親水改性的聚丙烯無(wú)紡布優(yōu)化脂肪移植純化技術(shù)的研究

親水改性的聚丙烯無(wú)紡布優(yōu)化脂肪移植純化技術(shù)的研究目的自體脂肪顆粒移植是目前整形外科領(lǐng)域應(yīng)用非常廣泛的一種治療手段。自體脂肪具有零排斥,來(lái)源豐,易獲取,價(jià)格低且安全等優(yōu)點(diǎn),是臨床上治療面部年輕化和體表軟組織凹陷的一種非常理想的填充材料。但是,臨床預(yù)后體積保持率的不確定性也是困擾臨床醫(yī)生的一大難題。既往有關(guān)文獻(xiàn)研究的結(jié)果與結(jié)論也尚未統(tǒng)一。本研究是在以往學(xué)者研究的基礎(chǔ)上,綜合靜置法、離心法和棉紗布過(guò)濾法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),制作出一種過(guò)濾材料,為臨床純化處理顆粒脂肪提供一種新思路。方法1、通過(guò)熔噴和紡粘工藝將聚丙烯顆粒制作成纖維直徑細(xì),孔徑小的SMS(紡粘-熔噴-紡粘)非織造纖維膜,經(jīng)水處理劑吸附固著成膜法親水改性,制作出包括SMS非織造布、熱風(fēng)導(dǎo)流層,SAF(超吸水纖維)芯吸層和底層的聚丙烯SMS非織造布濾墊。對(duì)SMS非織造纖維層進(jìn)行基本性能的測(cè)試。2、根據(jù)國(guó)家現(xiàn)有的醫(yī)療器械和醫(yī)用材料的GB/T16886系列標(biāo)準(zhǔn),對(duì)SMS非織造纖維膜進(jìn)行生物相容性的初步評(píng)價(jià),包括細(xì)胞毒性試驗(yàn)(瓊脂擴(kuò)散法和浸提法)、皮內(nèi)刺激試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)等。3、采用CCK-8測(cè)定吸光度值法繪制細(xì)胞增殖-毒性生長(zhǎng)曲線,應(yīng)用Muse細(xì)胞分析儀測(cè)定材料對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)凋亡的影響。將ASCs在SMS非織造纖維膜上培養(yǎng),觀察細(xì)胞在材料表面的生長(zhǎng)情況。4、比較不同純化方法在單位時(shí)間內(nèi)的純化效率/效力和不同持續(xù)時(shí)間內(nèi)的純化效率/效力;比較不同純化方法對(duì)脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性的影響;鑒定棉紗布過(guò)濾法純化后的脂肪組織中是否混有棉纖維;不同純化方法獲取脂肪組織中含SVF數(shù)量和活細(xì)胞比例的比較;流式細(xì)胞儀定量分析比較SMS非織造布濾墊組和棉紗布濾墊組獲取的SVF中間充質(zhì)干細(xì)胞百分比。比較材料濾墊法和棉紗布濾墊法在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中局部炎癥因子的變化。結(jié)果1、通過(guò)熔噴-紡粘工藝制得了SMS非織造纖維面層,其熔噴纖維直徑只有1um,過(guò)濾的平均孔徑是15.1um,表面粗糙度為2.290um(棉紗布為16.845um),親水改性后接觸角為46.20°,液體穿透時(shí)間為4.15秒。并制得了SMS非織造布濾墊。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)(瓊脂擴(kuò)散法和浸提法)、皮內(nèi)刺激試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)均提示SMS非織造纖維膜均有良好的生物相容性。3、ASCs與材料共培養(yǎng)后,細(xì)胞生長(zhǎng)呈近似“S”形,與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。細(xì)胞在材料上培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞并未在材料表面生長(zhǎng)。Muse細(xì)胞分析儀也未發(fā)現(xiàn)材料對(duì)細(xì)胞有促凋亡作用。4、處理相同時(shí)間(3min)純化效率:離心組(67.1±2.18)%>SMS10材料濾墊組(53±2.21)%>棉紗布濾墊組(47.8±1.13)%,純化效力:SMS10材料濾墊組(86.4±1.58)%>棉紗布濾墊組(79.3±1.62)%>離心組(70.4±2.07)%;處理不同時(shí)間(1min,2min,3min)純化效力:材料濾墊組,1分鐘(83.2±1.10)%<2分鐘(86.4±1.67)%<3分鐘(87.2±1.10)%,其中,持續(xù)1分鐘和2分鐘的純化效力有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p<0.01,持續(xù)2分鐘和3分鐘的純化效力無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p>0.05。棉紗布濾墊組,1分鐘(81.2±1.10)%<2分鐘時(shí)(83.2±1.10)%<3分鐘時(shí)(86.0±1.41)%,其中,持續(xù)1分鐘和2分鐘的純化效力比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p<0.05,持續(xù)2分鐘和3分鐘純化效力比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p<0.01。不同純化方法獲取的脂肪細(xì)胞在形態(tài)和數(shù)目比較上無(wú)明顯差異。隨機(jī)選取經(jīng)棉紗布濾墊處理過(guò)的脂肪組織切片中的深染組織,未發(fā)現(xiàn)混有棉纖維。不同純化方法獲取的脂肪組織中含SVF細(xì)胞數(shù)目比較:材料濾墊組>棉紗布濾墊組>離心組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p<0.01但活細(xì)胞比例無(wú)明顯差異,p>0.05。流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)純化處理后的脂肪組織中所含的間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)目:材料濾墊組>棉紗布濾墊組,但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p>0.05。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提示:材料濾墊組和棉紗布濾墊組的移植脂肪在不同時(shí)間點(diǎn)炎癥因子的濃度和周脂素蛋白免疫染色無(wú)明顯差異。且形態(tài)上觀察,12周后,脂肪組織的平均空泡直徑要小于對(duì)照組,雖然單位面積上平均空泡數(shù)量沒(méi)有差別。結(jié)論1、本實(shí)驗(yàn)通過(guò)紡粘-熔噴技術(shù)獲得了預(yù)期的SMS10非織造纖維膜,經(jīng)過(guò)親水處理制作出了符合臨床需求的復(fù)合層濾墊。2、根據(jù)國(guó)家目前醫(yī)療器械和醫(yī)用材料的GB/T16886系列標(biāo)準(zhǔn),SMS10材料的生物相容性良好。3、親水改性后SMS10材料未發(fā)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞的增殖及生長(zhǎng)有毒性影響,也未發(fā)現(xiàn)材料對(duì)細(xì)胞有促凋亡作用。4、SMS10材料濾墊法