中藥制劑分析中藥制劑中各類(lèi)化學(xué)成分分析課件

第五章中藥制劑中各類(lèi)化學(xué)成分分析第一節(jié)生物堿類(lèi)成分分析生物堿

*生物體內(nèi)含氮有機(jī)化合物，堿性一、概述含生物堿成分的制劑常選生物堿為檢測(cè)指標(biāo)*一般具有強(qiáng)烈的生理活性，不少還有毒性，臨床使用須十分慎重（一）生物堿在植物界的分布

1、發(fā)育較低級(jí)的植物類(lèi)群中生物堿分布很少；

2、發(fā)育較高級(jí)的植物類(lèi)群中生物堿分布很廣：

①裸子植物：如麻黃科麻黃屬、松柏科松屬等;②被子植物(單子葉)：如百合科、石蒜科等；

③被子植物(雙子葉)：如毛茛科、罌粟科、木蘭科、小檗科等；3、生物堿類(lèi)型越特殊，其分布的植物類(lèi)群越窄（二）生物堿的存在形式1、主要存在形式：①游離堿；②鹽類(lèi)；③酰胺類(lèi)；④N-氧化物；⑤氮雜縮醛類(lèi)；⑥烯胺、亞胺等.2、形成鹽類(lèi)的酸：草酸、檸檬酸、鹽酸、硫酸與硝酸等（三）生物堿的分類(lèi)

*來(lái)源分類(lèi)：鴉片生物堿、麥角生物堿

*化學(xué)分類(lèi)：托品烷生物堿，異喹啉生物堿

*生源結(jié)合化學(xué)分類(lèi)：鳥(niǎo)氨酸系，賴(lài)氨酸系，苯丙氨酸和酪氨酸系，色氨酸系，鄰氨基苯甲酸系，組氨酸系黃連小檗堿、藥根堿、巴馬丁、黃連堿黃柏小檗堿、藥根堿、木蘭花堿麻黃麻黃堿、偽麻黃堿、去甲麻黃堿、甲基麻黃堿馬錢(qián)子馬錢(qián)子堿、偽馬錢(qián)子堿、番木鱉堿（士的寧）偽番木鱉堿制川烏烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿延胡索延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片堿、黃連堿苦參苦參堿、槐定堿、槐果堿、氧化苦參堿山豆根苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿金雀花堿防己粉防己堿、防己諾林堿、輪環(huán)藤酚堿、木蘭堿二、結(jié)構(gòu)特征與理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征含N雜環(huán)，含N側(cè)鏈吡啶類(lèi)毒芹、煙草喹啉類(lèi)金雞鈉異喹啉類(lèi)黃連、罌粟、嗎啡吲哚類(lèi)番木鱉、毒扁豆咪唑類(lèi)毛果蕓香嘌呤類(lèi)茶葉托烷類(lèi)顛茄、洋金花、古柯其他麻黃、烏頭、秋水仙按氮原子所在基本母核的化學(xué)結(jié)構(gòu)分類(lèi)（二）理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)（1）顏色多數(shù)無(wú)色如

小檗堿藥根堿共軛體系長(zhǎng)、有助色團(tuán)的可呈色（2）形態(tài)多數(shù)為結(jié)晶性固體有些小分子的呈液態(tài)（煙堿、檳榔堿)麻黃堿具有揮發(fā)性咖啡因具有升華性檳榔堿煙堿咖啡因麻黃堿2.溶解性難溶于水易溶于有機(jī)溶劑易溶于水難溶于有機(jī)溶劑例鹽酸嗎啡Ch.P.（2010）【性狀】本品在水中溶解，在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中幾乎不溶。例鹽酸麻黃堿Ch.P.（2010）【性狀】本品在水中易溶，在乙醇中溶解，在三氯甲烷或乙醚中不溶。液體生物堿和一些小分子固體生物堿既溶于水也可溶于有機(jī)溶劑例鹽酸小檗堿Ch.P.（2010）【性狀】本品在熱水中溶解，在水或乙醇中微溶，在三氯甲烷中極微溶解，在乙醚中不溶。季銨型生物堿易溶于水、難溶于鹽酸溶液；季銨型生物堿鹽難溶于水3.沉淀反應(yīng)H+常用生物堿沉淀劑碘化汞鉀、碘化鉍鉀、碘-碘化鉀、氯化金、氯化汞、鐵氰化鉀、硅鎢酸、磷鎢酸、磷鉬酸苦味酸、四苯硼鈉、雷氏鹽（硫氰酸鉻鹽）沉淀劑沉淀顏色K2HgI4KBiI4I2-KIH3PO4·12MoO3苦味酸白↓黃↓橙↓褐-暗褐↓藍(lán)↓（NH3·H2O）黃白黃↓4.顯色反應(yīng)常用顯色劑硫酸、硝酸、甲醛硫酸、釩硫酸、鉬硫酸、氯酸鉀、三氯化鐵、香草醛、對(duì)二甲氨基苯甲醛例鹽酸罌粟堿Ch.P.（2010）【鑒別】（3）取本品5mg，加甲醛硫酸試液1ml，溶液應(yīng)無(wú)色或顯淡黃色，漸漸變成深玫瑰紅色，最后變成紫色（嗎啡或嗎啡的酯化物立即顯紫色或紫堇色）。N.....5.堿性影響堿性強(qiáng)弱因素電子雜化方式電效應(yīng)立體結(jié)構(gòu)（1）氮原子上電子雜化方式的影響＞四氫異喹啉異喹啉腈＞＞＞（pKb4.5）（pKb8.6）（2）電效應(yīng)與堿性強(qiáng)弱的關(guān)系電效應(yīng)（誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)）氮原子上電子云密度↑

堿性↑氮原子上電子云密度↓

堿性↓甲胺氨＞（pKb3.4）（pKb4.25）去甲麻黃堿苯異丙胺＞（pKb4.2）（pKb5.0）奎寧pKb29.7pKb15.07茶堿咖啡因（弱酸性）（pKb14.15）嗎啡（兩性）鹽酸（3）立體結(jié)構(gòu)與堿性的關(guān)系利血平（pKa6.07）6.紫外吸收特征延胡索乙素7.旋光性

多數(shù)具有旋光性（l）鹽酸麻黃堿、硫酸奎寧、氫溴酸山莨菪堿（d）鹽酸偽麻黃堿、硫酸奎尼?。╠l）硫酸阿托品三、定性鑒別（一）理化鑒別制劑中某些干擾成分可有假陽(yáng)性反應(yīng)蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)H+麻黃堿不能與生物堿沉淀劑反應(yīng)→↓例馬錢(qián)子散Ch.P.（2010）【處方】馬錢(qián)子（沙燙）適量（含士的寧8.0g），地龍93.5g?！捐b別】取本品1g，加濃氨試液數(shù)滴及三氯甲烷10ml，浸泡數(shù)小時(shí)，濾過(guò)，取濾液1ml蒸干，殘?jiān)酉←}酸1ml使溶解，加碘化鉍鉀試液1~2滴,即生成黃棕色沉淀。

TLC法是Ch.P.中藥制劑常用鑒別方法，大多用硅膠為吸附劑1.TLC法（二）色譜法鑒別

硅膠是弱酸性吸附劑，會(huì)吸附生物堿，用中性展開(kāi)劑時(shí)，Rf

小，并會(huì)產(chǎn)生斑點(diǎn)拖尾現(xiàn)象

防止斑點(diǎn)拖尾的措施C.改用其他吸附劑（例堿性氧化鋁）B.用硅膠鋪板時(shí)加堿液（例氫氧化鈉）A.展開(kāi)劑中加入堿性試劑（例氨水、二乙胺、吡啶）苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨126331例萬(wàn)氏牛黃清心丸Ch.P.（2010）為黃色熒光斑點(diǎn)游離、提取成鹽、提取游離、提取溶解士的寧對(duì)照品馬錢(qián)子堿對(duì)照品鹽酸麻黃堿對(duì)照品三氯甲烷-乙醇-環(huán)己烷(3:1:1)例九分散Ch.P .（20 10）【處方】馬錢(qián)子粉，麻黃，乳香（制），沒(méi)藥（制）稀碘化鉍鉀茚三酮顯色2.PC法（Ch.P.應(yīng)用不多）顯色方法熒光生物堿沉淀劑

（不宜用H2SO4）3.HPLC法以tR為定性參數(shù)，對(duì)照品對(duì)照一般與含量測(cè)定同時(shí)進(jìn)行四、含量測(cè)定化學(xué)方法重量法容量法儀器方法光譜法色譜法總生物堿→單體生物堿生物堿類(lèi)成分供試液常用制備方法

多根據(jù)生物堿堿性（可與酸成鹽）及溶解性（多數(shù)游離生物堿易溶于低極性有機(jī)溶劑難溶于水，生物堿鹽易溶于水和極性有機(jī)溶劑），固體制劑可先用醇類(lèi)提取，提取液濃縮后加酸溶解，濾過(guò)酸不溶物，酸水液調(diào)pH9以上，加三氯甲烷萃取，萃取液濃縮至適量。液體制劑（固體制劑亦可）可直接堿化后用三氯甲烷提取，濃縮。如果雜質(zhì)多，可將濃縮液通過(guò)氧化鋁柱等凈化。（二）酸堿滴定法*酸堿滴定法*非水堿量法（一）重量法例

昆明山海棠片Ch.P.（2010）【含量測(cè)定】取本品60片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取約7g，精密稱(chēng)定，置200ml錐形瓶中，加硅藻土1.4g，混勻，加乙醇70ml，加熱回流40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾渣加乙醇50ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，合并濾液，置水浴上蒸干，殘?jiān)欲}酸溶液（1→100）30ml，置水浴上攪拌使溶解，放冷，濾過(guò)，殘?jiān)儆名}酸溶液（1→200）同法提取3次（20ml、15ml、15ml），合并濾液于分液漏斗中，加氨試液使溶液呈堿性，用乙醚振搖提取4次（40ml、30ml、25ml、20ml），合并乙醚液，用水振搖洗滌2次，每次10ml，乙醚液濾過(guò)，醚液置已在100℃干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在低溫水浴上蒸去乙醚，殘?jiān)?00℃干燥至恒重，稱(chēng)定重量，計(jì)算，即得。例顛茄酊Ch.P（2005）【含量測(cè)定】精密量取本品100ml，蒸至約10ml，如有沉淀析出，可加乙醇適量使溶解，用0.1mol/L硫酸溶液10ml分次洗滌容器，合并洗液，用三氯甲烷分次振搖提取，每次10ml，至三氯甲烷層無(wú)色，合并三氯甲烷液，用0.1mol/L硫酸溶液10ml振搖洗滌，洗液并入酸液中，加過(guò)量的濃氨試液使成堿性，迅速用三氯甲烷分次振搖提取，至生物堿提盡。如發(fā)生乳化現(xiàn)象，可加乙醇數(shù)滴，每次得到的三氯甲烷液均用同一的水10ml洗滌，棄去洗液，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，并在80℃干燥2小時(shí)，殘?jiān)尤燃淄?ml，必要時(shí)，微熱使溶解，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml，置水浴上加熱，除去三氯甲烷，放冷，加甲基紅指示液1～2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3）。本品每1ml含生物堿以莨菪堿計(jì)，應(yīng)為0.28~0.32mg。471.測(cè)定方法（二）非水堿量法（1）

原理＋48（2）

方法溶劑冰醋酸、醋酐滴定液

HClO4（0.1mol/L）指示終點(diǎn)電位法結(jié)晶紫492.適用范圍Kb10-8

～10-10

冰醋酸Kb10-10

～10-12

冰醋酸+醋酐Kb＜10-12

醋酐弱堿（Kb＜10-8）50氫鹵酸鹽的含量測(cè)定酸性較強(qiáng)排除氫鹵酸干擾方法難解離（三）光譜法1.直接測(cè)定法

適用于藥味較少、干擾不大的制劑2.比色法（1）酸性染料比色法（2）苦味酸鹽比色法（3）雷氏鹽比色法（4）異羥肟酸鐵比色法（1）酸性染料比色法+A.原理A有機(jī)溶劑離子對(duì)B.影響因素pH↓H++In-→HIn*

酸性染料以分子狀態(tài)存在pH↑BH+→B＋H+*

生物堿游離，進(jìn)入有機(jī)相*沒(méi)有足夠的H+與生物堿結(jié)合a.水相的最適pH值優(yōu)點(diǎn)

*與離子對(duì)形成氫鍵，提取率高

*不與水相混溶

*

A樣大b.有機(jī)溶劑的選擇常用三氯甲烷c.酸性染料的選擇要求

*與有機(jī)堿定量結(jié)合

*所成離子對(duì)在有機(jī)溶劑中溶解度大，且有較高的吸光度

*

染料不溶或難溶于有機(jī)溶劑常用

溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚綠、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)、甲基橙d.水分的影響干擾*使有機(jī)相混濁，A↑

*

帶入水相染料，A↑排除*加脫水劑（無(wú)水Na2SO4）

*用濾紙過(guò)濾（2）苦味酸鹽比色法苦味酸（三硝基苯酚）例萬(wàn)氏牛黃清心丸中黃連總堿的含量測(cè)定buffer等量拌勻甲醇提取揮干溶解、定容溶解鹽酸小檗堿對(duì)照品法（3）雷氏鹽比色法A.原理生物堿在一定pH溶液中能成為BH+，可與雷氏鹽的陰離子

[Cr(NH3)2(SCN)4]-結(jié)合成為單鹽或

雙鹽沉淀，只要測(cè)得雷氏鹽的吸光度，即可計(jì)算生物堿的含量硫氰酸鉻銨NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]·H2O檳榔堿結(jié)構(gòu)中只含有1個(gè)N，與雷氏鹽反應(yīng)的沉淀組成受pH值的影響較小奎寧酸性較小，生成單鹽酸性較大，生成雙鹽與雷氏鹽反應(yīng)的沉淀組成受pH值的影響較大利血平堿性較小酸性較大或小均生成單鹽小檗堿結(jié)構(gòu)中有幾個(gè)季銨N，與幾分子沉淀劑結(jié)合B.測(cè)定方法直接法H+(定量過(guò)量)剩余法H+生物堿雷氏鹽剩余的雷氏鹽例產(chǎn)婦康顆粒中益母草總生物堿含量測(cè)定定容超聲蒸干成鹽、溶解攪拌H+(定量過(guò)量)過(guò)濾鹽酸水蘇堿對(duì)照品對(duì)照法Ch.P（2000）（測(cè)定剩余雷氏鹽）（4）異羥肟酸鐵比色法Fe3+/3紅色水解AOR－C－ORH2NOHOR－C－NH－OHFe3+/3H+OR－C－NH－OFe3+/3紅色OR－C－OH水解例附子注射液中酯型生物堿含量測(cè)定烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)曲線法A525nm游離提取蒸干溶解定容OH-（四）色譜法1.TLCS法例九分散中士的寧的含量測(cè)定Ch.P（2000）點(diǎn)樣

λS=254nmλR=325nm游離提取成鹽游離提取揮干CHCl3士的寧對(duì)照品對(duì)照法2.HPLC法固定相硅膠-C4或C8或C18流動(dòng)相甲醇-水或乙腈-水RP-HPLCOHOH應(yīng)注意

固定相Si-OH的復(fù)蓋率復(fù)蓋率越高，分離效果越好

通常硅膠上Si-OH數(shù)量約為6~8/nm2。在硅膠上直接鍵合烷基，平均鍵合量4/nm2，C4可得到最佳復(fù)蓋，而C18只有2/nm2復(fù)蓋率小，易引起拖尾，解決方法（1）改進(jìn)流動(dòng)相

A.加抑制劑（三乙胺）掩蔽Si-OH基C.調(diào)整流動(dòng)相的pH值

改變流動(dòng)相離子強(qiáng)度及促進(jìn)離子對(duì)相互作用B.加季銨鹽（溴化四甲基胺）D.加離子對(duì)試劑

當(dāng)生物堿在酸性條件下以陽(yáng)離子存在時(shí)，離子對(duì)試劑的陰離子與之形成中性離子對(duì)，掩蔽了生物堿的堿性基團(tuán)，使其不與Si-OH作用（辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉）（2）改進(jìn)固定相B.對(duì)固定相采取封尾技術(shù)

例鍵合后用三甲基氯硅烷（TMCS）

作封尾處理，減少殘余羥基，增加單體覆蓋率A.選用碳鏈較短鍵合相硅膠填料

例

C4或C8例舒風(fēng)定痛丸中士的寧含量測(cè)定流動(dòng)相正己烷-二氯甲烷-無(wú)水甲醇-三乙胺47.547.550.4例燒傷止痛膏中小檗堿含量測(cè)定流動(dòng)相乙腈-0.045mol/LKH2PO4（pH5.0）4357含0.013mol/L十二烷基硫酸鈉3.GC法*適用于揮發(fā)性、遇熱穩(wěn)定生物堿類(lèi)*生物堿鹽在約325℃急速加熱下即游離，故分離測(cè)得的均為游離生物堿*提取、純化時(shí)應(yīng)避免加熱第二節(jié)黃酮類(lèi)成分分析山楂消食健胃，行氣散瘀白果斂肺定喘，止帶濁，縮小便陳皮理氣健脾，燥濕化痰黃芩清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎銀杏葉斂血，平喘，活血化瘀，止痛槐花涼血止血，清肝瀉火滿山紅止咳，祛痰橘紅散寒，燥濕，利氣，消痰一、概述***γ-酮22-苯基ACB（一）結(jié)構(gòu)特征色原酮兩苯環(huán)通過(guò)三碳相連C6-C3-C6吡喃UV吸收強(qiáng)二、結(jié)構(gòu)特征與理化性質(zhì)

黃酮類(lèi)化合物是指基本母核為2-苯基色原酮（2-phenylchromone）類(lèi)化合物，現(xiàn)在則是泛指兩苯環(huán)通過(guò)中央三碳鏈相互聯(lián)接而成的一系列化合物。黃酮類(lèi)化合物大多以苷的形式存在甘草苷（二氫黃酮類(lèi)）芹菜素（黃酮類(lèi)）二氫槲皮素（二氫黃酮醇類(lèi)）山萘素（黃酮醇類(lèi)）銀杏素（雙黃酮類(lèi)）葛根素（異黃酮類(lèi)）紅花苷（查耳酮類(lèi)）兒茶素（黃烷-3-醇類(lèi)）無(wú)色矢車(chē)菊素（黃烷-3,4-醇類(lèi)）飛燕草素（花色素類(lèi)）（二）理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)

有色結(jié)晶性固體旋光性

二氫黃酮類(lèi)

二氫黃酮醇類(lèi)

二氫異黃酮類(lèi)黃酮苷均有旋光性，一般為左旋體2.溶解度難溶于水易溶于有機(jī)溶劑易溶于水難溶于有機(jī)溶劑酚羥基↑，水中溶解度↑

213456783.酸堿性酚羥基（1）弱酸性↑，酸性↑

C7

或

C4′-OH酸性最強(qiáng)OHOH1′2′3′4′5′6′OHC5-OH酸性最弱楊梅素槲皮素木犀草素黃芩素芹菜素12345葛根素淫羊藿苷O12（2）極弱堿性可與強(qiáng)酸成鹽而顯特殊顏色H2SO4或HCl····烊鹽1-O4.顯色反應(yīng)（1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)紅~紫紅Mg(Zn)異黃酮類(lèi)、查耳酮類(lèi)的鹽酸-鎂粉反應(yīng)為負(fù)反應(yīng)，但在鹽酸中也會(huì)顯紅色（2）與金屬鹽的配位反應(yīng)鋁鹽（Al3+）、鋯鹽（Zr4+）鉛鹽（Pb2+）、鍶鹽（Sr2+）

芹菜素木犀草素有熒光Al3+、Zr4+能與大多數(shù)黃酮類(lèi)藥物產(chǎn)生黃綠色熒光+

醋酸鉛堿式醋酸鉛黃色↓紅色↓硝酸鋁三氯化鋁二氯氧化鋯黃色配位物+有熒光交叉共軛5.紫外光譜特征苯甲?；諑Б?40~285nm桂皮?；諑Б?00~400nmACB葛根素（異黃酮類(lèi)）甘草苷（二氫黃酮類(lèi)）Ⅰ帶

304~350Ⅱ帶250~270芹菜素Ⅰ帶

358~385Ⅱ帶250~270山萘素Ⅰ帶低強(qiáng)峰或帶Ⅱ的肩峰

Ⅱ帶245~2705，7，4′-三羥基異黃酮5，7，4′-三羥基二氫黃酮5，7，4′-三羥基黃酮5，7，4′-三羥基黃酮醇4，2’，4′-三羥基查爾酮4，6，4′-三羥基橙酮5，7，4′-三羥基3-O-鼠李糖花青素苷?qǐng)D不同類(lèi)型黃酮類(lèi)化合物的紫外光譜三、定性鑒別（一）顯色反應(yīng)1.鹽酸-鎂粉反應(yīng)黃酮類(lèi)的經(jīng)典反應(yīng)

為避免中藥提取液本身顏色的干擾,可注意觀察加入鹽酸后升起的泡沫顏色.如泡沫為紅色，即示陽(yáng)性。例大山楂丸Ch.P.（2010）【處方】山楂（黃酮類(lèi)）、六神曲、麥芽【鑒別】（2）取本品9g，切碎，加乙醇40ml,加熱回流10分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，加熱使溶解，加正丁醇15ml振搖提取，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，濾過(guò)。取濾液1ml，加少量鎂粉與鹽酸2~3滴，加熱4~5分鐘后，即顯橙紅色。2.與金屬鹽的配位反應(yīng)常用試劑硝酸鋁，三氯化鋁，二氯氧化鋯鄰二-OH(B環(huán))OHOHOHC3-OH、C4=OOHC5-OH、C4=O例銀黃口服液Ch.P（2000）【處方】金銀花提取物，黃芩提取物【鑒別】（1）取本品1ml，加5%硝酸鈉溶液與10%硝酸鋁溶液各0.3ml，生成黃色沉淀；再加5%氫氧化鈉溶液使成堿性，沉淀即溶解，溶液顯棕紅色。（2）取本品0.1ml，加水10ml，搖勻，取溶液2ml，加5%二氯氧化鋯溶液1~2滴，溶液顯黃色，再加鹽酸1~2滴，黃色不褪。鋯-枸櫞酸反應(yīng)（區(qū)分C3-OH或C5-OH）鮮黃黃色褪色鋯-鹽酸反應(yīng)（區(qū)分B環(huán)有無(wú)鄰二-OH）褪色槲皮素黃色黃色芹菜素例黃芩提取物Ch.P（2005）

本品為黃芩經(jīng)提取干燥制得的粉末。【鑒別】取本品少量，加水2ml，滴加氫氧化鈉試液1滴，溶液顯橙黃色，滴加稀醋酸，使溶液顏色基本褪去，然后再滴加5%二氯化氧鋯溶液1滴，溶液顯黃色，加稀鹽酸顏色不褪。B環(huán)無(wú)鄰二-OH例銀黃口服液Ch.P（2000）【處方】金銀花提取物，黃芩提取物【鑒別】（2）取本品0.1ml，加水10ml，搖勻，取溶液2ml，加5%二氯氧化鋯溶液1~2滴，溶液顯黃色，再加鹽酸1~2滴，黃色不褪。B環(huán)無(wú)鄰二-OH（二）薄層色譜法常用吸附劑硅膠弱極性藥物聚酰胺含游離羥基及其苷類(lèi)纖維素多糖苷類(lèi)混合物1.硅膠薄層色譜樣品極性大

Rf

小

展開(kāi)劑極性要大樣品極性小

Rf大

展開(kāi)劑極性要小樣品極性越大，越易被硅膠吸附含羥基越多，越容易產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象措施

*鋪板時(shí)加堿液

*展開(kāi)劑加酸、水

*改用聚酰胺TLC法例

二陳丸中橙皮苷的鑒別Ch.P.（2010）100:17:133cm20:10:1:18cm制備N(xiāo)aOH2.聚酰胺薄層色譜

黃酮類(lèi)分子中的酚羥基與聚酰胺分子中的酰胺基形成氫鍵

因酚羥基的數(shù)目、位置的不同使形成氫鍵的能力有差異而得到分離聚酰胺

屬于氫鍵吸附影響聚酰胺吸附力的因素1.樣品分子中酚羥基越多，吸附力↑

2.樣品的共軛雙鍵越多，吸附力↑3.樣品能形成分子內(nèi)氫鍵，吸附力↓4.溶劑極性大，吸附力↓例

益心酮片中總黃酮鑒別Ch.P.（2010）（山楂葉提取物）乙醇-丙酮-水(7:5:6)顯色例

雙黃連顆粒中黃酮的鑒別Ch.P.（2010）

（金銀花、黃芩、連翹）醋酸四、含量測(cè)定（一）總黃酮含量測(cè)定1.直接UV法2.比色法與金屬離子絡(luò)合顯色

蘆丁(蕓香苷)-蕓香糖例復(fù)方蘆丁片中蘆丁的含量測(cè)定——直接UV法【處方】蘆丁、維生素CC對(duì)=0.2mg/ml稀釋用無(wú)水蘆丁制備標(biāo)準(zhǔn)曲線VitC的λmax為243nm測(cè)定供試品研細(xì)至50ml量瓶△含量計(jì)算含水蘆丁無(wú)水蘆丁蘆丁·3H2O當(dāng)干擾物也有UV吸收時(shí)解聯(lián)立方程法（銀黃口服液）

二（三）波長(zhǎng)分光光度法（小兒熱咳喘口服液）導(dǎo)數(shù)光譜法差示分光光度法等例

益心酮片Ch.P（2000）

山楂葉提取的總黃酮總黃酮測(cè)定方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法以蘆丁為對(duì)照品與金屬離子絡(luò)合顯色后比色法UV或FR（二）單體黃酮類(lèi)成分的含量測(cè)定1.薄層色譜法薄層色譜－分光光度法薄層掃描法硅膠聚酰胺纖維素制備標(biāo)準(zhǔn)曲線例銀黃注射液中黃芩苷測(cè)定－薄層色譜-比色法(點(diǎn)樣)正丁醇-乙酸-水(5:1.5:5)定位(吸集器)(刀片)測(cè)定測(cè)定供試品

將測(cè)得供試液吸光度（A樣）代入回歸方程，計(jì)算供試液濃度定位正丁醇-乙酸-水(5:1.5:5)測(cè)定(吸集器)(刀片)2.HPLC法色譜柱

C18流動(dòng)相甲醇-水-醋酸乙腈-水檢測(cè)器

UV或FR第三節(jié)醌類(lèi)成分分析苯醌萘醌菲醌蒽醌一、概述蒽醌大黃，首烏，蘆薈，番瀉葉菲醌丹參苯醌黃精醌萘醌紫草二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征黃精醌2,6-二甲氧基苯醌（鳳尾草）苯醌萘醌胡桃醌紫草素丹參酮ⅡA落羽松酮菲醌蒽醌12345678910ααααββββ蘆薈大黃素大黃酸大黃素甲醚茜草素番瀉苷A蒽醌蒽酚蒽酮（還原）蒽醌的氧化態(tài)蒽醌的還原態(tài)（二）理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)（1）小分子醌類(lèi)具有揮發(fā)性（2）游離醌類(lèi)具有升華性（3）溶解性游離蒽醌OH-鹽H++糖苷易溶于熱水、甲醇、乙醇難溶于水易溶于有機(jī)溶劑易溶于水難溶于有機(jī)溶劑2.弱酸性茜草素pKa11.5pKa7.6酚羥基*酚羥基位置

β-OH

＞α-OH*有羧基取代

酸性↑＞＞*酚羥基個(gè)數(shù)↑

酸性↑大黃酚大黃酸大黃素茜草素＞＜∨3.顯色反應(yīng)（1）堿性條件下的呈色反應(yīng)含羥基蒽醌類(lèi)遇堿顯紅色（Borntr?ger反應(yīng)）羥基蒽醌類(lèi)綠藍(lán)紫紅OH-H+（褪色或析出沉淀）Borntr?ger反應(yīng)例天麻首烏片Ch.P（2000）【處方】天麻、白芷、何首烏、熟地黃、丹參、川芎、當(dāng)歸、蒺藜、桑葉、墨旱蓮等14味

【鑒別】（1）取本品20片，除去包衣，研碎,加乙醚20ml，振搖10分鐘，放置20分鐘，濾過(guò)，濾液呈黃色，取濾液10ml，置分液漏斗中，加氫氧化鈉試液5ml，輕輕振搖，水層顯紅色，再加稀鹽酸5ml，使水層呈酸性，振搖后水層由紅色變?yōu)闊o(wú)色。

還原型的蒽酚或蒽酮遇堿不立即呈紅色，被氧化為蒽醌后才顯紅色。蒽酚蒽酮（H2O2）蒽醌→紅色羥基蒽醌黃棕色檢查藥物中是否含有羥基蒽醌類(lèi)成分黃色→NaOH水層漸變紅色[O]還原型蒽醌[蒽酚、蒽酮]例決明子Ch.P（2005）【鑒別】（2）取本品粉末0.5g，加稀硫酸20ml與三氯甲烷10ml，微沸回流15分鐘，放冷后，移入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，加氫氧化鈉試液10ml，振搖，放置，堿液層顯紅色。如顯棕色，則分取堿液層加過(guò)氧化氫試液1～2滴，再置水浴中加熱4分鐘，即顯紅色。例千柏鼻炎片Ch.P（2000）【處方】千里光2424g、卷柏404g、羌活16g,決明子242g、麻黃81g、川芎8g、白芷8g

【鑒別】（3）取本品10片，除去糖衣，研細(xì),加入乙醚20ml，振搖