補(bǔ)充生理鹽水量調(diào)整。第12頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法取健康合格、體重2kg以上的貓，雌者無(wú)孕。用適宜的麻醉劑(如巴比妥類)麻醉后，固定于保溫手術(shù)臺(tái)上，分離氣管并插入插管以使呼吸暢通，必要時(shí)可進(jìn)行人工呼吸。在一側(cè)頸動(dòng)脈插入連接測(cè)壓計(jì)的動(dòng)脈套管，管內(nèi)充滿適宜的抗凝劑溶液，以記錄血壓。也可用其他適當(dāng)儀器記錄血壓。在一側(cè)股靜脈內(nèi)插入靜脈插管，供注射藥液用。試驗(yàn)中應(yīng)注意保持動(dòng)物體溫。全部手術(shù)完畢后，將測(cè)壓計(jì)調(diào)節(jié)到與動(dòng)物血壓相當(dāng)?shù)母叨?一般為13.3～16.0kPa)，開啟動(dòng)脈夾，待血壓穩(wěn)定后，方可進(jìn)行藥液注射。各次注射速度應(yīng)相同。每次注射后立即注入一定量的氯化鈉注射液，相鄰兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)一致(3～5分鐘)，每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行。第13頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物要求健康合格，體重2kg以上的貓，雌者無(wú)孕。來(lái)源：目前可為市售家貓一般在3kg以上為好，麻醉耐受性，血壓穩(wěn)定無(wú)孕實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意保溫第14頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-麻醉常用麻醉劑和劑量戊巴比妥鈉：靜脈注射或腹腔注射30～40mg/kg，一般配成30～40mg/ml，按每kg體重給藥1ml，一次給藥可維持麻醉2～4h，優(yōu)點(diǎn)為起效快，缺點(diǎn)維持時(shí)間短苯巴比妥鈉+戊巴比妥鈉：（比例不同實(shí)驗(yàn)室不同）苯巴比妥鈉（1ml：100mg）135mg/kg＋約2mg/kg戊巴比妥鈉（可配成10mg/ml） 烏拉坦：靜脈注射或腹腔注射1～1.25g/kg，優(yōu)點(diǎn)對(duì)呼吸抑制小。第15頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-儀器連接頸動(dòng)脈－動(dòng)脈插管－換能器－記錄儀股靜脈－靜脈插管－給藥裝置第16頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-動(dòng)物靈敏度檢查

自靜脈依次注入上述對(duì)照品稀釋液，劑量按動(dòng)物體重每1kg注射組胺0.05ug、0.1ug及0.15ug，重復(fù)2～3次，如0.1ug劑量所致的血壓下降值均不小于2.67kPa，同時(shí)相應(yīng)各劑量所致反應(yīng)的平均值有差別，可認(rèn)為該動(dòng)物的靈敏度符合規(guī)定。注：組胺濃度為0.5ug/ml，則給藥量為0.1、0.2、0.3ml/kg第17頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-供試品檢查取對(duì)照品稀釋液按動(dòng)物體重每1kg注射組胺0.1ug的劑量(ds)，供試品溶液按品種項(xiàng)下規(guī)定的劑量(dT),照下列次序注射一組4個(gè)劑量：ds、dT、dT、ds。然后以第一與第三、第二與第四劑量所致的反應(yīng)分別比較；如dT致的反應(yīng)值均不大于ds所致反應(yīng)值的一半，即認(rèn)為供試品的降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定。第18頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢查法-復(fù)試否則應(yīng)按上述次序繼續(xù)注射一組4個(gè)劑量，并按相同方法分別比較兩組內(nèi)各對(duì)dS、dT劑最所致的反應(yīng)值。如dT所致的反應(yīng)值均不大于dS所致的反應(yīng)值，仍認(rèn)為供試品的降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定；如dT所致的反應(yīng)值均大于dS所致的反應(yīng)值，即認(rèn)為供試品的降壓物質(zhì)檢查不符合規(guī)定；否則應(yīng)另取動(dòng)物復(fù)試。如復(fù)試的結(jié)果仍有dT所致的反應(yīng)值大于dS所致的反應(yīng)值，即認(rèn)為供試品的降壓物質(zhì)檢查不符合規(guī)定。第19頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天所用動(dòng)物經(jīng)靈敏度檢查如仍符合規(guī)定，可繼續(xù)用于降壓物質(zhì)檢查。第20頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天原始記錄組胺對(duì)照品溶液及其稀釋液的配制供試品溶液的配制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類及性別、體重（許可證號(hào)）麻醉劑的名稱、配制及劑量抗凝劑的名稱及用量記錄血壓儀器名稱及型號(hào)動(dòng)物的基礎(chǔ)血壓、動(dòng)物靈敏度的測(cè)定供試品溶液及對(duì)照品稀釋液的注入體積測(cè)量值與結(jié)果判斷完整圖譜第21頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天組胺類物質(zhì)檢查法附錄XIXM化學(xué)藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則化學(xué)藥注射劑安全性檢查包括異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）、降壓物質(zhì)（或組胺物質(zhì)）、過(guò)敏反應(yīng)等項(xiàng)。根據(jù)處方、工藝、用法及用量等設(shè)定相應(yīng)的檢查項(xiàng)目并進(jìn)行適用性研究。第22頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天4．組胺類物質(zhì)檢查本法系將一定濃度的供試品和組胺對(duì)照品依次注入離體豚鼠回腸浴槽內(nèi)，分別觀察出現(xiàn)的收縮反應(yīng)幅度并加以比較，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。不合格供試品表明含有組胺和類組胺物質(zhì)。在臨床上可能引起血壓下降和類似過(guò)敏反應(yīng)等嚴(yán)重的不良反應(yīng)。檢查方法參照本附錄“附組胺類物質(zhì)檢查法”第23頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天設(shè)定限值前研究在確定限值前，應(yīng)考察供試品對(duì)組胺對(duì)照品引起的離體豚鼠回腸收縮反應(yīng)的干擾（抑制或增強(qiáng)），求得最大無(wú)收縮干擾濃度。若供試品的配方、生產(chǎn)工藝等任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的條件發(fā)生改變時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。第24頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天干擾試驗(yàn)按組胺類物質(zhì)檢查法，依下列順序準(zhǔn)確注入供試品稀釋液與對(duì)照品稀釋液低劑量、對(duì)照品稀釋液低劑量、供試品稀釋液與對(duì)照品稀釋液高劑量、對(duì)照品稀釋液高劑量（dS+T、dS、dSH+T、dSH），重復(fù)一次，如dS+T及dSH+T所致的反應(yīng)值與dS及dSH所致的反應(yīng)值基本一致，可認(rèn)為供試品不干擾組胺物質(zhì)檢查；否則該品種不適合設(shè)立組胺物質(zhì)檢查項(xiàng)，建議設(shè)立降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)。第25頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天限值確定除特殊要求外，原則上與降壓物質(zhì)檢查限值一致，以臨床單次用藥劑量的1/5～5倍量和每公斤體重0.1μg組胺劑量計(jì)算注射劑含組胺類物質(zhì)檢查限值，其計(jì)算公式為：限值L=K/M，其中K值為人每公斤體重接受的組胺量（0.1μg/kg），M為降壓物質(zhì)檢查限值（mg/kg、ml/kg、IU/kg）。供試品劑量應(yīng)低于最大無(wú)收縮干擾劑量?？鼓[瘤藥、心血管病藥等急重病癥用藥應(yīng)采用高限。第26頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天組胺類物質(zhì)檢查法定義：本法系比較組胺對(duì)照品（S）與供試品（T）引起豚鼠離體回腸收縮的程度，以判定供試品中所含組胺類物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定。第27頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天對(duì)照品溶液的制備精密稱取磷酸組胺對(duì)照品適量，按組胺計(jì)算，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含1.0mg的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，4～8℃貯存，在確保收縮活性符合要求的前提下，可在3個(gè)月內(nèi)使用。第28頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天對(duì)照品稀釋液的制備試驗(yàn)當(dāng)日，精密量取組胺對(duì)照品溶液適量，用氯化鈉注射液按高、低劑量組（dSH、dS）配成兩種濃度的稀釋液，高劑量dSH應(yīng)不致使回腸收縮達(dá)到極限，低劑量dS所致反應(yīng)值約為高劑量的一半，調(diào)節(jié)劑量使可以重復(fù)出現(xiàn)。一般組胺高低劑量的終濃度為10-6～10-8g/ml，注入體積0.2～1.0ml為宜。第29頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天供試品溶液的制備按品種項(xiàng)下規(guī)定的限量，照對(duì)照品稀釋液低劑量（dS）配制成適當(dāng)?shù)臐舛?。試?yàn)時(shí)，一般供試品溶液與對(duì)照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等。第30頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天回腸肌營(yíng)養(yǎng)液的制備A液：試驗(yàn)當(dāng)日，取氯化鈉160.0g、氯化鉀4.0g、氯化鈣（按無(wú)水物計(jì)算）2.0g、氯化鎂（按無(wú)水物計(jì)算）1.0g與磷酸氫二鈉（含12個(gè)結(jié)晶水）0.10g，加注射用水700ml使溶解，再加入注射用水適量，使成1000ml。B液：取硫酸阿托品0.5mg、碳酸氫鈉1.0g、葡萄糖（含1個(gè)結(jié)晶水）0.5g，加適量注射