超微量分光光度計(jì)檢測方法研究

摘要：超微量分光光度計(jì)目前成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器，廣泛應(yīng)用于生驗(yàn)室蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)等領(lǐng)域。應(yīng)用液體的表面張力特性，檢測時(shí)經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑，達(dá)到快速、微量、高濃度檢測吸光度的特點(diǎn)。本文闡述了如何用現(xiàn)有的國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對超微量分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，并舉例說明對超微量分光光度計(jì)透射比、波長和雜散光等主要指標(biāo)檢測方法。最后對超微量分光光度計(jì)日常檢測過程中可能遇到的問題分光光度計(jì)是一類重要的分析儀器，無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)外可見分光光度計(jì)都有廣泛而重要的應(yīng)用。分光光度計(jì)就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)量定性分析的儀器。由于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量樣本量很小，于是特性，樣品體積只需要0.5～2μL，在檢測臺上，經(jīng)上下速、微量、高濃度及不用石英管、毛細(xì)管等耗材檢測吸光度的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于生命科超微量分光光度計(jì)主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲(2)不需要比色皿，用移液槍直接將樣品滴加到檢測平臺上，測量時(shí)柱，檢測完成后只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈(4)氙氣閃光燈為燈源，代替了氘燈(紫外)和鎢燈(6)顯示吸光度值的同時(shí)，程序直接給出濃度值(核酸超微量分光光度計(jì)與傳統(tǒng)的紫外可見分光光度計(jì)工作原理相同，都是根據(jù)物質(zhì)的分子對紫外、可見區(qū)輻射(光)的選擇性吸收和朗伯－比爾(Lambert－Beer)定律對物質(zhì)進(jìn)行定量層的厚度(光程)成正比。物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后，可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸光度，即可由上式計(jì)算出供試品中該現(xiàn)行的紫外可見分光光度計(jì)檢定依據(jù)為JJG178－20度計(jì)》國家計(jì)量檢定規(guī)程。其中規(guī)定透射比標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):質(zhì)量分分別在235nm、257nm、313nm、350nm處首先，超微量紫外可見分光光度計(jì)結(jié)果為吸光度值，質(zhì)(重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液)證書的特性量值用透射比表示。其次，超微量紫外可見分光光度計(jì)依據(jù)JJG178－2007《紫外、可見、近紅外分光光度計(jì)》國家計(jì)量檢定規(guī)0%，透射比重復(fù)性≤1.0%，符合Ⅳ級掃描氧化鈥的光譜曲線，依次查找200nm據(jù)列表，找出氧化鈥光譜曲線的波峰值(與其對應(yīng)的則是光譜曲線透射比的波谷值誤差≤±2nm，波長在340nm～900nm區(qū)段，最大允許誤差測量生化分析儀校準(zhǔn)用溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(BW2025)中的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(注的結(jié)果，轉(zhuǎn)化成T=10－A=10－14.12=0.0%。依據(jù)JJG178－2用紫外分光光度計(jì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液)檢測儀器透射比準(zhǔn)確235nm、257nm、313nm、350nm四點(diǎn)波長，以空經(jīng)過測量結(jié)果數(shù)據(jù)分析，儀器經(jīng)轉(zhuǎn)化后的透射比結(jié)果比標(biāo)準(zhǔn)值小，得出吸測量結(jié)果則比吸光度的標(biāo)準(zhǔn)值大，其中發(fā)現(xiàn)吸光度的誤差變化成線這樣將標(biāo)準(zhǔn)空白溶液當(dāng)成樣本，測量空白溶液吸光度值，發(fā)現(xiàn)空白溶液的吸光度通過上述的檢測方法闡述和問題分析，對判斷超微量分光光度計(jì)的計(jì)量性能有了更加求，并沒有規(guī)定對超微量分光光度計(jì)有效的檢測方