《生物化學》實驗教學大綱

《生物化學》實驗教學大綱一、課程編號：14040011適用專業(yè)：臨床醫(yī)學課程類別：學科專業(yè)基礎必修開課學期：3實驗學時：24二、開課實驗室：基礎醫(yī)學部生物化學實驗室三、實驗教材及參考書教材：盧新華主編，《機能實驗學》第二版，世界圖書出版社，出版時間，2011年參考書目：吳士良主編，《生物化學與分子生物學實驗教程》第一版，科學出版社，出版時間，2006年四、實驗教學目的和要求1.實驗前預習實驗講義與有關理論，明確實驗目的、原理、預期的結果、操作關鍵步驟及注意事項，計劃安排實驗工作時間。勤于動手細心操作，認真觀察實驗變化過程與記錄原始數(shù)據(jù)，善于理論聯(lián)系實踐，綜合分析實驗現(xiàn)象與準確解釋并得出實驗結論，及時完成實驗報告。2.掌握各項生物化學實驗的基本操作技能：生化物質的分離、制備、分析和鑒定等基本實驗技術及原理；各種常用玻璃儀器的洗滌和使用，如刻度吸量管的使用；離心機、電泳系統(tǒng)、分光光度計等常規(guī)儀器的原理及使用。3.掌握以下各項生化實驗基本原理和基本技術：實驗基本操作訓練、蛋白質的兩性反應與蛋白質等電點的測定方法；蛋白質電泳技術；檢測影響酶活性因素的方法；分離純化與鑒定糖原的方法分光光度計的使用與定量實驗。五、考核形式要求實驗成績占總評成績的20%，其中實驗報告成績與實驗操作考核成績各占10%。

六、實驗項目及要求序號實驗項目名稱實驗類型實驗學時每組人數(shù)實驗要求目的要求1基本操作訓練、蛋白質的兩性反應和酪蛋白等電點的測定驗證420必修掌握一般玻璃儀器的洗滌法和刻度吸量管的使用。蛋白質的兩性反應性質。蛋白質等電點的測定。2醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質綜合420必修掌握電泳技術的原理及醋酸纖維薄膜電泳操作技術。3溫度、酸堿度、激活劑與抑制劑對酶活性的影響驗證420必修掌握溫度、pH、激活劑與抑制劑對酶活性的影響。4肝糖原的提取、鑒定與定量綜合420必修掌握提取動物肝糖原的方法，通過實驗觀察饑餓和飽食對肝糖原含量的影響。5分光光度法、分光光度計的使用及血糖的測定綜合420必修掌握分光光度法原理及分光光度計的使用。掌握鄰甲苯胺法測血糖。6分子生物學技術（電教）演示220必修了解常用分子生物學技術7實驗操作考核綜合220必修檢查學生實際操作能力實驗一實驗基本操作訓練、蛋白質的兩性反應、蛋白質等電點的測定目的和要求：刻度吸量管的使用；通過實驗進一步了解蛋白質的兩性反應性質，熟悉操作方法，分析和判斷實驗結果。實驗內(nèi)容：認識刻度吸量管、掌握選用原則及使用方法；訓練用1ml、2ml、5ml等刻度吸量管準確吸取1ml、2ml、5ml自來水，放入試管中，然后用1ml吸量管取0.5ml硫酸銅溶液分別加入上述試管中，用不同的方法混勻；蛋白質分子是兩性電解質，pH＜pI，使蛋白質帶正電荷；pH＞pI，使蛋白質帶負電荷；蛋白質在等電點時所帶的正負電荷相等，凈電荷為零，此時溶解度最小，容易聚沉。用酸與堿分別滴入蛋白質溶液，借助酸堿指示劑初步判斷蛋白質帶電荷狀況及等電點范圍。用不同濃度醋酸與醋酸鈉溶液配制成不同pH值溶液，觀察酪蛋白在不同pH值溶液中的溶解狀況，推理出蛋白質的等電點。實驗二醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質目的和要求：了解電泳的一般原理，掌握醋酸纖維薄膜電泳操作技術。實驗內(nèi)容：血清中各種蛋白質的等電點大都低于7.0，在pH8.6的緩沖液中它們電離成負離子，在電場中向正極移動。將醋酸纖維薄膜浸泡于pH8.6的緩沖液中，血清蛋白質點樣后，進行電泳，由于各種蛋白質的等電點、分子量、分子形狀不一，在同一電場中的遷移率不同而將其分離。實驗三溫度、酸堿度、激活劑與抑制劑對酶活性的影響目的和要求：加深對酶的化學本質的認識；了解溫度、pH、激活劑與抑制劑對酶活性的影響。實驗內(nèi)容：酶活性易受環(huán)境溫度的影響。在最適溫度時，酶促反應速度最快。高于或低于最適溫度時，反應速度逐漸降低。溫度過高時可引起蛋白質變性，導致酶的失活。大多數(shù)動物酶的最適溫度為37～40℃。酶活性易受環(huán)境pH的影響極為顯著。通常各種酶只有在一定的pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活性。在最適pH時，酶促反應速度最快，過酸或過堿都會使酶的活性降低，甚至使酶蛋白變性失活。不同酶的最適pH不相同。酶活性還受激活劑與抑制劑的影響；如氯離子為唾液淀粉酶的激活劑，銅離子為其抑制劑。實驗四肝糖原的提取、鑒定與定量目的和要求：掌握提取動物肝糖原的方法及鑒定，了解糖原定量的方法。實驗內(nèi)容：飽食后動物肝臟糖原含量豐富，加三氯醋酸后將小鼠肝臟研磨成勻漿，利用糖原不溶解于乙醇的原理，沉淀肝糖原并離心分離，加熱水溶解之成溶液，用H+作為催化劑水解提取物，再用班氏試劑進行鑒定。實驗五分光光度法、分光光度計的使用與血糖的測定目的和要求：了解分光光度法，掌握分光光度計的使用。掌握鄰甲苯胺法測定血糖的原理及方法，掌握血糖測定的臨床意義及正常值。實驗內(nèi)容：分光光度法是利用物質特有的吸收光譜，對物質進行鑒定和測定其含量的技術。分光光度法依據(jù)的原理是Lambert-Beer定律，設計出分光光度計，通過測定樣品溶液對一定波長光線的吸光度，與標準溶液相比，可計算得出樣品溶液的濃度。學習分光光度計的基本構造，學習使用分光光度計，利用分光光度計檢測樣品溶液的濃度。鄰甲苯胺催化葡萄糖生成藍綠色的shiff’s堿，利用分光光度計比色定量。實驗六電教目的和要求：了解分子生物學常用技術電教內(nèi)容：分子生物學實驗技術實驗七實驗操作考核目的和要求：檢查學生實際操作能力?？己藘?nèi)容：利用分光度法測定CuS