生物安全評估及生物安全柜的使用和檢測

生物平安評估及生物平安柜的使用和檢測上海市臨床檢驗中心葛平整理ppt所有操作人員必須經(jīng)過培訓，通過考核，獲得上崗證書；

在開始相關(guān)工作之前，應(yīng)對所從事的病原微生物及相關(guān)操作進行危險評估，根據(jù)國家對于各種微生物操作的危險等級劃分和防護要求以及危險評估的結(jié)果，制定全面、細致的標準操作規(guī)程和程序文件，對于關(guān)鍵的危險步驟設(shè)計出可行的防護措施并對這些細節(jié)了然于胸；

熟悉各級生物平安實驗室運行的一般規(guī)那么，掌握各種儀器、設(shè)備、裝備的操作步驟和要點，對于各種可能的危害應(yīng)非常熟悉；

應(yīng)掌握各種感染性物質(zhì)操作的一般準那么和技術(shù)要點。生物平安意識至關(guān)重要2整理ppt前言事件：炭疽粉末、SARS、豬鏈球菌及各地的實驗室感染。投入：各國政府對衛(wèi)生部門加大投入。實際：實驗室相關(guān)感染在各地經(jīng)常發(fā)生。3整理ppt相關(guān)文件中華人民共和國傳染病防治法〔2004〕病原微生物實驗室生物平安管理條例〔2004年11日國務(wù)院第69次常務(wù)會議通過〕可感染人類的高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本運輸管理規(guī)定〔05年12月28日衛(wèi)生部令第45號發(fā)布〕醫(yī)療廢物管理條例〔國務(wù)院第380號，2003〕人間傳染的病原微生物名錄〔中華人民共和國衛(wèi)生部令第45號〕實驗室生物平安通用要求(GB19489-2021)生物平安實驗室建筑技術(shù)標準(GB50345-2004)微生物和生物醫(yī)學實驗室生物平安通用準那么(WS233-2002)II級生物平安柜美國/國際標準(NSF/ANS145-2002),WHO生物平安手冊,第三版.2004.上海市一、二級病原微生物實驗室生物平安管理標準〔上海市衛(wèi)生局滬衛(wèi)科教〔2006〕34號〕4整理pptWHO生物平安手冊LaboratoryBiosafetyManual1stedition19831993200320045整理ppt實驗室布局

危險度評估

生物平安柜的檢測

生物平安柜的使用6整理pptBSL-2實驗室布局7整理ppt8整理ppt

上海市一、二級病原微生物實驗室生物平安管理標準

第二節(jié)設(shè)施設(shè)備

第三十四條二級病原微生物實驗室的設(shè)施設(shè)備要求

〔一〕可設(shè)在共用建筑內(nèi)，但應(yīng)相對獨立，設(shè)可自動關(guān)閉的帶鎖的門。

〔二〕實驗時門應(yīng)呈關(guān)閉狀態(tài)，在實驗結(jié)束后實驗室應(yīng)呈鎖閉狀態(tài)。實驗室的門或墻上應(yīng)有可視窗。

〔三〕在室內(nèi)應(yīng)配備生物平安柜，生物平安柜的型號應(yīng)根據(jù)實驗的工程和對象確定。生物平安柜應(yīng)放在氣流流動少，人員走動少，離出口處較遠的位置，周圍留有一定的空間。

〔四〕當對可能產(chǎn)生氣溶膠的感染性材料樣本的操作無法在生物平安柜內(nèi)進行而必須采取外部操作時，應(yīng)加裝負壓罩。9整理ppt〔五〕在所在的區(qū)域內(nèi)應(yīng)配備高壓蒸汽滅菌器，并按期檢查和驗證，作好記錄，確保消毒效果和使用平安。高壓蒸汽滅菌器的平安、計量鑒〔檢〕定和管理應(yīng)符合國家壓力容器管理的有關(guān)規(guī)定，使用人員應(yīng)作好使用記錄。

〔六〕在室內(nèi)應(yīng)設(shè)有洗眼裝置，必要時應(yīng)設(shè)緊急噴淋。

〔七〕應(yīng)保障實驗室的通風和換氣，可采用自然通風，如采用機械通風，應(yīng)保證有不少于每小時3-4次的通風換氣次數(shù)。

〔九〕在門口應(yīng)有二級生物平安防護水平實驗室標識。

10整理ppt11整理ppt微生物危險度評估

12整理ppt3風險評估及風險控制3.1實驗室應(yīng)建立并維持風險評估和風險控制程序，以持續(xù)進行危險識別、風險評估和實施必要的控制措施。3.1.2應(yīng)事先對所有擬從事活動的風險進行評估，包括對化學、物理、輻射、電氣、水災(zāi)、火災(zāi)、自然災(zāi)害等的風險進行評估。3.1.3風險評估應(yīng)由具有經(jīng)驗的專業(yè)人員〔不限于本機構(gòu)內(nèi)部的人員〕進行。中華人民共和國國家標準〔GB19489-2021〕?實驗室生物平安通用要求?13整理ppt?病原微生物實驗室生物平安管理條例?第四條國家對病原微生物實行分類管理，對實驗室實行分級管理。第五條國家實行統(tǒng)一的實驗室生物平安標準。實驗室應(yīng)當符合國家標準和要求。第二十一條一級、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。14整理ppt

第八條人間傳染的病原微生物名錄由國務(wù)院衛(wèi)生主管部門商國務(wù)院有關(guān)部門后制定、調(diào)整并予以公布；動物間傳染的病原微生物名錄由國務(wù)院獸醫(yī)主管部門商國務(wù)院有關(guān)部門后制定、調(diào)整并予以公布。?病原微生物實驗室生物平安管理條例?15整理ppt一.危害程度評估的要素〔一〕危害程度分類〔二〕病原微生物背景資料〔三〕擬從事實驗活動的危險分析〔四〕評估結(jié)論16整理ppt〔一〕病原微生物危害程度分類17整理ppt?病原微生物實驗室生物平安管理條例?第七條國家根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類：第一類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。第三類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。18整理ppt《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2004）WHO《生物安全手冊》（第三版，2004）四類：在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。1級：（低個體危害，低群體危害）不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。1級：（無或極低的個體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。三類：能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。2級：(中等個體危害，有限群體危害)能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原微生物。實驗室感染不導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。2級：（個體危險中等，群體危險低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽游镏虏?，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效的預防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。19整理ppt《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2004）WHO《生物安全手冊》（第三版，2004）二類：能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。3級：（高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原微生物。3級：（個體危險高，群體危險低）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預防和治療措施。一類：能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。4級：(高個體危害，高群體危害)能引起人類或動物非常嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原微生物。4級：（個體和群體的危險均高）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預防和治療措施。20整理ppt涉及病原微生物

法定報告?zhèn)魅静∷婕暗牟≡⑸锓ǘ▓蟾鎮(zhèn)魅静∫酝獬Ｒ妭魅静〔≡⑸飮庑掳l(fā)現(xiàn)和已消滅傳染病病原微生物

病毒細菌放線菌衣原體支原體立克次體螺旋體真菌21整理ppt臨床檢驗相關(guān)生物危險等級分布22整理ppt?名錄?有關(guān)說明國外新發(fā)現(xiàn)〔我國尚未發(fā)現(xiàn)〕傳染病病原體的操作級別完全按照國外同類標準非法定傳染病病原微生物的操作級別主要參照國際相關(guān)標準本規(guī)定中所涉及病毒的操作級別主要指野生型病原微生物，重組體另加說明23整理ppt?名錄?有關(guān)說明根據(jù)國內(nèi)的實際情況，有些病原體的防護標準低于國外病原體國內(nèi)國外乙型肝炎病毒BSL-2BSL-3丙型肝炎病毒BSL-2BSL-3腎綜合征出血熱病毒BSL-2BSL-3乙型腦炎病毒BSL-2BSL-3登革病毒BSL-2BSL-3戊型肝炎病毒BSL-2BSL-324整理ppt25整理ppt26整理ppt病毒培養(yǎng)：指病毒的別離、培養(yǎng)、滴定、中和試驗、活病毒及其蛋白純化、病毒凍干以及產(chǎn)生活病毒的重組試驗等操作。利用活病毒或其感染細胞〔或細胞提取物〕，不經(jīng)滅活進行的生化分析、血清學檢測、免疫學檢測等操作視同病毒培養(yǎng)。使用病毒培養(yǎng)物提取核酸，裂解劑或滅活劑的參加必須在與病毒培養(yǎng)等同級別的實驗室和防護條件下進行，裂解劑或滅活劑參加后可比照未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的防護等級進行操作。動物感染實驗：指以活病原微生物感染動物的實驗。?名錄?有關(guān)說明27整理ppt

未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作：指未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料在采用可靠的方法滅活前進行的病毒抗原檢測、血清學檢測、核酸檢測、生化分析等操作。

滅活材料的操作：指感染性材料或活病毒在采用可靠的方法滅活后進行的病毒抗原檢測、血清學檢測、核酸檢測、生化分析、分子生物學實驗等不含致病性活病毒的操作。

無感染性材料的操作：指針對確認無感染性的材料的各種操作，包括但不限于無感染性的病毒DNA或cDNA操作。28整理ppt在保證平安的前提下，對臨床和現(xiàn)場的未知樣本檢測操作可在BSL-2或以上防護級別的實驗室進行，涉及病毒別離培養(yǎng)的操作，應(yīng)加強個體防護和環(huán)境保護。要密切注意流行病學動態(tài)和臨床表現(xiàn)，判斷是否存在高致病性病原體，假設(shè)判定為疑似高致病性病原體，應(yīng)在相應(yīng)生物平安級別的實驗室開展工作。對未知樣本的操作29整理ppt大量活菌操作：實驗操作涉及“大量〞病原菌的制備，或易產(chǎn)生氣溶膠的實驗操作〔如病原菌離心、凍干等〕?！按罅卡暤牟≡苽?，是指病原菌的體積或濃度，大大超過了常規(guī)檢測所需要的量。比方在大規(guī)模發(fā)酵、抗原和疫苗生產(chǎn)，病原菌進一步鑒定以及科研活動中，病原菌增殖和濃縮所需要處理的劑量。樣本檢測：包括樣本的病原菌別離純化、藥物敏感性實驗、生化鑒定、免疫學實驗、PCR核酸提取、涂片、顯微觀察等初步檢測活動?；魜y弧菌：因?qū)偌最悅魅静?，流行株按第二類管理，涉及大量活菌培養(yǎng)等工作可在BSL-2實驗室進行；非流行株歸第三類。有關(guān)細菌、真菌實驗活動的說明30整理ppt本表未列出之病毒和實驗活動，由各單位的生物平安委員會負責危害程度評估，確定相應(yīng)的生物平安防護級別。如涉及高致病性病毒及其相關(guān)實驗的應(yīng)經(jīng)國家病原微生物實驗室生物平安專家委員會論證。未列出的病原微生物31整理ppt在衛(wèi)生部發(fā)布有關(guān)的管理規(guī)定之前，對于人類病毒的重組體〔包括對病毒的基因缺失、插入、突變等修飾以及將病毒作為外源基因的表達載體〕暫時遵循以下原那么：〔1〕嚴禁兩個不同病原體之間進行完整基因組的重組；〔2〕對于對人類致病的病毒，如存在疫苗株，只允許用疫苗株為外源基因表達載體，如脊髓灰質(zhì)炎病毒、麻疹病毒、乙型腦炎病毒等；〔3〕對于一般情況下即具有復制能力的重組活病毒，其操作時的防護條件應(yīng)不低于其母本病毒；對于條件復制型或復制缺陷型病毒可降低防護條件，但不得低于BSL-2的防護條件，例如來源于HIV的慢病毒載體，為雙基因缺失載體，可在BSL-2實驗室操作；使用人類病原微生物的重組體32整理ppt〔4〕對于病毒作為表達載體，其防護水平總體上應(yīng)根據(jù)其母本病毒的危害等級及防護要求進行操作，但是將高致病性病毒的基因重組入具有復制能力的同科低致病性病毒載體時，原那么上應(yīng)根據(jù)高致病性病原體的危害等級和防護條件進行操作，在證明重組體無危害后，可視情降低防護等級；〔5〕對于復制型重組病毒的制作事先要進行危險性評估，并得到所在單位生物平安委員會批準。對于高致病性病原體重組體或有可能制造出高致病性病原體的操作應(yīng)經(jīng)國家病原微生物實驗室生物平安專家委員會論證。33整理ppt

國家正式批準的生物制品疫苗生產(chǎn)用減毒、弱毒毒種的分類地位另行規(guī)定。生物制品用菌毒種34整理ppt〔二〕病原微生物的背景資料病原微生物的致病性和感染數(shù)量暴露的潛在后果自然傳播途徑病原微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性病原微生物的宿主從動物研究和實驗室感染報告或臨床報告中得到的信息當?shù)厥欠衲苓M行有效的預防或治療35整理ppt

不同病原微生物的致病力強弱不同，即使同類病原微生物不同菌、毒株也還可以有不同強度的致病力。高致病性病原微生物低感染劑量就可導致發(fā)病，同一微生物感染數(shù)量越大，其暴露的潛在后果也越嚴重。微生物對感染個體的致病性與被感染者的體質(zhì)、免疫狀態(tài)以及對該病原微生物的易感性有關(guān)。病原微生物的致病性和感染數(shù)量36整理ppt

暴露以后，后果的輕重取決于病原微生物的致病力和機體的抵抗力，不同屬、種、亞種、型的病原微生物，甚至不同株的病原微生物，其致病性各異。還取決于所感染病原微生物的數(shù)量，當大量病原微生物侵襲人體時，潛伏期一般較短，而病情那么較為嚴重；反之，那么潛伏期較長而病情較輕，或不發(fā)病。不同個體被傳染后，可產(chǎn)生各種不同的結(jié)局，最輕的不出現(xiàn)任何病癥、最重的發(fā)生嚴重型臨床疾病而死亡。對暴露的潛在后果評估，應(yīng)參考教科書并收集相關(guān)資料，突出個體傳染過程與結(jié)局。-隱性感染或不顯性感染或亞臨床感染

-顯性感染或臨床傳染病-是否出現(xiàn)個體最嚴重的結(jié)局，發(fā)生嚴重臨床傳染病而死亡-是否出現(xiàn)個體間的傳播2.暴露的潛在后果37整理ppt

病原微生物可通過空氣、水、食物、接觸、血液、母嬰、蟲媒、土壤等途徑傳播。每一種傳染病的傳播途徑不一定相同，同一種傳染病在各個具體病例中的傳播途徑也可以不同，同一種病原微生物也可以有一種以上的傳播途徑。通過呼吸道傳播的病原微生物容易引起不同的感染性疾病。因此，氣溶膠是引起實驗室感染的最重要因素。3.自然傳播途徑38整理ppt

病原微生物的穩(wěn)定性是指其抵抗外界環(huán)境的存活能力。病原微生物為了維持其種系的生存，可憑借其自身的結(jié)構(gòu)特點以應(yīng)對外界不利的環(huán)境。不同的微生物的穩(wěn)定性不同.對病原微生物的穩(wěn)定性評估除考慮其在自然界中的穩(wěn)定性外，還應(yīng)考慮其對物理因素與化學消毒劑的敏感性。4.病原微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性39整理ppt5.病原微生物的宿主

應(yīng)確定擬操作病原微生物的宿主，同時應(yīng)注意收集該病原微生物對實驗室常用的實驗動物的感染性的相關(guān)資料。40整理ppt6.從動物研究和實驗室感染報告

或臨床報告中得到的信息在某些病原微生物或待檢樣品危害程度相關(guān)背景信息量缺乏時，應(yīng)盡可能從病人醫(yī)學資料、流行病學資料以及樣品來源地收集有用的信息，同時可以利用動物致病性、傳染性和傳播途徑的研究數(shù)據(jù)獲取對危害評估有用的信息。41整理ppt應(yīng)收集擬操作的病原微生物的相關(guān)治療與預防措施資料，確定:是否有有效的抗生素、抗病毒藥物、化學藥物和抗血清等治療藥物和其他與該疾病有效的治療措施；是否有針對該傳染病的疫苗;同時應(yīng)考慮該疾病是否有典型的體征和可靠的診斷試劑，以用于疾病監(jiān)測，在查出可能感染時能及時進行有效的隔離與預防。還應(yīng)考慮“當?shù)亘暿欠裼袟l件進行上述有效的預防或治療。7.當?shù)厥欠衲苓M行有效的預防或治療42整理ppt〔三〕擬從事實驗活動的危險分析操作所致的非自然途徑感染病原微生物的種類、來源操作病原微生物的濃度實驗操作涉及動物的病原微生物實驗工作人員的素質(zhì)43整理ppt

因?qū)嶒灢僮鞫斐煞亲匀煌緩礁腥镜臅r機是很多，例如：對感染性材料的去除污染和處理可能導致手污染，微生物操作中釋放的較大粒子和液滴〔直徑大于100μm〕會迅速沉降到工作臺面和操作者的手上，由于手被污染而導致感染性物質(zhì)的食入或皮膚和眼睛的污染；破損玻璃器皿的刺傷，使用注射器操作不當可能扎傷而引起經(jīng)血液感染；血清樣本采集時可能噴濺和氣溶膠可產(chǎn)生呼吸道感染或誤入眼睛而發(fā)生粘膜感染；進行動物實驗時被動物咬傷、抓傷可導致感染。1.操作所致的非自然途徑感染44整理ppt2.病原微生物的種類、來源

不同屬、種、亞種、型的病原微生物，甚至不同株的病原微生物，其致病性各異，因此進行危害評估時應(yīng)考慮相關(guān)因素。另外還要考慮是否為重組毒株。45整理ppt3.病原微生物的濃度

所操作病原微生物的濃度和其可能產(chǎn)生的危害程度密切相關(guān)，對病原微生物的操作的危險性通常涉及操作的病原微生物的生長狀況以及病原微生物的數(shù)量和濃度，樣本的類型〔純培養(yǎng)物、固體組織標本、血標本、痰標本等〕以及實驗操作等因素。必須對要進行的實驗操作進行評估，選擇與危險性適合的操作技術(shù)、防擴散儀器和設(shè)施。46整理ppt

擬進行病原微生物實驗的具體實驗工程；該工程哪些實驗步驟可能導致氣溶膠產(chǎn)生或?qū)Σ僮髡咴斐晌：?；采用何種預防措施可躲避危險。同時應(yīng)該將該項評估的內(nèi)容作為制定實驗活動標準操作程序〔SOP〕的重要依據(jù)，并盡可能制定與SOP對應(yīng)的表格化操作原始記錄，以保證防范措施能正確實施。4.擬進行的實驗操作47整理ppt5.涉及動物的病原微生物實驗動物實驗室涉及病原微生物，需要考慮的因素包括：正常傳播途徑，使用的容量和濃度，接種途徑，能否和以何種途徑被排出。關(guān)于動物實驗室中使用的動物，需要考慮的因素包括：動物的自然特性，亦即動物的攻擊性和抓咬傾向性，自然存在的體內(nèi)外寄生蟲，易感的動物疾病，播散過敏原的可能性等。對使用野外捕捉的野生動物應(yīng)考慮潛伏感染的可能性。48整理ppt

應(yīng)對所有涉及病原微生物操作的工作人員的知識背景、工作經(jīng)驗、工作能力、個人心理素質(zhì)以及健康狀態(tài)進行評估。對實驗室管理者還應(yīng)進行管理能力與處理緊急事故能力的測評。6.工作人員的素質(zhì)49整理ppt(四)評估結(jié)論

評估結(jié)論應(yīng)考慮的要點：

各種實驗活動的危害程度及其防護措施；感染控制與醫(yī)療監(jiān)測方案應(yīng)采取的消毒滅菌方案50整理ppt得出評估結(jié)論主要步驟

根據(jù)實驗的內(nèi)容與對各實驗環(huán)節(jié)的分析，明確危害來源和危害因素；進行固有風險評估，即未采取任何控制措施之前，如果事故發(fā)生可能面臨的風險，確定危害產(chǎn)生的后果和產(chǎn)生后果的可能性。在評估中后果的嚴重程度是重要指標，對可能產(chǎn)生災(zāi)難性后果的，無論發(fā)生頻率多低，均視為高度風險。危害發(fā)生可能性的上下也應(yīng)予以重視，一些產(chǎn)生后果不嚴重但發(fā)生幾率大的危害，也屬于高度風險。對高度風險的需要立即采取行動，對中度風險的必須明確后續(xù)處理時各人的職責，對低度風險的采用常規(guī)程序處理。進行剩余風險評估，即采用旨在降低風險的控制措施后仍然存在的風險因素，列出表格上登錄的針對每項危險因素的現(xiàn)有控制措施，進行評估和監(jiān)督檢查，以確定現(xiàn)有控制措施的可靠性。確定剩余風險。在采取有效風險控制措施后，如效果很好可使固有高風險降低為中等風險；如果固有風險控制措施缺乏，那么固有低風險潛在危險將增大。剩余風險是高度的立即給予關(guān)注并解決，剩余風險是中度的應(yīng)制定改進措施短期內(nèi)給予解決，剩余風險是輕度的要長期給予關(guān)注。51整理ppt

二、針對不同類型實驗活動危害評估的原那么52整理ppt對于同一病原微生物而言，從事不同的實驗活動，操作者接觸微生物的數(shù)量、濃度、可能的感染途徑是不同的，一旦暴露，其后果也是不同的，所以對于不同的實驗活動均應(yīng)進行危害評估，以指導操作者采取適宜的生物平安防護。53整理ppt

對使用已別離并鑒定的，或來源清晰的購置或贈送的病原微生物，可根據(jù)對該病原微生物實驗室研究、疾病監(jiān)測和流行病學研究以及相關(guān)教科書或其他資料進行危害評價?！惨弧澈牟≡⑸锏奈镔|(zhì)54整理ppt

在待檢樣品信息缺乏時，可以利用病人的醫(yī)學資料、流行病學資料〔發(fā)病率和病死率資料、可疑的傳播途徑、其他有關(guān)爆發(fā)的調(diào)查資料〕以及有關(guān)標本來源地的信息，幫助確定處理這些樣本的危害程度，同時應(yīng)當謹慎地采取一些較為保守的標本處理方法。對于取自病人的標本，均應(yīng)當遵循標準防護方法，并采用隔離防護措施〔如手套、防護服、眼睛保護等〕。根底防護--處理此類標本時最低需要二級生物平安水平。標本的運送應(yīng)當遵循國家和／或國際的規(guī)章和規(guī)定。在爆發(fā)病因不明的疾病時，應(yīng)根據(jù)國家主管部門和∕或WHO制訂的專門指南，進行標本的運輸并按規(guī)定的生物平安等級進行相關(guān)操作。〔二〕含未知的病原微生物的物質(zhì)55整理ppt

對臨床檢驗或疾病監(jiān)測實驗室，在日常工作中無法判明可能別離何種病原微生物時，應(yīng)根據(jù)回憶性資料，對既往已別離的病原微生物資料以及當?shù)亓餍胁W資料進行分析，推測可能別離的病原微生物并進行危害評估。在沒有病原微生物存在與否確實切信息時，需要采用常規(guī)的預防措施。〔三〕可能含有或未含有未知的病原微生物的物質(zhì)56整理ppt

所有基因技術(shù)重組DNA技術(shù)涉及到組合不同來源的遺傳信息，從而創(chuàng)造自然界以前可能從未存在過的遺傳修飾生物體。如果這些生物體可能具有不可預測的不良性狀，一旦從實驗室逸出將帶來生物學危害。涉及到構(gòu)建或使用GMO的實驗應(yīng)首先進行生物平安評估。與該生物體有關(guān)的病原特性和所有潛在危害可能都是新型的，沒有確定的。供體生物的特性、將要轉(zhuǎn)移的DNA序列的性質(zhì)、受體生物的特性以及環(huán)境特性等都需要進行評估?！菜摹钞a(chǎn)生遺傳修飾生物體的實驗活動57整理ppt三、病原微生物實驗活動危害的再評估

在生物平安實驗室建造之前的危害評估主要用于幫助生物平安實驗室設(shè)計者與使用者確定實驗室的規(guī)模、設(shè)施與合理布局，其評估結(jié)果可能不夠詳細，與實際使用有差距。因此，在生物平安實驗室正式啟用前，應(yīng)根據(jù)實際工作進行再評估。當收集到資料說明所從事病原微生物的致病性、毒力或傳染方式發(fā)生變化時，應(yīng)對其背景資料及時變更，并對其實驗操作的平安性進行重新評估。在實驗室活動中，如增加新的研究工程，應(yīng)對該工程的實驗活動進行評估。在實驗活動中別離到原評估報告中未涉及的高致病性病原微生物，應(yīng)進行危害評估。生物平安實驗室操作人員在進行實驗活動中，發(fā)現(xiàn)其實驗過程存在原評估報告中未發(fā)現(xiàn)的隱患，或者在檢查與督察過程中發(fā)現(xiàn)存在生物平安問題，應(yīng)進行再評估。在實驗活動中發(fā)生微生物逃逸、泄露或人員感染等意外情況時，應(yīng)立即進行再評估。58整理ppt一.危害程度評估的要素〔一〕危害程度分類〔二〕病原微生物背景資料〔三〕擬從事實驗活動的危險分析〔四〕評估結(jié)論評估小結(jié)59整理ppt

二、針對不同類型實驗活動危害評估的原那么〔一〕含的病原微生物的物質(zhì)〔二〕含未知的病原微生物的物質(zhì)〔三〕可能含有或未含有未知的病原微生物的物質(zhì)〔四〕產(chǎn)生遺傳修飾生物體的實驗活動評估小結(jié)60整理ppt三、病原微生物實驗活動危害的再評估

在生物平安實驗室正式啟用前，應(yīng)根據(jù)實際工作進行再評估。當收集到資料說明所從事病原微生物的致病性、毒力或傳染方式發(fā)生變化時，應(yīng)對其背景資料及時變更，并對其實驗操作的平安性進行重新評估。在實驗室活動中，如增加新的研究工程，應(yīng)對該工程的實驗活動進行評估。在實驗活動中別離到原評估報告中未涉及的高致病性病原微生物，應(yīng)進行危害評估。生物平安實驗室操作人員在進行實驗活動中，發(fā)現(xiàn)其實驗過程存在原評估報告中未發(fā)現(xiàn)的隱患，或者在檢查與督察過程中發(fā)現(xiàn)存在生物平安問題，應(yīng)進行再評估。在實驗活動中發(fā)生微生物逃逸、泄露或人員感染等意外情況時，應(yīng)立即進行再評估。評估小結(jié)61整理ppt生物平安柜標準和使用62整理ppt平安柜各類標準：●EN12469:2000(歐盟生物平安柜統(tǒng)一標準)●NSF49:2002(美國生物平安柜標準-二級生物平安柜)●JISK3800:2000(日本生物平安柜標準)●SFDAYY0569-2005(中國國家食品藥品監(jiān)督管理局生物平安柜標準)63整理ppt執(zhí)行標準：醫(yī)藥行業(yè)標準—YY0569_2005本標準為強制性標準---2006-06-01實施本標準參考:

1)NSF/ANSI49-2002(美國)2)EN12469:2000(歐洲)

國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布

64整理ppt65整理pptYY0569-2005標準制定背景SARS之后，中國政府加強了對生物平安的管理力度，出臺了一系列的生物實驗室相關(guān)政策法規(guī)及國家/行業(yè)標準YY0569-2005?生物平安柜?也在此背景下由全國醫(yī)用臨床檢驗實驗室和體外診斷系統(tǒng)標準化委員會提出，由北京醫(yī)療器械檢驗所及局部國內(nèi)外廠家代表起草YY0569-2005?生物平安柜?由國家食品藥品監(jiān)督管理局于2005年7月18日發(fā)布；于2006年6月1日正式實施整理ppt

標準針對中國用戶的實際情況，綜合借鑒了NSF49和EN12469的要求和檢測手段:采用了NSF49標準對二級生物平安柜的分類要求，分為A1、A2、B1、B2四種類型借鑒了EN12469中針對人員防護檢測的特色檢測方法KI-Discus(碘化鉀)測試法針對中國市場的現(xiàn)狀，參考兩大標準提出了局部性能要求，例如:實時氣流顯示警報系統(tǒng)工作區(qū)三面一體成型及負壓設(shè)計以及年度維護性能檢測的要求YY0569-2005簡介整理ppt該標準共分為9個章節(jié)和6個附錄,其中附錄A和B為資料性附錄;附錄C、D、E、F為標準性附錄。其目的是控制生物平安柜的生產(chǎn)質(zhì)量，確保平安。該標準規(guī)定了平安柜的術(shù)語和定義、分類、材料、結(jié)構(gòu)和性能要求，試驗方法、檢測規(guī)那么、標志標簽、說明書、包裝、運輸和儲存的要求。生物平安柜標準內(nèi)容68整理ppt生物平安柜分類：Ⅰ~Ⅲ級生物平安柜Ⅱ級分為〔A1、A2、B1、B2〕Ⅲ級為全封閉，排出的氣體經(jīng)兩道HEPA或通過一道HEPA過濾后再經(jīng)燃燒處理69整理ppt生物平安柜分類級別類型排風循環(huán)空氣比例%柜內(nèi)氣流工作窗口進風平均速度m/s保護對象I級—可向室內(nèi)排風—亂流≥0.40使用者、環(huán)境II級A1型可向室內(nèi)排風70單向流≥0.40使用者、受試樣本和環(huán)境

A2型可向室內(nèi)排風70單向流≥0.50B1型不可向室內(nèi)排風30單向流≥0.50B2型不可向室內(nèi)排風0單向流≥0.50Ⅲ級—不可向室內(nèi)排風0單向流無工作窗進風口時，當一只手套筒取下時，手套口風速≥0.7主要是使用者和環(huán)境，有時兼顧受試樣本70整理pptBSC-1示意〔WHO)BSC-1Ⅰ級生物平安柜原理圖。A：前開口，B：可視窗，C：排風HEPA過濾器，D：壓力排風系統(tǒng)。

71整理pptⅡ級A1型平安柜(30%)---前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.40m/s;---柜內(nèi)的污染部位可處于正壓狀態(tài),且可以無負壓區(qū)域包圍;Ⅱ級A1平安柜不能用于有揮發(fā)性有毒化學品和揮發(fā)性放射性核素的實驗72整理pptⅡ級A2型平安柜(30%)---前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.50m/s;---柜內(nèi)所有的污染部位均處于負壓狀態(tài),或被負壓通道和負壓通風系統(tǒng)環(huán)繞.

Ⅱ級A1平安柜用于微量揮發(fā)性有毒化學品和痕量揮發(fā)性放射性核素為輔助劑的微生物實驗時必須連接功能適宜的排氣罩.73整理pptⅡ級A2型生物平安柜1、空氣流入速度至少--------應(yīng)該達0.38-0.51m/s2、TypeA2帶排風管路74整理pptⅡ級B1型生物平安柜適用于：含有微量揮發(fā)性有毒化學物質(zhì)或痕量放射性核素的微生物學研究A：前開口；B：窗口；C：排風HEPA過濾器；D：供風HEPA過濾器；E：負壓壓力排風系統(tǒng)；F：風機；G：送風過濾器平安柜需要有與建筑物排風系統(tǒng)相連接的排風接口75整理pptⅡ級B1型平安柜(70%)---前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.50m/s;---柜內(nèi)所有的污染部位均處于負壓狀態(tài),或被負壓通道和負壓通風系統(tǒng)環(huán)繞Ⅱ級B1平安柜用于微量揮發(fā)性有毒化學品和痕量揮發(fā)性放射性核素為輔助劑的微生物實驗76整理pptⅡ級A1、A2和B1型生物平安工作原理圖潔凈空氣室內(nèi)空氣污染空氣77整理pptⅡ級B2型平安柜(100%)---前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.50m/s;---柜內(nèi)所有的污染部位均處于負壓狀態(tài),或被直接排氣的負壓通道和負壓通風系統(tǒng)環(huán)繞Ⅱ級B2平安柜用于揮發(fā)性有毒化學品和揮發(fā)性放射性核素為輔助劑的微生物實驗78整理ppt污染空氣室內(nèi)空氣潔凈空氣Ⅱ級B2型生物平安工作原理圖79整理ppt性能柜體防泄漏HEPA完整性噪聲照度振動80整理ppt噪聲測試噪聲---<67dB1〕翻開風機和照明燈，在平安柜前面中心水平向外300㎜；工作臺上方380㎜處測量。2〕關(guān)閉風機和照明燈，如有室外排氣風機那么繼續(xù)運行，在相同位置測量背景噪聲。81整理ppt照度測試平均照度不小于650lx,每個照度實測值不小于430lx。1〕在工作臺上，沿兩內(nèi)側(cè)壁中心連線設(shè)置測量點，點間距離不超過300㎜，與側(cè)壁最小距離150㎜；2〕關(guān)燈，從一側(cè)依次測背景照度；3〕翻開燈，啟動風機，從一側(cè)依次測量照度。82整理ppt振動測試頻率在10Hz-10KHz之間，在范圍內(nèi)的凈振動小于5μm。測量平安柜氣流流速在標稱值±0.015m/s范圍內(nèi)運行時的振動83整理ppt人員保護試驗人員保護測試用微生物法或碘化鉀法,仲裁時用微生物法。84整理ppt從6個AGI-30采樣器回收到枯草芽孢桿菌的CFU數(shù)量，在每次檢測時不得超過10個。采樣時間達30min時，裂隙式空氣采樣器的平板計數(shù)不得超過5個菌落。必須重復3次試驗。對照平板必須是陽性結(jié)果。當平板含有300個以上的枯草芽孢桿菌菌落時，即為陽性。85整理ppt人員保護試驗86整理ppt產(chǎn)品保護測試在工作臺面上排滿敞開的瓊脂培養(yǎng)皿每次試驗中，在瓊脂平板上枯草芽孢桿菌的菌落數(shù)不得超過5個。必須重復3次試驗。對照平板必須是陽性結(jié)果。當平板含有300個以上的枯草芽孢桿菌菌落時，即為陽性。87整理ppt產(chǎn)品保護試驗88整理ppt防交叉污染試驗從攻擊側(cè)壁到距離側(cè)壁14in〔36cm〕之間的一些瓊脂平板可以得到枯草芽孢桿菌菌落，它們用作陽性對照。每次測試時，在大于14in〔38cm〕中心處的瓊脂平板所得到的菌落總數(shù)不得超過2個。在平安柜的左側(cè)和右側(cè)各做3次重復實驗。89整理ppt柜體抗變形試驗90整理ppt柜體抗變形試驗91整理ppt工作臺面抗變形92整理ppt前窗負載抗前傾試驗93整理ppt下降氣流流速測量試驗94整理pptA型平安柜計算流入氣流流速95整理pptB1型平安柜計算流入氣流流速96整理pptB2型平安柜計算流入氣流流速97整理ppt安裝檢驗安裝檢驗：平安柜安裝完成、位置移動后、進行安裝檢驗。檢驗工程中出現(xiàn)一項不符合要求，將判定該安全柜為安裝檢驗不合格。維護檢驗：當平安柜更換過濾器和內(nèi)部部件維修后要進行檢驗。

98整理ppt性能檢測和驗證生物平安柜安裝后平安性能根據(jù)試驗和實驗室調(diào)查,我國實驗室的排風過濾、生物平安柜，安裝后經(jīng)常規(guī)方法檢測大局部是合格的，但是也有相當大的局部生物檢測是不合格者,經(jīng)過反復試驗才能到達使用要求,對生物平安參數(shù)這是不允許的。某單位一個進口二級生物平安柜物理現(xiàn)場檢測合格，但經(jīng)生物檢測發(fā)現(xiàn)其排風過濾器有嚴重泄漏，經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)過濾有明顯傷痕。某單位進口生物平安柜在個人保護試驗驗證檢查時發(fā)現(xiàn)效果非常差，經(jīng)廠家反復調(diào)試才合格。某單位進口二級生物平安柜物理參數(shù)現(xiàn)場檢測雖然到達了標準,但生物檢測個人保護根本不合格。對幾家國產(chǎn)生物平安柜檢測結(jié)果也證明，物理檢測不能完全保證“零泄漏〞。其中包括過濾器泄漏,平安柜內(nèi)污染從操作口泄漏超標等。99整理ppt

柜體泄漏測試目的_測試平安柜柜體的防泄漏性能a)壓力計，量程為0-600Pa，精確±5Pab)肥皂溶液，由25g/L的軟肥皂的微溫蒸餾水溶液組成100整理ppt方法壓力衰減法:a)將平安柜的前窗和排氣孔封好，使平安柜成為一密封系統(tǒng)；b)給平安柜增壓到500Pa，封閉加壓空氣，30min后測定壓力。允許初始壓力下降10%，如果平安柜不能保持500Pa壓力，用肥皂泡法查找泄漏位置；101整理ppt方法肥皂泡法:沿平安柜壓力通風系統(tǒng)的所有焊縫、襯墊、套接處和封口處的外外表噴或涂刷檢漏儀液體，小的泄漏會出現(xiàn)氣泡，如果從孔中吹出檢測液體而未形成泡，那么可能發(fā)生大的泄漏，可通過輕微的氣流感覺和聲音來發(fā)現(xiàn)102整理pptHEPA過濾器系統(tǒng)泄漏測試

目的:測定平安柜過濾器安裝結(jié)構(gòu)的完整性其中包括:1)下降氣流HEPA過濾器、2)排氣HEPA過濾器、3)過濾器外罩4)框架103整理ppt1)鄰苯二甲酸二辛酯〔DOP〕;2)或與之相當?shù)囊后w即可以產(chǎn)生與DOP氣溶膠顆粒尺寸分布相同氣溶膠顆粒的液體;如：聚α-烯烴〔PAO〕、二(2-乙基已基)癸二酸酯、聚乙二醇，以及藥物級的輕礦物油。

試劑104整理ppt檢測儀器

a)線性或?qū)?shù)標尺的氣溶膠光度計，標示出含100%上升氣流的10μg/L多分散氣溶膠微粒的濃度，能檢測1×10-3%同一氣溶膠的微粒，光度計應(yīng)按其生產(chǎn)商的使用說明進行校準；b)氣溶膠發(fā)生器，發(fā)生器壓力計的最大量程為0-550kPa，分辨率和精確度為7kPa。發(fā)生器壓力計由生產(chǎn)廠家校準或按照廠家的使用說明校準。105整理ppt試驗方法

將氣溶膠發(fā)生器的壓力調(diào)至最小140kPa，使用DOP或與之相當?shù)囊后w產(chǎn)生氣溶膠。注意:發(fā)生器噴嘴浸入液體的深度應(yīng)不超過25mm。ａ〕翻開平安柜的風機和燈〔A1/A2和B2類型平安柜：下降氣流過濾器測試〕，去掉過濾器的擴散裝置和保護蓋，放置發(fā)生器，將氣溶膠引入平安柜。使產(chǎn)生均勻分布的HEPA過濾器的上升氣流。引入氣溶膠的方式應(yīng)確保其在平安柜氣流中充分混合；106整理ppt試驗方法b)翻開光度計，按廠商使用說明進行調(diào)整；c)對HEPA過濾器含有氣溶膠的上升氣流進行取樣,證實該濃度的氣溶膠的光散射強度至少應(yīng)等于10μg/LDOP的光散射強度；107整理pptNSF49vs.YY0569整理pptNSF49vs.YY0569要求NA氣流警報作為生物挑戰(zhàn)備用檢測NA碘化鉀人員保護檢測工作臺面以上36cm工作臺面以上36cm人員保護噴霧器的位置要求要求要求微生物挑戰(zhàn)異常氣流檢測型式檢測出廠檢測+型式檢測壓力檢測適用性500Pa500Pa柜體完整性/壓力檢測要求要求氣流模式檢測/煙霧示蹤工作臺面幾何中心工作臺面幾何中心振動檢測方法工作臺面以上38cm,柜體前方30com

工作臺面以上38cm,柜體前方30com噪音取點要求67dBA67dBA噪音合格要求距側(cè)壁15cm,檢測點間距30cm距側(cè)壁15cm,檢測點間距30cm照度檢測方法650lux,背景照度110lux±50lux650lux,