《生物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱

《生物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱一、課程編號：14040011適用專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)課程類別：學(xué)科專業(yè)基礎(chǔ)必修開課學(xué)期：3實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：24二、開課實(shí)驗(yàn)室：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室三、實(shí)驗(yàn)教材及參考書教材：盧新華主編，《機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)》第二版，世界圖書出版社，出版時(shí)間，2011年參考書目：吳士良主編，《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》第一版，科學(xué)出版社，出版時(shí)間，2006年四、實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的和要求1.實(shí)驗(yàn)前預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)講義與有關(guān)理論，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、預(yù)期的結(jié)果、操作關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)，計(jì)劃安排實(shí)驗(yàn)工作時(shí)間。勤于動手細(xì)心操作，認(rèn)真觀察實(shí)驗(yàn)變化過程與記錄原始數(shù)據(jù)，善于理論聯(lián)系實(shí)踐，綜合分析實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象與準(zhǔn)確解釋并得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論，及時(shí)完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2.掌握各項(xiàng)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本操作技能：生化物質(zhì)的分離、制備、分析和鑒定等基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)及原理；各種常用玻璃儀器的洗滌和使用，如刻度吸量管的使用；離心機(jī)、電泳系統(tǒng)、分光光度計(jì)等常規(guī)儀器的原理及使用。3.掌握以下各項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)基本原理和基本技術(shù)：實(shí)驗(yàn)基本操作訓(xùn)練、蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)與蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測定方法；蛋白質(zhì)電泳技術(shù)；檢測影響酶活性因素的方法；分離純化與鑒定糖原的方法分光光度計(jì)的使用與定量實(shí)驗(yàn)。五、考核形式要求實(shí)驗(yàn)成績占總評成績的20%，其中實(shí)驗(yàn)報(bào)告成績與實(shí)驗(yàn)操作考核成績各占10%。

六、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目及要求序號實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱實(shí)驗(yàn)類型實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)每組人數(shù)實(shí)驗(yàn)要求目的要求1基本操作訓(xùn)練、蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)和酪蛋白等電點(diǎn)的測定驗(yàn)證420必修掌握一般玻璃儀器的洗滌法和刻度吸量管的使用。蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)性質(zhì)。蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測定。2醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)綜合420必修掌握電泳技術(shù)的原理及醋酸纖維薄膜電泳操作技術(shù)。3溫度、酸堿度、激活劑與抑制劑對酶活性的影響驗(yàn)證420必修掌握溫度、pH、激活劑與抑制劑對酶活性的影響。4肝糖原的提取、鑒定與定量綜合420必修掌握提取動物肝糖原的方法，通過實(shí)驗(yàn)觀察饑餓和飽食對肝糖原含量的影響。5分光光度法、分光光度計(jì)的使用及血糖的測定綜合420必修掌握分光光度法原理及分光光度計(jì)的使用。掌握鄰甲苯胺法測血糖。6分子生物學(xué)技術(shù)（電教）演示220必修了解常用分子生物學(xué)技術(shù)7實(shí)驗(yàn)操作考核綜合220必修檢查學(xué)生實(shí)際操作能力實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)基本操作訓(xùn)練、蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)、蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測定目的和要求：刻度吸量管的使用；通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步了解蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)性質(zhì)，熟悉操作方法，分析和判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：認(rèn)識刻度吸量管、掌握選用原則及使用方法；訓(xùn)練用1ml、2ml、5ml等刻度吸量管準(zhǔn)確吸取1ml、2ml、5ml自來水，放入試管中，然后用1ml吸量管取0.5ml硫酸銅溶液分別加入上述試管中，用不同的方法混勻；蛋白質(zhì)分子是兩性電解質(zhì)，pH＜pI，使蛋白質(zhì)帶正電荷；pH＞pI，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷；蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)所帶的正負(fù)電荷相等，凈電荷為零，此時(shí)溶解度最小，容易聚沉。用酸與堿分別滴入蛋白質(zhì)溶液，借助酸堿指示劑初步判斷蛋白質(zhì)帶電荷狀況及等電點(diǎn)范圍。用不同濃度醋酸與醋酸鈉溶液配制成不同pH值溶液，觀察酪蛋白在不同pH值溶液中的溶解狀況，推理出蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)二醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)目的和要求：了解電泳的一般原理，掌握醋酸纖維薄膜電泳操作技術(shù)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)大都低于7.0，在pH8.6的緩沖液中它們電離成負(fù)離子，在電場中向正極移動。將醋酸纖維薄膜浸泡于pH8.6的緩沖液中，血清蛋白質(zhì)點(diǎn)樣后，進(jìn)行電泳，由于各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、分子量、分子形狀不一，在同一電場中的遷移率不同而將其分離。實(shí)驗(yàn)三溫度、酸堿度、激活劑與抑制劑對酶活性的影響目的和要求：加深對酶的化學(xué)本質(zhì)的認(rèn)識；了解溫度、pH、激活劑與抑制劑對酶活性的影響。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：酶活性易受環(huán)境溫度的影響。在最適溫度時(shí)，酶促反應(yīng)速度最快。高于或低于最適溫度時(shí)，反應(yīng)速度逐漸降低。溫度過高時(shí)可引起蛋白質(zhì)變性，導(dǎo)致酶的失活。大多數(shù)動物酶的最適溫度為37～40℃。酶活性易受環(huán)境pH的影響極為顯著。通常各種酶只有在一定的pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活性。在最適pH時(shí)，酶促反應(yīng)速度最快，過酸或過堿都會使酶的活性降低，甚至使酶蛋白變性失活。不同酶的最適pH不相同。酶活性還受激活劑與抑制劑的影響；如氯離子為唾液淀粉酶的激活劑，銅離子為其抑制劑。實(shí)驗(yàn)四肝糖原的提取、鑒定與定量目的和要求：掌握提取動物肝糖原的方法及鑒定，了解糖原定量的方法。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：飽食后動物肝臟糖原含量豐富，加三氯醋酸后將小鼠肝臟研磨成勻漿，利用糖原不溶解于乙醇的原理，沉淀肝糖原并離心分離，加熱水溶解之成溶液，用H+作為催化劑水解提取物，再用班氏試劑進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)五分光光度法、分光光度計(jì)的使用與血糖的測定目的和要求：了解分光光度法，掌握分光光度計(jì)的使用。掌握鄰甲苯胺法測定血糖的原理及方法，掌握血糖測定的臨床意義及正常值。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：分光光度法是利用物質(zhì)特有的吸收光譜，對物質(zhì)進(jìn)行鑒定和測定其含量的技術(shù)。分光光度法依據(jù)的原理是Lambert-Beer定律，設(shè)計(jì)出分光光度計(jì)，通過測定樣品溶液對一定波長光線的吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，可計(jì)算得出樣品溶液的濃度。學(xué)習(xí)分光光度計(jì)的基本構(gòu)造，學(xué)習(xí)使用分光光度計(jì)，利用分光光度計(jì)檢測樣品溶液的濃度。鄰甲苯胺催化葡萄糖生成藍(lán)綠色的shiff’s堿，利用分光光度計(jì)比色定量。實(shí)驗(yàn)六電教目的和要求：了解分子生物學(xué)常用技術(shù)電教內(nèi)容：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)操作考核目的和要求：檢查學(xué)生實(shí)際操作能力。考核內(nèi)容：利用分光度法測定CuS